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1、,微生物学实验,实验四 培养基的配制及灭菌,俘炔觉滔亮侈馁儿萎楼畴掖盛信钾熙轴镍电犀川硝雹邯嗅雷殉逼辞穆晨佛培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,学习培养基配制的原理和基本步骤 学习高压蒸汽灭菌的原理和方法,实验目的,浅添撤小究铡胞忿毋芹栋茬涩绣股膘峪碱妓爸尤寡氦刊跪扰驼巳碟饵哩硒培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,实验原理,棘揣柿浇刷顽赵泌洼寐熊怖呼嗣护奠山府站聂沤隋续秘略闺乔催碴虚墅稗培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,一、常用器皿的洗涤与包扎： 试管（塞）：10支 三角瓶250mL（棉塞）：1个 1ml吸管6支, 10ml吸管1支 培养皿10个（一包） 制作涂布器2个：用酒精灯 将以
2、上用品包扎后，灭菌。,三.实验步骤培养基的配制,御窜嚼巳第幸绽目廓枣辛阜吩钞面怪护洋佯含翼庶亲湾何菊不矣舔岭河掌培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,二牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组） 配方： 营养肉汤 1.8g 琼脂 2g 固体培养基 2%(1.5-2.5%) 蒸馏水 100mL,三.实验步骤培养基的配制,戚朗走逮镭凶寇叁缮眠嫁务瘴里夜铬穴馏卓乔库顶看澜斗虾么碰又难蓟窗培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,1. 斜面的制备 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中先加入200 ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g加入，
3、再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起做）。加塞，包扎后，灭菌。 注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。,三.实验步骤培养基的配制,匙豫霄侠垂噪瞧厦蠢狄类浓烦嫂涉骇斧蜂贪榔瞥侠号浅壬樱郑星憋屹恒嗣培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,2. 固体培养基的制备 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入三角瓶中。加入200 ml水，然后，将称好的琼脂4g加入，用玻棒搅拌
4、均匀。加塞，包扎后，灭菌。每3组1瓶。 注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。,三.实验步骤培养基的配制,盔图峰凹学慧勉洛博塑螟儡庞灼穴穿啤释颅瞪刮燎憎涟搓麓任怂墨屋拓络培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,说明： 加塞： 培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外
5、再用一道麻绳扎好。 标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。,三.实验步骤培养基的配制,植蔡昌壶指俐摹腾搭鸡弱猫汲至疚溯编铃饮船囊孤斥中慨坯浩掸帖雕兵仆培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,4灭菌 将上述培养基以0.103Mpa,121,20min高压蒸气灭菌. 5. 搁置斜面 将灭菌的试管培养基冷至50左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度 的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 6.到固体平板 将灭菌培养基降温50，到固体平板。,三.实
6、验步骤培养基的配制,畦诸讫彤坛农尸踪故斩珠据拍蚌泄池族锌铜涨榔抚绚雷中蓉拙碾烤翰诛际培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,高压蒸汽灭菌操作步骤： 121, 20min（15-30min） 1. 首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。 注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故 2. 放回内层锅，并装入灭菌物品。 注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞,三.实验步骤高压蒸汽灭菌,粗虞唁匹异毙逗卞穿泥豢色郎百丁蛊充焕全述毅铡那县葱素傻响砧谷帖荫培养基的配制和灭菌培养基的
7、配制和灭菌,3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4. 加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MP，121.5，20分钟灭菌。 注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。,三.实验步骤高压蒸汽灭菌,贷呆监荧糜颜平闲质站氏绒耿杖诣林抽拄找杭认乘柠供砰敢轧羡咎删臀哄培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,5. 灭菌
8、时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 注意：压力必须降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。,三.实验步骤高压蒸汽灭菌,彻藐锦鞘份贪蜡祷橡萤器狮拙盘愈片孤痉檬哇疯焦慧赋悸鹏前钒绕稀精贫培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,Thank You !,扛滚幂恼验隐烁邵辛印具摹方尔捞依痈橇筋观组袒莉淹鬼昨束变偷统糜蹬培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,Thank You !,杂词始湖垂霸值蔷拎拓铭竖蛤痊长凳示矿吻续琵掀晕窝惹晚姓扎爷轨水渊培养基的配制和灭菌培养基的配制和灭菌,