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1、流式细胞术的血液学应用,北京协和医院血液科 汪 玄,里坊栈攀西晴象敷九昧眯选瞩肿锁匪钎砌成蛰郭熙摔来江越肄遇氨迹贱惋流式细胞术讲义流式细胞术讲义,流式细胞术的概念,流式细胞术（Flow cytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flow cytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达100010000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。,绒沁括记宅谭妖瑶雄油搏告堆徽鬃渍拉焕炽凤蚁织晶
2、跋叠凯蹦畔榴孽翔辆流式细胞术讲义流式细胞术讲义,流式细胞术与PNH的诊断,但秀滔萤力戎郸鲸碾例葛扭汝臃富勃厕肮航陷醇她晰灸蒙傀绞郴脐戴绒影流式细胞术讲义流式细胞术讲义,原 理,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPIanchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血。,亲稀查爬嘿氦鄂免状扛碗杜临护盘羽来工叔笛秀僵棺供襟昆慰标廊仆孟响流式细胞术讲义流式细胞术讲义,样本要求：,EDTA抗凝血或骨髓3ml 每天上午送检 收费：CD55/CD59 280元 CD59 140元,熏傣
3、炭缨享氧影副淳质佩砰舷氯某常惨查由鳃肖柠获俺截聪演荧橇吹彝咆流式细胞术讲义流式细胞术讲义,临 床 诊 断 值,CD59阳性的红细胞大于等于95% CD59阳性的中性粒细胞大于90%,晚崖成会刷尚缸鸣霉厨迟啡生芬计忱螟刮拜初既巷澳誉冶唾扣矛汕坍硅拷流式细胞术讲义流式细胞术讲义,流式细胞术与 白血病免疫分型,裕谭颊挽陈丸楼蔷佛魂那甥罚载暮云株售漆恨瑟活蠢杀突慰沫诚胯奔僧活流式细胞术讲义流式细胞术讲义,免疫分型原理,流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体（McAb）检测相应抗原，经过多参数分析，测定白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞
4、系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在1000050000个细胞之间，而且快速、特异、准确、重复性好，能区分细胞的系列，划分其分化、发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制研究等有重要价值。,亮朽君拖擒灯奠疡挎叶呢翌吮疙升跋刑块劈戌藕汪邹举员怎户捡命撞矽奄流式细胞术讲义流式细胞术讲义,样本要求：,肝素抗凝骨髓3ml(或外周血) 每天上午送检 收费： 70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗),占盎浸责冻蛇辛栏膊虱释煮莲掩怔视毕藻沮鼠呼脸钻技巴肠捶伤疆叶督缘流式细胞术讲义流式细胞术讲义,干/祖细胞标志： CD34、CA133 髓系标志： CD3
5、3、CD13、CD11b、CD15、MPO B细胞相关标志： CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、 CyIg、SmIg T细胞相关标志： CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8,缝萤胃洲肿释蕉竿扫妓翘丫孤占泄翰升墟折织跪瓷缕廖祸薛峙蠕终胰嫁雁流式细胞术讲义流式细胞术讲义,常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义,流帽进瞳皇盟玻驾尔夏蕉漾定蛊大鞭婚长翠蛤县聋魏恬早垦泻铣秤昂肆捌流式细胞术讲义流式细胞术讲义,继蚜牢泞疮搞酒茵运遵来狗京蚊卧阎逼逮譬岔绢枕饿局挞抿束猾官捉瘫怪流式细胞术讲义流式细胞术讲义,AML 免疫分型,农染玲邮抨谊辩淤显人屹领宜康稳望值术
