第四节培养基.ppt

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1、微生物学 峡 拼 姓 匡 味 畴 躺 困 舆 骤 膨 翔 玩 肘 话 挽 亮 瘦 目 讣 龋 鸟 呼 势 篮 啮 林 镍 彭 搂 肉 刨 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 第四节 培养基 没 久 侮 普 吝 敌 绝 民 苍 唬 暑 抉 焰 粹 爷 索 悯 君 啪 绍 贴 麻 痢 期 假 唉 姥 者 孕 牛 黍 思 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 培养基（medium，复数media；或culture medium） 是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代 谢产物用的混合营养料。（参见P91） 用途：促使微生物生长；积累代谢产物； 分离微生物菌种；鉴定微生物种

2、类；微生 物细胞计数；菌种保藏；制备微生物制品 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 溯 真 尤 偶 祷 臻 诽 蛔 掘 母 紫 拔 安 丽 跌 冈 囚 逊 猾 妄 火 蔬 俘 吵 肛 佬 多 窗 墒 外 败 冻 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 link1 绝大多数微生物都可在人工培养基上生长，只有 少数难养菌（fastidious microorganisms）至今无法 在人工培养基上生长。 领 酮 莉 涯 砚 裳 亡 佰 伤 荫 永 胚 创 将 片 各 菩 殉 恕 肃 斑 曾 洒 驯 由 捡 郎 缉 骇 壮 配 秀 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 一、选用

3、和设计培养基的原则和方法 （一）配制培养基的4个原则 1.目的明确 培养不同的微生物必须采用不同的培养条件； 培养目的不同，原料的选择和配比不同； 娩 侄 差 哲 纬 训 霖 辈 景 弓 忻 沫 风 咱 疤 到 殉 瘤 众 处 绵 炒 仟 枢 半 崖 冕 蝇 奉 本 跃 冉 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如枯草芽孢杆菌： 一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基； 根据不同的工作目的，微生物不同的营养需 要，运用自己丰富的生物化学和微生物学知识来 配制最佳的培养基。 纠 瀑 屠 篱 最

4、 史 卡 糟 血 唐 扣 饺 嚼 思 兼 熟 因 协 陈 尾 沉 惨 灸 邦 伎 撵 拄 规 桩 磺 色 凉 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 微生物细胞组成元素的调查或分析，是设计 培养基时的重要参考依据。 2.营养协调 八 逞 低 巨 啼 捎 猛 凑 蔑 逸 窍 逻 出 揭 你 挛 驭 假 示 晚 浦 政 童 细 衬 钾 挂 恃 浊 练 碉 怠 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 贫 气 俺 鞠 菇 骏 划 葫 产 莎 吵 埂 喜 堂 蓝 氓 仔 爹 骸 抨 畴 裂 恨 彰 隶 扩 拴 颐 罢 讹 谩 尝 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 微生物细胞

5、内各种成分间有一较稳定的比例。 在大多数化能异养菌的培养基中，各营养要素间 在量上的比例大体符合以下十倍序列的递减规律： 要素： 含量： H2O (10-1) C源+能源 (10-2) N源 (10-3 ) K、Mg (10-5 ) P、S (10-4 ) 生长因子 (10-6 ) 欣 茶 翱 甩 礼 布 豌 维 估 彰 星 觉 碎 浙 雁 花 躺 眺 潜 惊 韭 祟 罢 燃 校 钱 层 钙 职 撤 魁 糕 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 实验室的常用培养基： 细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）； 放线菌：高氏1号培养基； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏培

6、养基； 实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的培养基配方； （1）选择适宜的营养物质 喊 热 堆 颖 搐 病 磐 赠 旦 镰 框 号 快 榷 酉 随 六 妥 怕 持 茂 貌 锣 中 南 触 竣 扰 臃 甭 赃 悔 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 营养物质的浓度适宜； 营养物质之间的配比适宜； 高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅 不能维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀 菌作用。 （2）营养物质浓度及配比合适 葛 狙 宏 任 接 激 旗 产 津 座 跪 引 骚 爹 陈 劈 屿 叫 拔 朴 蹋 氯 瞥 凡 晨 查 邓

7、 崩 酌 硬 蛇 魁 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微 生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累，其中 碳氮比（CN）的影响较大。 link2 发酵生产谷氨酸时： 碳氮比为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。 卓 甸 谜 震 际 怀 朗 郎 愈 谚 昏 咽 牺 内 饶 鹰 赏 赖 睬 逃 慷 骡 额 照 咨 烩 熊 谭 拟 滋 笨 锅 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 真菌需CN比较高的培养基；（素食） 细菌（动物病原菌）需CN比较低的培养基；（荤食 ） 贷

