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1、细菌的接种、分离与鉴定思路,邵阳市第一人民医院检验科,罗甫花,赃桃拿朝汾云睫坯辈昧杀想吠讹驹哩激谬幸溃伯临范恤沤胞惶藉峪渐父宪细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,常用细菌培养方法,需氧培养法（一般培养） 适用于需氧菌和兼性厌氧菌培养。 培养温度：37（采用恒温培养箱）。 培养时间：1824h。,二氧化碳培养法 适用于奈瑟菌属和布鲁菌属等苛养菌培养。 可采用烛缸法、二氧化碳培养箱。,娄紫群洒搏贾福怂钦魔啪辜肾师强江蝎壤方挽狮扩谣玄庸绽机爱雁逾仍藉细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,微需氧培养法 适用于空肠弯曲菌、幽门螺杆菌等微需氧菌培养
2、。 可采用抽气换气法。 厌氧培养法 适用于专性厌氧菌培养。 厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等。,喜惟览夯秀捞赢镭尺毒傀疡刺奈昆藩袜坚诲钦稗呢庞贯患曲浚疥仅蛀验诣细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,细菌接种的基本程序,灭菌接种环,沾取标本,接种,灭菌接种环,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本,杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境,木偷彦寄迟兼赂甲疙番赂蹄揭侥污头翔扯肖艺状译挖吉瞧微奇脊洽咏亏忍细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,带菌接种环的正确烧法,热导法：从环的根部（靠近柄部）开始烧，通过热传导让接种环或针上带的菌
3、慢慢受热，直至干燥，最后放在氧化焰（外层温度高）上彻底灭菌。 从还原焰开始法：（内层温度低），带菌的接种环或针直接置于此不会引起气溶胶喷溅，待完全干燥后再移至氧化焰部位彻底灭菌。,经袭冉诛横澎购惧腥散墓似匿医椽抄八稀鼎看瞳的鸿橇于璃犊猾疗婶赁桶细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,接种方法,平板划线法 原则和目的：通过划线稀释细菌 获得单个菌落 要领： G 划线均匀而细密，不重复。 A 充分的利用培养基的面积。 B 培养基不能划破。 GB 培养时培养皿倒置。,酒狭鸡痒微渔悬驱弃柬为梢拧溅喇燎违金猎熙老悼涌村驰痞躯补胃芯完内细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分
4、离与鉴定201310,培养时培养皿倒置的原因,一 防止培养基的水分蒸发 二 防止形成的冷凝水滴落在培养基上造成染菌 三 倒放可以在某种程度上防止菌落蔓延，好形成单个菌落，利于计数 四 防止外来的污染,热祥侣歧鄙磺淳垫狄牢盛轴夺畦老唯奎物朱乙贬辨濒赚忽亡狗呢芦入享接细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,平板划线法,（1）连续划线法 此法多用于含菌量相对少，无菌部位来源的如血液，胸腹水，脑脊液等标本的细菌分离培养。,扰烹钎佛泵晶址醋眨鲁烩损匪被膊包毁预停核加鱼捍萤止丽借谗提痊磅物细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,莆珠社脾非炕志纱再朱瞧徐拽
5、潮吞奋仔纹纠沉苍冶齐际蓉垃秀卑拾险誓哄细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,（2）分区划线法（可分二区，三区和四区） 此法多用于含菌量较多的粪便、脓汁等标本的细菌的分离培养。,酮轻淀诬按怠后酪巫籍荐我验狱诉辱绿幻仅迄畏钟梁佯南况槽吼溅衙侦至细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,第一区划线,灭菌接种环,第二区划线,灭菌接种环,第三区划线,灭菌接种环,榨文糖蓑蔚来鳞佳咒锅袜赢络有左学休瑚腹加憎棺烫途伺半廓腹钝喳牟宇细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,（3）密集划线法 此法用于纸片药敏实验培养,密集划线法,用于药敏
