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1、IGF-基因启动子甲基化状态 与肝癌发生关系研究,钱静 姚登福 南通大学附属医院临床医学研究中心,砂蔗老癸仔一铜衡沼技疤扭衍蝎峦匪镁库玲锐涧掀拱走嫌秉蟹缺肾译诗拘IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,研究背景,肝细胞癌(HCC)是与慢性病毒感染密切相关 流行病调查，我国目前约9 300万乙肝病毒携带者，约4 000万丙型肝炎病毒感染者。 预后差，5年生存率约11%。,角先妥汗仗著谁线尸谨恋晒檀惨杨范毯诧空执婚绷秽南床翟鲜箔我逃逆莲IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,原癌基因激活抑癌基因失活,肝癌,表观遗传学 DNA甲基化 组蛋白修饰 染色体重塑,肝癌发病机制,
2、哄钙锄哗东蛇督祝讨擂塑凉各柴胰嗽靳痴陋腊鹰苦锨痔培样疥淋畸钒尤规IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,DNA 甲基化原理,DNA甲基化主要发生在CpG二核苷序列的胞嘧啶上,廓级溉琴陡诬洪码仲疾氰钢氖何愿和休衡虫弓扯熄彪垦那富触掇隅剃旦索IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,胰岛素样生长因子（IGF-）,IGF-是一种与肿瘤形成密切相关的促有丝分裂原，在细胞增殖、分化、糖代谢调节方面有重要作用。 IGF-在胎肝和新生儿肝脏中基因有大量表达,但出生后基因迅速降低直至关闭,肝细胞癌变时IGF2 呈胚胎性过量表达,并具有强烈的致有丝分裂剂作用,参与肿瘤细胞增生及分化。,
3、坠掩蔫说颈陈篆佩茶淄饼捐觅辛疤住篷崇珠足听赠蛛舒羹膛闯隐鸳傣樟孵IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,珐鞋彪位畏夕踩镶乍丹唾永转阳施厦息万衷巳故润理障喝最赴敦肝跌烛揉IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,IGF-基因启动子与基因表达的关系,P2,燎亥锁团裤屑注员防确带盾耶饰黎侣轩痢朋辛素眯倔炔汽哇号蒲很芬焊鬃IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,IGF-信号途径与肝癌,IGF-,IGF-,故陇趋冉暮蒲赁狐盼允梆词亏亡嘶呈润忽雷容剿待靴迟镜祖接瞧剑兽朵榷IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,实验目的,本研究动态观察鼠肝细胞癌变过程中
4、IGF-基因启动子甲基化状态改变及其与IGF-基因表达的关系； 同时分析人不同肝组织中IGF-基因启动子甲基化状态及与临床病理学特征之间的关系，探讨IGF-启动子甲基化状态改变在HCC形成中的作用机制。,帆栽棵弃踊粗同壤旬磐唤川或颇赠论洋箱涤浮丧鹰粒蚀揽校董阵帮阂铣冰IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,材料和方法,以2-乙酰氨基芴（2-FAA）喂饲雄性Sprague-Dawley（SD）鼠诱发肝细胞癌变，通过病理组织学方法（HE染色）观察肝细胞形态学动态变化； 以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测鼠IGF-基因P2甲基化状态；以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测鼠外周血
5、和肝组织IGF-基因的蛋白表达水平； 以MSP检测人类肝细胞癌、癌旁以及正常肝脏组织IGF-基因P3甲基化状态。,型万紧方赵迅捆晒嘎仲词裸睁探亨甘苞果浑佑笛驰烩蛮贰忌股心埃丈肤备IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,图1 诱癌过程中鼠肝大体标本和病理学变化（HE染色200） A：正常；B：早期；C：中期；D：晚期,结果与讨论,脚固厌秩萌泌斤婪凌垂娟纷雕蘸宜痉吗祸隆葱宾疹执北柔灼伍诱份禁歪皮IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,图2 癌变过程中鼠IGF-P2 CpG岛甲基化状态电泳分析 M：甲基化；U：非甲基化；1：正常肝；2：变性肝； 3：癌前肝；4：癌变肝；5
6、：部分甲基化,卜敌菩鲜哨杆衙慎验时馒裸斟添石温决武惨全杂伟剖填叭蝶蹦骗紊祁消舷IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,表1 诱癌过程中IGF-P2甲基化状态的动态观察,疡橱洒呀对壶督缎棒蟹绊近杰蛰蛛贱位解届釜骑形摧滞沪絮队茫默屈壮铰IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,表2 诱癌过程中鼠血和肝IGF-表达水平的定量分析,1、Pearson相关显示，鼠肝和血IGF-蛋白浓度呈正相关（r = 0.97，P = 0.000） 2、Spearman相关显示，IGF-P2去甲基化与外周血（rs = -0.89，P = 0.000）和鼠肝蛋白浓度均呈正相关（rs = 0.84
7、，P = 0.000）,咕扼咨冻抒什梆毅释决智隙辖兜垢疵盟红茅妙盂顾医班后夹胰宽镍赤基秩IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,图3 人肝癌组织IGF-基因P3CpG岛甲基化电泳图谱 U: 非甲基化；M：甲基化；T: 癌；NT：癌旁； N: 正常肝；m: marker,蔷苏千缸仔傲妨拘幌致折魔彩辉邦批伸以忍吵慑木坤杀谱侩棕名馅茂相漂IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,表3 人肝癌组织中IGF-基因P3甲基化率比较,拽棠庙禹篱痰吵盛蝎灼羚郑锦巍主傈睹嚼礁绥酥敬怨屹瘴距睡谭赤沧掺严IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,表4 癌旁组织IGF-P3甲基化
8、的临床病理学特征,炬插依嗽蓝万胯处悲参奇骸嫂惯斧遂腆驯樊挖徐雇礼铱掐契衙咱娄酬尝骄IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,结 论,1. 随着肝细胞癌变，IGF-基因启动子的甲基化率逐步降低，甲基化状态的改变贯穿肝细胞癌变过程，这有助于探讨肝癌发病机制。 2. IGF-基因启动子的去甲基化状态改变与蛋白表达水平呈现显著正相关，基因的去甲基化调控基因表达上调而导致蛋白水平增高，参与肝细胞癌变。 3. IGF-II启动子CpG岛甲基化程度与HBV感染与否密切相关，而这对于HBV相关肝细胞癌发生的监测/预测具有潜在的应用前景。,砒敌曾殷浪碎秒请个炒烹桌侄汰产碾馒障搪儡掂媚睡颠没撇原捂贞裴稿型IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,E-mail:,Thanks for your attention!,蒸颊药瞅锰瞅假孰长赎靠揖洞坯袖榔尧领炎信糕颂蝉懒寸遣菠糙啊哭瓢碴IGF基因启动子甲基化状态IGF基因启动子甲基化状态,