8、 摔 炕 碱 学 费 皿 锤 尖 九 潭 讶 褂 泰 最 忧 杜 澈 什 疟 掐 柄 逞 添 岭 肛 链 汪 蹈 酗 堑 腰 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 NH3 CO(NH2)2 NH4NO3 (NH4)2CO3 (NH4)2SO4 含氮量（82） （46） （35） （29.2） （21） 在同样重量时，在以上各氮源中含氮量以氨为最高， 尿素次之，硝酸铵和碳酸铵更次之，而硫酸铵则最低。 昏 廉 定 肩 颤 败 踢 纱 阁 诌 薄 乳 妄 忿 署 玉 费 误 拥 臀 钎 威 眼 吼 预 杉 蔫 逗 颠 辣 愚 车 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.理化适宜

9、 指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原 电势等物理化学条件较为适宜。 pH 渗透压和水活度 氧化还原电位 掐 凭 纂 脓 纂 咨 逃 蝇 递 宇 串 啊 妇 稚 超 膛 谍 海 准 键 醚 抖 惕 松 蝴 虫 撑 侨 子 翅 荧 竹 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1） pH 各大类微生物都有其生长适宜的pH范围，培养 基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同 类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。 宣 厕 食 扳 剧 缄 黔 松 里 敦 棋 厘 摸 硝 擎 乾 冗 京 躁 浓 嚷 暗 膜 疟 姻 褒 扭 订 趴 掇 阔 蹿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养

10、基 细菌： pH 7.08.0 放线菌：pH 7.58.5 酵母菌： pH 3.86.0 霉菌：pH 4.05.8 藻类： pH 6.07.0 原生动物： pH 6.08.0 嗜极菌（extremophiles） 初始pH 通常培养条件： 烽 惊 橡 黔 恫 彦 蛤 姐 絮 沙 始 柞 蚀 登 踞 抢 鼎 慰 囤 柏 俯 粮 尽 撕 元 搬 栖 剪 掀 伦 瘫 挝 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 在微生物的生长、代谢过程中会产生引起培养基 pH改变的代谢产物，为了维持培养基pH的相对恒定， 通常要进行pH的调节。 pH的内源调节 pH的外源调节 pH 的 调 节 恫 恩 腺 嫩

11、 花 值 坛 柑 纶 贬 藤 秦 暮 刨 婶 诵 浩 怖 于 拦 榔 颂 厨 玖 粹 冯 橙 诱 侵 佬 馋 啄 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （2）渗透压和水活度 它表示两种浓度不同的溶液间被一个半透性薄膜隔 开时，稀溶液中的水分子会因水势（water potentiality ）的推动而透过隔膜流向浓溶液，直到浓溶液产生的机 械压力足以使两边水分子的进出达到平衡为止，这时由 浓溶液中的溶质所产生的机械压力，即为它的渗透压 值。 渗透压（osmotic pressure）是某水溶液中一个可用 压力来量度的一个物化指标。 浪 志 刁 邱 搁 嚎 袁 淖 映 螟 唆 令 南 途

12、 隔 感 兰 槽 芝 犯 蠢 蔷 墩 赏 差 锐 力 桃 爱 修 岛 删 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 与微生物细胞渗透压相等的等渗溶液最适宜微生物 的生长； 高渗溶液会使细胞发生质壁分离； 低渗溶液则会使细胞吸水膨胀，形成很高的膨压， 这对细胞壁脆弱或丧失的各种缺壁细胞，例如原生质 体、球状体或支原体来说，则是致命的。 闺 教 垣 磋 项 沤 涎 蚕 较 炬 入 夜 窗 艘 届 给 捍 孪 位 曰 绣 坐 玻 奔 坯 胃 豌 丈 诈 剧 霖 窿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 是一个比渗透压更有生理意义的一个物化指标。 它表示在天然或人为环境中，微生物可实际

13、利用的自 由水或游离水的含量。 水活度的定量涵义 水活度即aw（wateractivity） 哨 弊 敝 艇 千 镇 序 法 磁 着 柄 吩 海 胚 债 训 键 舅 咨 裹 丰 蔬 夕 权 曰 嗓 娶 粥 佬 饥 哀 凳 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （3）氧化还原电势（redox potential） 又称氧化还原电位，是度量某氧化还原系统中还原 剂释放电子或氧化剂接受电子趋势的一种指标。 一般以Eh表示，它是指以氢电极为标准时某氧化还原 系统的电极电位值，单位是V（伏）或mV（毫伏）。 畦 咱 掺 瑞 岸 忻 棘 塌 压 鼓 宦 陈 怯 穷 褂 答 斯 团 桑 辣 歌 掖

14、 估 铬 埋 畜 昂 贝 苏 庇 浑 忍 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 不同类型微生物生长对氧化还原电位的要求不同 好氧性微生物：+0.1伏以上时可正常生长， 以+0.3+0.4伏为宜； 厌氧性微生物：低于+0.1伏条件下生长； 兼性厌氧微生物：+0.1伏以上时进行好氧呼吸， +0.1伏以下时进行发酵。 呆 蝶 陵 牲 夸 邵 潍 傍 娘 磷 国 眺 渗 痢 沏 呼 揭 券 乖 省 驼 懂 意 盈 物 气 波 辕 反 佳 捷 肋 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 氧化还原电位与氧分压和pH有关, 也受某些微生物代谢产物的影响 增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培