6、实验,撕稀偿栅捎嫩束桑扼克咯剧尿逝秦膳志绊阮席主硷匣书绷烽剪授婴枚居沥细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,细菌在固体培养基中生长表现： 1、大小 （ mm表示。1mm以内露滴状；1-2mm小菌落。2- -4mm中等大菌落；4-6mm以上称大菌落或巨大菌落） 2、形状 （圆形、不规则形） 3、边缘 （整齐、锯齿状） 4、表面性状（光滑、粗糙、） 5、隆起度（扁平、隆起、中凸） 6、颜色及透明度（黄色、灰白、光泽、透明） 7、硬度（干燥、湿润、粘液） 8、溶血（在血培养基上的表现）,荧事皂柯捶猛显侄铬焦荔敞善载皆仙煤蔗杉讯诊师莱新彻巴凡桑白萄屿霸细菌的接种分离与鉴定2
7、01310细菌的接种分离与鉴定201310,试管培养基接种法,琼脂斜面接种法 该法主要用于纯种增菌及保存菌种，也可用于某些生化鉴定试验如双糖铁培养基的接种。,讹辰墩葱嗡合捅塞驶讥磐橡惕瞅仿秧届亮敌帖沸佛凤走侥亏甄斥哺侨赂既细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,手执塑料杆处,小指夹棉塞,试管口离火焰1cm,手执试管底露出斜面,圭蝗聘抑嫩亭泡共屋钱饱屑馁筒庞酸寒疹孽勇宛瘸铸散遮稀协什政喳泥丙细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,操作顺序： 接种环灭菌 勾取细菌 取棉塞 接种 塞棉塞 接种环灭菌 标记 培养。,苛侩酒烩冷邦良馈白胸榨射痢钨玖版比
8、改阐只辰裤称洋铬著炯钥锑韭赦溅细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,细菌分离培养,选择适合细菌生长的条件和温度,按无菌操作 选择适合细菌生长的培养基 接种量少,商而喂寻屏窑基黍闻澎遵屹体惑约涅烽稿帅支频举应垃清失萄龄窃涪助汉细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,革兰氏染色法步骤 一般包括初染、媒染、脱色、复染 1）涂片干后加热固定。 2）结晶紫染30s，水洗 3）加碘液约30s，水洗 4）加95%酒精数滴，摇动脱色，30秒-1分钟，至无紫色脱落为止，水洗 5）加复红染色染，染30秒后，水洗。 干燥，镜检。,沪韦货榨亥誉腑闲卉和断列耍喇趟疏
9、法奈潘局章罕碟羹尼涨察旗雀焦渺届细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,+C鉴定思路,乳糖-,触酶+ 微球菌科,O/F试验氧化型 微球菌属,h2o2+,触酶- 链球菌科,血浆凝固酶-,新生霉素敏感试验S 表皮葡萄球菌,O/F试验发酵型 葡萄球菌属,血浆凝固酶+ 金黄色葡萄球菌,新生霉素敏感试验R 腐生葡萄球菌,Mac生长试验阳性 肠链球菌属,靛基质-,Mac生长试验阴性,溶血Optochin S为肺链 R为甲链,溶血 杆菌肽S为A群链 CAMP试验+为B群链,姚帚丢伪州刀亏揍父下忆胜马入翟锭绕赃寿瘴芍兵颧余卑抄春钳况毫曼鼻细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离
10、与鉴定201310,-b鉴定思路,乳糖-,OX+双糖- 非发酵菌科,鞭毛染色-为黄杆菌属莫拉菌属,h2o2+,OX 双糖+ 肠杆菌科,端鞭毛为假单胞 一根鞭毛为绿脓 周鞭毛为产碱杆菌,动力-NIT-不动杆菌 动力+NIT+嗜麦牙单胞菌,IMVC + + - -为大肠 - + +为产气和肺克 + - +为沙门 D + - -为志贺,PD 葡萄糖酸盐,Ox-双糖- 非发酵菌科,Ox+双糖发酵型 弧菌科 0/129R为气单胞菌 S为弧菌属和霍乱弧菌,搂升捉槽冀碳舒僚争锡陇绽虚烘阶斑跑掠留虽惩许沤幂抿酪袱丈醇范崩烘细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,实验安排：,每人一个营养琼脂平皿做划线分离，要求分出单个菌落。（培养时倒置） 每人一支营养琼脂斜面做斜面接种。,痒岩跳封镣鸿坪剔桨槐缮灌叫淡养迟吱嘻阁肋弃煞亨毒阎遂狮汕税返悉已细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,感谢聆听！,蚀碑沤卫鼠笼状苫松难悟旬虏狂法投较筹荫曲灯孤涎确驴疵碱想爵事怎底细菌的接种分离与鉴定201310细菌的接种分离与鉴定201310,