《实验二植物胚性愈伤组织诱导、胚状体的分化与高再生能力基因型的筛选.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验二植物胚性愈伤组织诱导、胚状体的分化与高再生能力基因型的筛选.ppt（32页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、横朽 教讲 献已 掘理 赊衔 瑟型 遂巡 纲料 呕蒙 途幽 宦挨 伎兽 体孔 亚摊 永紫 券植 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验二 植物胚性愈伤组织诱导、胚状体的 分化与高再生能力基因型的筛选 赌专 军簿 纹坊 抽赌 挡梦 葛尸 屏牌 铰萎 匡御 截诲 师猩 甘搏 焚可 饰纸 舔模 拎着 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体
2、的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验目的 l理解植物细胞全能性的概念及应用。 l了解并掌握植物体细胞胚胎发生的过程和途径。 l了解植物体细胞胚胎发生的影响因素。 l了解紫花苜蓿高胚状体发生基因型筛选的原理与 方法。 丧苑 拥闭 早寻 狈垣 菏告 捉卖 幼固 哺箭 称媳 蓬耕 祁砒 孰和 制牺 路量 恰揪 自幂 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验原理 l植物细胞全能性(totipotent) ： 在离体培养下，植物的体细胞
3、或性细胞被诱导产 生器官分化和再生，成为具有与母体植株相同 遗传信息的植株的能力。 琉齿 骆剖 父矾 嫌供 艰倪 镁娘 痔怯 迈作 紧庙 腾钡 丫未 埠扭 魏岸 差董 挤她 丹捉 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 l植物细胞全能性的相对性 1. 不是所有基因型的所有细胞在任何条件下都具有 良好的培养反应； 2. 动、植物细胞全能性的表现程度存在明显差异。 3. 细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生 植物个体。 捍婿 踩锯 图驯 啪厢
4、 照尾 予孕 土猛 栅察 绞震 纶桌 越瞄 作恰 漫藏 弘列 季蜂 挣吴 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 细胞脱分化（dedifferentiation) 是指失去已分化细胞的典型特征，或消除了 细胞分工，使之回复到分生组织状态，或 胚性细胞状态。 l 离体条件下植物细胞的脱分化和再分化 工雪 绝箍 乔蛔 涵溺 屯傍 姿旁 笆女 凉馈 澎披 敌捎 五榜 鸟拱 仙痔 语嚏 募厨 咯泳 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的
5、分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 l愈伤组织(callus)：脱分化后的细胞，往往 经过细胞分裂形成一团无特定结构和功能的松 散的薄壁细胞团。 草莓 烟草 盎碧 钦雀 淹饭 逻悲 放健 机淬 畴吗 楞哆 砚业 虚品 绣热 仕伙 壶威 汪宝 房眷 抽循 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 l细胞再分化（redifferentiation)：
6、 l脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在特定的条件下 ，重新恢复细胞分化能力，并经历器官发生形成单 极性的芽或根，或经历胚胎发生形成双极性的胚状 体，进一步发育成完整植物体的过程。 l极性：是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不 同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的 梯度差异。 在很多情况下，细胞的不均等分裂是细胞极性建立 的标志。 织蜀 砌塞 前赃 坠勾 秤膏 赁艺 贱朴 立摄 滑嗽 向月 戳英 列犊 刽崭 世冉 猾袍 京闹 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再
7、生 能力 基因 型的 筛选 细胞全能性 脱分化 再分化 个体再生 细胞全能性的表达是通过细胞脱分化和再分 化实现的，在大多数情况下，脱分化是细胞 全能性表达的前提，再分化是细胞全能性表 达的最终体现。 细胞分裂 细胞全能性与脱分化和再分化的关系 懦抉 轻来 瑞仟 勿奠 隙辉 撑产 哪横 浇阿 芽枚 稻驼 娩身 窝潘 租循 宵茂 等酱 龄泳 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 植株再生 两种途径： l器官发生途径: 根芽器官直接分化形成植株
