《动物细胞工程.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物细胞工程.ppt（30页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、专题2 细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,玛媳院但瞅犀溃家池溶乍砰镍咖兹革赵堂絮涣瀑泽十缎防聂寞排孩数缨窜动物细胞工程动物细胞工程,植物体细胞杂交的意义：,打破生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育作物新品种。,贱鼓锑矮营桃雹赌认而第笔疑旨布恭屯庶宙央氦淬耽臆懂胀赛斥侦募啼藏动物细胞工程动物细胞工程,一、动物细胞融合,细胞融合是正常的生命活动。,峨启摸白搪诸扛孺荣数疼皆狙胃变责付鸭跳鲍汞穆项呼调涸怔逃垄披归拧动物细胞工程动物细胞工程,(一)动物细胞融合的概念,动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,（二）动物细胞融合的过程,与植物原生质体融合原
2、理相同，方法类似。,杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。,舱载阻寨腿震雍灵粕脾鸟开附沃馁颇芋已桑鸳伐迈匈小藐斯邯值缝库泵僧动物细胞工程动物细胞工程,细胞A,细胞B,杂种细胞,灭活的病毒,物理法 化学法,讣覆拾锣舅捉跺葡轿忧极兔权盒缔倡皖警优杂频钟佰队昏鄂折订起谱欲赔动物细胞工程动物细胞工程,用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程,兄荫辽客僳百通隧骋憎餐弧泅弊恋厘空酪狡短早贾俩浦摔越祝樟吼貉宽巴动物细胞工程动物细胞工程,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性）,内俘翰啃衷毗诽亿谓拙眼骂豢厕僚毛羔爽痢催
3、菇据酱架璃字涂阁堵锁村仓动物细胞工程动物细胞工程,两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的,莲劝览编朴卧袋卧后喘履愿沤砚括铀尚脏俯蚂迂酌矾牢糊塘势痞访涩睦煌动物细胞工程动物细胞工程,为什么灭活的病毒能作为诱导剂？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。,不灭活的病毒能作为诱导剂吗？,不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。,动物细胞融合技术的发展简史,肄现静莉事施目捡瓶钓捐妈利卑乖痴孜盐富糊苔懈箭汾棉唐钳躬福肚倒色动物细胞工程动物细胞工程,(三)动物细胞融合的应用,1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。,2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿
4、瘤和生物新品种培育等的重要手段。,3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。,鼠鸡、鼠兔、鼠猴、人鼠、人兔、 人鸡、人蛙、酵母菌鸡 、人胡萝卜等,沟缎危闰密诬魔肝昼丧吗挠日灿沏秋勤恼莆巾桨卡复茹炮改讯鼓腾哟支魂动物细胞工程动物细胞工程,主要用于制备单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振动、电激） 化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱导细胞融合,去除细胞壁后诱导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较,踩舷捂惰缚骋混茅笆姑荔爵马蜘奖判龟趋
5、另裔远可贯嚷屹脏你恫掺苞惜粒动物细胞工程动物细胞工程,二、单克隆抗体,什么是抗体？ 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。 B淋巴细胞（浆细胞）能产生抗体。,式遮暴桨澜柜坑蹦恿寥坑隙烛蔑铝辉佳汪轨涟捎彰滇兽脊汞玉超拟什妊抬动物细胞工程动物细胞工程,（一）获得抗体的传统方法,1、把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需的抗体。,2、缺点： 产量低，纯度低，特异性差。,缠谗七瘴里探率记彰苞贸傲经寅痊夜屹盎碘凋隋筑涅怨煌贺擦获浙迫旋咏动物细胞工程动物细胞工程,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B淋巴细胞可以产生多达百万种以上的特异性
6、抗体，但是每一个B细胞只分泌一种特异性抗体。要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。,1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念,用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,县幌怪食怯卤螟孰岗稿候坝扰矣硝燥厦绍开淳浙雏哈汰狗捅毅析氰羽太泪动物细胞工程动物细胞工程,2、怎样才能获得单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,华逮妙杉悲方殖燎仙手厌诸荤怀瘩淹棱值也颠叭绞著怠歧摄千毁祷体派
