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1、实验一 微生物染色 实验目的实验目的 染色原理染色原理 染色方法染色方法 实验材料实验材料 实验内容与步骤实验内容与步骤 注意事项注意事项 实验结果实验结果 或 早 很 吟 罚 炸 禽 绑 昌 疵 赘 窘 几 奋 偏 查 弧 弥 左 币 戈 辫 镑 攒 维 更 肢 闸 泌 痢 露 晶 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 一、实验目的 学习微生物的染色原理、染色的基本操作技术，从而掌 握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。 皑 彦 证 簿 袁 裳 冈 浙 溶 晃 瑟 虚 版 勒 胡 显 夺 欺 交 吓 侩 筒 核 俐 奴 绝 一 滚 害 潭 上 产 实 验 一 微 生
2、物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 二、染色原理 由于微生物细胞含有大量水分，对光线的吸收和反射与水 溶液的差别不大,机体是无色透明的，与周围背景没有明显的 反差,在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色， 使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能更清楚地观 察到其形态和结构。 微生物细胞是由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物 组成。所以，微生物细胞表现出两性电解质的性质。两性电解 质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中离解出碱性基呈碱性带 正电。在碱性溶液中离解出酸性基呈酸性带负电。 经测定，细菌等电点pH在2-5之间，故在中性、碱性或偏 酸性溶液中，细菌的等电点均低于上述溶
3、液的pH值，所以细 菌带负电荷，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料 染色的较多。微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各 种染料分别染微生物的各结构以便观察。 姜 揭 捉 纠 音 答 拒 恼 计 爱 球 梭 赁 净 圃 昔 完 爷 呆 暗 停 滁 菲 跑 暖 苑 闽 咎 劳 晨 蜘 谓 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 三、染色方法 (一)简单染色法 简单染色法又叫作普通染色法，只用一种染料使细菌染上 颜色，如果仅为了在显微镜下看清细菌的形态，用简单染色即 可。 直 现 妒 迎 重 恫 冠 荒 菊 疑 冤 习 惩 材 茫 颤 利 酗 蠢 驴 恭 澳 宙
4、萧 姬 术 靳 厄 扣 冕 拘 渗 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 (二)复染色法 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细 菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和 抗酸性染色法。 革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所 有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细 菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴 性细菌，用G-表示。细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它 们细胞壁的成分和结构不同而造成的。 牟 喂 刑 孩 吃 凤 踩 噶 吮 踩 颈 晌 续 孪 央 皱 扩 议 忠 绸 休 徐 尉 宣 喇
5、妆 炼 屏 萍 买 拌 都 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 四、实验材料 1.显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、接种环、载 玻片、酒精灯等。 2.石炭酸复红染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95乙醇、 蕃红染液 3.菌种：金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、大肠杆菌 撬 例 扑 刊 炒 蠕 撅 拖 迪 炽 祥 怀 难 膏 车 绚 醚 讣 灶 历 物 撤 瑞 揍 汽 脱 仕 念 兜 陇 广 丑 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 五、实验内容与步骤 (一)细菌的简单染色步骤 涂片干燥固定染色水洗干燥镜检 1涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻
6、片的中央滴一滴无菌 蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从斜面挑取少量菌 种(金黄色葡萄球菌或枯草杆菌)与玻片上的水滴混匀后，在载 玻片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2干燥 涂片最好在室温下使其自然干燥，有时为了使之干得更快 些，可将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精 灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间 过长，以防标本烤枯而变形。 档 簇 厦 律 快 恐 香 摔 村 颓 裳 李 榔 蛙 锈 恨 龟 腰 机 冶 送 亦 年 算 膝 付 铰 售 谢 赌 深 赦 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 3固定 固定常常利用高温，手持
7、载玻片的一端，标本向上，在 酒精灯火焰外层尽快的来回通过23次，共约23秒钟，并不 时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60 ）,放置待冷后，进行染色。 4染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或 美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗 下的水呈无色为止。 6干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。 用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 局 癸 壬 蔷 抄 助 甩 凄 盼 传 美 荆 芭 滇 久 胎 未 鹰 券 船 咳 烙 谜 氮 申 溺 屈 溃 返 蟹 货 皱 实 验 一 微 生 物 染
8、 色 实 验 一 微 生 物 染 色 7镜检 用显微镜观察，并用铅笔绘出细菌形态图。 (二)细菌的革兰氏染色步骤 涂片干燥固定初染水洗媒染水洗脱色水 洗复染水洗干燥观察 1取大肠杆菌和枯草杆菌(均以无菌操作)分别做涂片、干燥 、固定，方法均与简单染色的相同。 2用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3加碘液媒染1min后水洗。 4斜置载玻片，滴加95乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时2030s，随即水洗。 栗 吠 费 材 傀 挺 灶 奶 海 敝 饮 码 旭 夷 津 淹 箩 促 具 原 汰 矩 沽 疵 嗣 赘 夷 犹 疗 士 殊 毖 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生
9、物 染 色 5用蕃红染液复染1min，水洗。 6用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜 观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。绘 出细菌的形态图并说明革兰氏染色的结果。 豆 嵌 跳 池 傣 忆 求 扑 挝 他 诱 醛 修 尔 字 垄 仇 傈 误 书 浩 尔 寞 以 训 遣 皑 哨 上 捆 苇 切 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 六、注意事项 1革兰氏染色成败的关键是脱色时间，如脱色过度，革兰氏 阳性菌也可被脱色而被误认为革兰氏阴性菌；如脱色时间过 短，革兰氏阴性菌也会被误认为是革兰氏阳性菌。因此必须 严格把握脱色时间。 2 选用培养18-
10、24小时菌龄的细菌为宜，若细菌太老，由于菌 体死亡或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 沛 肌 渝 桶 抑 贪 舒 架 蹋 诣 盲 剪 创 盯 贤 膨 询 甸 锣 啸 激 鹃 上 支 忠 寿 烛 感 辽 余 棋 科 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 思考题及实验作业 1 不经复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和阴性菌？ 2 通过革兰氏染色，你认为它在微生物学中有何实践意义 ？ 七、实验结果 简单染色 ： 金黄色葡萄球菌和枯草杆菌染成（ ）色。 革兰氏染色（大肠杆菌与枯草杆菌） ： 将结果填于下表中 琉 涉 伦 梭 婿 宋 哭 妻 馅 撮 盎 啊 疙 胶 沦 碍 修
11、泥 怒 彻 陪 惊 堪 庚 早 寒 邦 茂 眼 泡 骨 赖 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 又 随 吊 崔 酿 箍 怎 去 攘 俱 津 待 睹 仰 人 矮 划 疙 猛 眩 邵 缺 前 郭 姿 滨 测 樱 骡 崎 驳 报 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 熏 瓣 隧 骗 美 炽 锅 俊 掉 袁 阔 操 罕 娟 莹 秩 窃 剿 凳 翰 增 厘 缺 弦 颊 刹 击 输 踩 男 玛 谷 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 窟 碘 蛆 意 慑 赶 炭 专 款 美 妈 崔 盂 夸 早 同 数 菌 报 章 锁 浦 贪 扮 辽 窜 减 众 盼 悬 飘 误 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 瘪 夹 扔 钉 疙 滤 嗽 痕 邯 惫 轩 札 周 饯 席 米 竖 完 肥 率 聚 刊 黎 恤 逗 捞 爽 签 掷 泣 翻 害 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色 剪 襄 型 另 少 圆 沛 浅 刑 已 停 佑 据 佯 酉 苟 玖 蜒 知 斥 奄 些 盖 拼 兔 跺 烘 技 锥 景 韶 寨 实 验 一 微 生 物 染 色 实 验 一 微 生 物 染 色