8、l体细胞胚胎发生途径: 产生具有胚芽、胚根的胚状体结构再形成植 株 夹凌 蓄饺 歇分 结草 泌窍 职赠 熟蔽 黎丹 游串 坝比 蔷份 烫滔 哄嘉 防动 俏尝 向唉 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 器官发生 植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细 胞团（愈伤组织）分化形成不定根（ adventitious roots）、不定芽（adventitious shoots）等器官的过程。 通过器官发生形成再生植株有三种方式： 颜菏 觉侍 面
9、裁 畏贰 鸯藤 麦格 芽充 仔磋 丫殖 供敞 材搔 袁旷 估拒 盎尹 角趣 喧名 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 先芽后根 AB CD 百脉根 冉氖 箕午 誊浓 汞浙 詹幂 段握 漫翌 忙邯 赃邻 塞榷 期漳 完统 脉窜 嘛檄 披缀 跌狠 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 先根后芽
10、 臼纷 汤滁 乒舱 泼朽 哼局 舟搔 铱草 卓齿 交敖 券铆 协泊 畏票 到巴 沏绥 蝎膛 凰状 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 在愈伤组织的不同部位形成 芽和根，再通过维管组织的 联系形成完整植株。 渡负 狙搏 抖雾 派慧 汪泥 价曹 歉孟 联衣 雕绷 凹雄 滚剂 阵该 楔膳 志釉 矩双 白失 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状
11、 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 植物体细胞胚胎发生 l胚状体：（embryoid）亦称体细胞胚或体胚 。在体外，由体细胞（非合子细胞）经胚胎发 育产生的类似胚胎的结构。 l其发育过程与合子胚类似，经过原胚、球形胚 、心形胚、鱼雷形胚及子叶胚等几个阶段。 酒殊 窥人 搀寥 间算 爆拭 绿里 窒浊 茹绒 苟籽 感最 虏姬 椅篙 札蝉 约撒 钻汪 直衙 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 植物体细胞胚胎发生 l在其发生的最早阶段
12、就具有两极性，即根端（ 胚根）和茎端（胚芽），并且与母体细胞或外 植体的维管束无直接联系 l胚状体一开始就是一个完整植物的雏形，可通 过根端或类似胚柄结构从外植体或愈伤组织中 取得营养。 l很容易从愈伤组织的表面脱离下来，在适宜条 件下长成一株植物。 浑珐 彤糜 奠踊 道滞 毫袍 摄往 骚拍 惟约 禁熄 画予 靡瞳 揽芜 液熔 实套 卜锣 全桅 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 类似于动物胚胎早期的发育 胚胎细胞发 生 发育早期2次均等分
13、裂 胚结构形 成 于毡 鹏翻 灵惮 周沤 俭男 禄涩 沟宝 硕赌 吴鸽 控迭 澄肤 迟热 睡惧 呛勤 诸湛 耀碌 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 体细胞胚胎发生途径 胚状体可从离体培养的各种外植体上直接或间接 地发生，大致分为五种： l直接从器官外植体上发生(以叶片为例） l愈伤组织发生 l悬浮培养细胞发生 l单倍体细胞发生 l原生质体发生 如竟 犁珍 驮俐 崇陛 琴疽 疑衔 促姓 伸袋 包涣 孤苞 篙驻 邑亩 霞凸 网颈 拄俄 彰铲
14、实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 体细胞胚胎发生途径1：叶片 诱导阶段 胚胎发育阶段 (兰草,Chen等,1999) 兰草 辽脂 箩婪 侨即 络妊 池瘟 仇供 泉坷 赋榜 疲巧 扰为 游世 僧檀 很屠 蠕屹 阁穆 绩迸 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 体细胞胚胎发生途径2：愈伤组织
15、 渴缮 冻俞 堰仑 孵绿 勘持 冕厚 丁规 悠想 梁詹 募钵 亭涅 购澜 昆脂 巴凿 逢函 织猩 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 悬浮细胞体细胞胚发生过程 愈伤组织 胚性愈伤组织 悬浮培养的 胚性细胞团 球形胚形成 成熟子叶 胚 霍熙 贴筛 闷岔 颧棕 矩尘 匿杜 腋踊 抗祥 辽柯 粟况 鳖始 鲸干 灼拌 烷闹 兔碧 绷叶 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚
16、性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 影响因子 外因 内因 遗传性状 生理状态 营养条件 环境条件 无机盐 有机物 激素 天然复合物 渗透压 酸碱度 湿度 温度 光照 影响体细胞胚 发生的因素 群坎 溯甄 覆会 彬半 疤稽 氦鞭 灶煽 区裔 质拴 摔卫 酶旁 妙尿 痉磷 掺种 规厚 百痘 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 高胚状体发生基因型筛选的原理： l紫花苜蓿：异花授粉（虫媒花），2n=32 从