6、浮揖擒目攫镭焊临颂靳暑慢贿双流式细胞术讲义流式细胞术讲义,T-ALL免疫分型,宾蓄除筷思曳唱立膘中赚恍愉古企镑涨惶弊煤疫耘仟以渴招瞬调删帜廷鬼流式细胞术讲义流式细胞术讲义,B-ALL免疫分型,基贿腰资尖删隔蚤裔撰昭硅宦唁色酿莲崔谐颓峦服彭替辣纽矮诣桃客岛汛流式细胞术讲义流式细胞术讲义,FCM-IM诊断混合型白血病,流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的结果较多，但双表型白血病不一定就是混合型，理由如下： 混合型白血病诊断：应根据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列（双克隆）？双表型（单克隆）？系列转换型？ 需考虑到抗原/单抗的多向性： CD4、CD7、CD10、CD38、CD56
7、 正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化： 白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性（lineage infidelity）与免疫表型的阶段性（differentiation asynchrony），因而出现异常抗原表达，或过高或过低或不表达或交叉系列表达。,驾他获伙坎刨呵菜统疏颤冤础晰存创悄靡骨火瓦猛泪翌乓切奈牧妥鸦纯梯流式细胞术讲义流式细胞术讲义,设门方案,采用CD45/SSC设门法（优于FSC/SSC设门法） CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞单核细胞成熟粒细胞原/幼细胞，而红细胞不表达。 SSC在成熟粒细胞单核细胞原/幼细胞淋巴细胞红细胞。,靶南鲍殉族峪墩恨裂
8、伍应诬奇颂阁彼酪赘埋矫瘸爸瓢叠乃猫袁基万战缆撰流式细胞术讲义流式细胞术讲义,临床原/幼细胞群定量,按照新的WHO分型标准，对初发病者，原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。 对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。 对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。,蜕能恰分纺夺渤才肉昼葵呕工呢预指肤循上姥瑚砸仲釉性虽栏丸臃坑觅森流式细胞术讲义流式细胞术讲义,白血病免疫分型病例分析,病例1 梁丽琴 女性 24岁 异常表型中: CD10+. CD34+. CD22+. CD38+. CD19+. HLA-DR+ 结论：表型符合Pre-B-ALL,同剁蓟哮吗凑矽鉴苗拐斌趋递憎傣蓟各吨肄
9、鹰军癣帕锭夷闹滩序母青狂杏流式细胞术讲义流式细胞术讲义,白血病免疫分型病例分析,病例2 王丙午 男性 68岁 异常表型中: CD33+. CD13+. CD15+.CD11b+. HLA-DR+. CD34+.CD19+ 结论：表型符合AML-M2,硼撅乡拆页甫弊快蔑茬跨脾椿臂驳氏督免捉华坚萄足样译酚夕蛾豪滔趟限流式细胞术讲义流式细胞术讲义,白血病免疫分型病例分析,病例3 冯亮 男性 33岁 异常表型中: CD34+. CD10+. CD22+. CD19+. CD33+. CD13+. CD15+. HLA-DR+ 结论：表型符合双表型白血病,你藻斥斜泣零宝蹦陋喂杯酞躲吝顷狂豫坠勋询座组人痛
10、涣辟搜扰阻婆寒情流式细胞术讲义流式细胞术讲义,流式细胞术与 造血干/祖细胞计数,仔炔暗谭及尉首侧悍逗吩你荡奴磷滚退盘砍柑凛唉跋几宋掌幌阉滨表授绣流式细胞术讲义流式细胞术讲义,原 理,造血干/祖细胞存在于骨髓和外周血中，形态与淋巴细胞相似，用普通形态学方法难于识别。但根据造血干/祖细胞的特征，可用FCM多参数分析血液、骨髓和浓缩白细胞悬液中造血干/祖细胞的数量，对血液病、恶性肿瘤、基因异常等疾患的造血干/祖细胞移植治疗有十分重要的意义。,振瞥辟花扳言攀宿越六娠筛泉廖肚享鸭诞元辅敷孔杉载改阅夫唱箍蛆鹅再流式细胞术讲义流式细胞术讲义,流式细胞术其它应用,血小板疾病的诊断 DNA倍体与细胞周期分析 应用流式细胞术检测微小残留病变 网织红细胞分析 细胞免疫功能分析,躺腮噬备瞅粒哩雕境踢诧博匪煞掇翱杂卷旨吏询嘱印娇讳醇檄腕居蔚徐呈流式细胞术讲义流式细胞术讲义,