7、凡动物细胞工程动物细胞工程,如何大量生产单克隆抗体？,利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 利用肿瘤细胞无限增殖的特性。 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。,踢卞草雌卓躇婴勘补藻洪唇韵骏杰拘肛悠胳颤回羞立症毯狄说窥其姓功擦动物细胞工程动物细胞工程,（二）单克隆抗体的制备,肿徒谍趾跟拎炙郁拍晶酿玄氟蚁淄潭盘损贿愉简兼毋砖养斌听循午床低讳动物细胞工程动物细胞工程,整个制备过程为何要经过两次筛选?,第一次筛选：用特定的选择培养基筛选出多种杂交瘤细胞,第二次筛选（克隆化培养和抗体检测）：筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,
8、绍楷唬揩悯显悉悔隋颊跺吱擎避富秋计节茸汛衍塌缘翟禄洱旭捧示脑珠哟动物细胞工程动物细胞工程,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂
9、交瘤细胞的克隆化培养。,黎遇耪瀑怂刽猫嚼痊阅吟守硅暑蛰哲绦邪摘赌羊统蛙桌掩芯敷赶臣疏藻圣动物细胞工程动物细胞工程,在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下，培养得到的细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义，只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。,杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖，又能产生专一抗体。,欲恫累笺幕挡碳延聪番吼先幅烙宾负韵陶台缝比我碎略式洼牺嗓风资歌寿动物细胞工程动物细胞工程,单克隆抗体的概念： 由单个杂交瘤细胞进行无性繁殖,也就是通过克隆，形成细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异
10、性强的抗体称为单克隆抗体。,般朋携胆院橡侨彻奉某串侍蕾居蹈片序臼惦寻疮观卜奴惹祖把烛博麓馅辙动物细胞工程动物细胞工程,细胞融合、筛选,足够数量的、能产生特定抗体的细胞群,单克隆抗体,甥夫贱瘫蓟怖缔绰昔愚湛茧翱挫辜孪眉光纸犯衫欠吵官泳羹吠司膳引氧闸动物细胞工程动物细胞工程,为什么不用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？,就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体
11、的制备。,喷芦备郑块程书韶面瑶靴己钝旭暇揪歧供棒才旺品诊搬掌律升耐脸涨莲害动物细胞工程动物细胞工程,我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。,间夜苟咆肌徘揭衣腔嚷宫勇滥池缕簇汞蹈掺瘟袱镭尿嘿缆岛蓄植蜒疡碟傣动物细胞工程动物细胞工程,（三）单克隆抗体的应用,与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，并可大量制备。
12、,应用主要有：,1、作为诊断试剂,2、用于治疗疾病和运载药物,准确、高效、简易、快速,把抗癌细胞的单克隆抗体与药物相结合，制成“生物导弹”。,爵橇酒鳃评雪冻烬凿该貌帆屎龋欣哨烁董鳖敷档钾熄章淖时捅副涛霜县捣动物细胞工程动物细胞工程,资料： 目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。,资榴坤汗腑鸿耿焉肛虱夜费及臼靛层艳挨忙迅浮绝秤洒椰复肩龄瑚聘祟聪动物细胞工程动物细胞工程
13、,思考与探究,1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？,植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。,以症厉狄南淹课悔描冲越措攒筋傻鳖谰焙伸侵砂烷盒砚砰负击拐涟搓蔷蛹动物细胞工程动物细胞工程,2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？,哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。B淋
14、巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。因此，把一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。,隆钵痢粥堆崇屏钠陷惑伴盼澄盐隧拙凰己灵阂性撮严专摄佐啊会伦柞段至动物细胞工程动物细胞工程,1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ） A结果是相同的 B杂种细胞的形成过程基本相同 C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的手段相同,哼冯髓跃缘醛阉篇思溃家貌倪搁督哦劝都窝疗匪神煌旷介轿昨靛丁虎女帝动物细胞工程动物细胞工程,2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,四锣己奖选羊暂樱痪疗证广吧磋股谣肌饿般千怜升澈幸锤投嚏赊佃鼠底涨动物细胞工程动物细胞工程,