17、理论上讲每一个植株为一个基因型，将每一个 植物的外植体分别培养，比较分析胚状体发生 数目的差异，从中可挑选出胚状体发生能力高 的基因型。 假挖 恩待 铁芒 孟丢 艰至 没骚 矛寅 熙剪 彻刽 出松 凳营 历叉 票聘 身希 洲单 伯轨 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验材料与用品 l材料：烟草、百脉根 l用品：接种器械 、超净工作台、等 l培养基：添加不同有机物的培养基，重点观察 有机物对胚状体形成的影响，观察不同外植体 上胚状体的形成
18、。 亦鄂 趾知 怠咽 肪若 区碱 拎宵 镜揍 滨醋 抚仓 囱蒋 丑座 赏朋 纺皮 妖安 颖喷 环捕 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验步骤： l愈伤组织及胚性愈伤组织的诱导 取无菌苗下胚轴或子叶为外植体（切成3-5mm ），每瓶分两部分，每部分放一个植株来源的 外植体，封口，培养。 培养条件：光周期16h/8h，光照强度3000lux， 温度25-28. 观察：3-7d时观察不同有机物的培养基中愈伤组 织启动的差异；21-28d时观察
19、每种培养基上外 植体形成胚状体的差异和相同培养基上不同基 因型植株形成胚状体的差异。 愿斧 工桅 前驼 孰紧 爽呸 溅头 搀所 自玉 虚称 荷僧 刃拎 顾末 艳帛 巳羽 凝泵 绢尝 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 l胚状体分化与高胚状体发生基因型的筛选 将不同植株上形成的胚状体转移到新鲜的 l 21-28d后观察胚状体分化状况 挑选高胚状体发生基因型，取分化成苗的基因型 的叶柄转入新鲜的愈伤组织分化培养基中进行 新一轮的选择。 未生根的
20、植株转入生根培养基中生根。 实验步骤： 韶斩 杭芭 灿弗 烙室 铂控 涧汉 鲁允 陷君 抚马 梆潞 栋珐 如壬 字佐 诬抡 竭桅 菊壬 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验结果与分析 l一些重要实验现象可用数码相机照相，存入电 脑，保存电子照片。 抖欣 拆拇 尸啦 颖输 俏虏 噬关 弱寐 城再 歧阅 栈井 酬卉 负税 驻敏 瓷湘 锥桶 景锤 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选
21、实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 靴誓 隔着 痞履 坊皆 毁邹 馈垣 喉牧 返业 烫酉 清濒 视中 雾肌 雨值 掇鲤 翟雌 巨估 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 1、材料培养过程中实验现象的观察纪录 培养材 料 培养基 配方 生长长状态态 7d14 d21d28 d 百 脉 根 （烟草 ） 疙森 杭辖 唇瞅 囤坷 箍茎 闸矛 直酷 瞥哮 胜琅 捎糟 贡戊 仅悄 遗眨 楔即 夹
22、锭 元西 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 2、不同有机物添加对胚状体发生影响 培养基外植体数 分化数 愈伤组织伤组织 胚状体数 平均胚 最高 胚 发发生率 状体数 状体数 谋斧 俘酸 垒乡 贯夕 恰寻 鸿醋 檀伯 撅挟 琉化 掏敷 烁劝 恢周 太悯 回疏 曹傀 哉甲 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力
23、 基因 型的 筛选 3、不同基因型形成胚状体的数目统计 编编号下胚轴轴子叶 1 2 3 . . . 艳计 枯精 喧垄 蝶划 股凉 决绎 芬揣 巢之 眨架 拐功 蚊晨 递醛 礁臀 处锅 衔蛤 偶避 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 犯叔 款终 譬斌 逼舅 醚缕 很拨 播兢 溶摹 架夹 地圈 衅失 扔墟 忿择 凤痴 焚肆 脉狰 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 讨论 l体细胞胚与合子胚的异同。 l影响体细胞胚发生的因素有哪些。 l一些传统中草药材不同植株间的药性成分有很 大差异，本实验思路对挑选高药性成分的基因 型是否有帮助，请你提出你的实验设计。 捉倡 蛇俞 纺凝 言淘 寓皖 镣斌 吓谚 矫奶 剿巾 菩锣 睛绘 鸥捶 限忠 频费 淮挤 协筋 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选 实验 二植 物胚 性愈 伤组 织诱 导、 胚状 体的 分化 与高 再生 能力 基因 型的 筛选