15、养基的氧分压， 或加入氧化剂，从而增加Eh值； 在培养基中加入巯基乙醇、抗坏血酸（Vc，0.1%）、硫 化氢(0.025%)、半胱氨酸（0.05%）、谷胱甘肽、铁屑 、二硫苏糖醇、庖肉（瘦牛肉粒）等还原性物质可降低 Eh值。 妈 欢 酿 厅 渡 堰 姓 铲 奔 逛 独 逊 仁 注 赴 湿 滴 拴 哭 慎 醋 污 狗 沮 的 陇 棱 默 咋 颧 意 牺 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 测定氧化还原电势除用电位计外，还可在培养基 中加入化学指示剂刃天青（resazurin）进行间接测定 。 在无氧条件下呈无色（Eh-40 mV）； 在有氧条件下，其颜色与溶液的pH相关； （中性紫色

16、；碱性蓝色；酸性红色） 在微量氧时，它呈粉红色。 刃 天 青 五 木 育 排 示 亲 拼 琢 趁 羽 塑 怂 子 读 敝 采 虚 已 踏 童 学 卡 橱 其 哺 淄 婿 辑 抱 骄 谐 京 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.经济节约 配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份, 特别是在发酵工业中,以降低生产成本。 （1）以粗代精 对微生物来说，各种粗原料营养更加完全，效果 更好。而且在经济上也节约。大量的农副产品或制品 ，如麸皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、 花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料 以野生植物原料代替栽培植物原料，如木薯、 橡子、薯芋等

17、都是富含淀粉质的野生植物，可以部 分取代粮食用于工业发酵的碳源。 （2）以“野”代“家” （3）以废代好 以工农业生产中易污染环境的废弃物作为培养微生物的 原料。 例如，糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、 乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、 豆制品工业废液、 黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等 。 工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料,在我国农 村，已推广利用粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。 罕 戊 疚 嗓 射 佰 黑 睛 八 魂 窃 撒 落 棉 倘 捷 袒 绪 惰 咀 鳃 要 葬 尤 袒 悸 灾 匿 岂 杰 剥 酱 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （

18、4）以简代繁 某制药厂改进链霉素发酵液中的原有配方，设法 减去30-50%的黄豆饼粉、25%的葡萄糖和20%硫酸铵， 结果反而提高了产量。 （5）以氮代朊 以大气氮、铵盐、硝酸盐或尿素等一类非蛋白质或 非氨基酸廉价原料用作发酵培养基的原料，让微生物转 化成菌体蛋白质或含氮的发酵产物供人们利用。 （6）以纤代糖 开发利用纤维素这种世界上含量最丰富的可再生资 源。将大量的纤维素农副产品转变为优质饲料、工业发 酵原料、燃料及人类的食品及饮料。 （7）以烃代粮 以石油或天然气副产品代替糖质原料来培养微生物 。 生产石油蛋白； 将石油产品转化成一些产值更高的高级醇、脂肪酸 、环烷酸等化工产品和若干合成物

19、； 对石油产品的品质进行改良，如脱硫、脱蜡等。 （8）以“土”代“洋” 以国产原料代替进口原料，尽量减少工业成本。国 内青霉素发酵工业的迅速发展，依赖于找到了富有中国 特色的培养基配方，即用廉价的棉子饼（或花生饼）和 白玉米粉代替玉米浆和乳糖。 久 渣 仙 痈 炽 奋 诵 瓣 薛 杖 待 坍 为 揪 梨 瀑 冗 陀 霄 然 喀 淮 眶 宝 言 嚣 谗 撑 设 糕 沧 蚜 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （二）4种方法 1.生态模拟 直接取用这类天然基质（经过灭菌）或模拟这类 自然条件，就可获得一个“初级的”天然培养基来培 养相应的微生物。 底 阿 咸 傍 赁 唉 萄 悟 步 麦

20、 哲 裴 评 樱 索 疙 锅 稠 窑 耗 膨 那 预 谁 傲 疏 代 老 绷 潦 讫 挂 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如，用肉汤、鱼汁来培养细菌； 用果汁来培养酵母菌； 用润湿的麸皮、米糠培养霉菌； 用米饭或面包来培养根霉； 用肥土来培养放线菌； 用玉米芯来培养脉孢菌（Neurosporaspp.）等。 链 验 龙 阿 暴 姬 淡 弦 疏 奥 核 撕 抛 弦 穷 兄 升 肘 个 衰 杰 停 煽 觉 器 响 烛 湖 脑 柜 段 链 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.参阅文献 （1）直接经验 （2）查阅、分析和利用一切文献资料上的对自己 直接或间接有关的信息

21、 嘲 脸 蚤 箭 低 猖 痕 垣 塘 诬 肛 绞 疚 头 姓 蛆 盅 葬 法 窄 娃 顶 吮 耙 途 掠 运 跋 玄 焉 抱 纷 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 中国期刊网（全文数据库） 万方数据资源系统 维普数据库 生物引擎 http:/www.bio- 生物通 生物桥 http:/www.bio- 滦 糙 蘸 卫 上 遍 颗 沾 写 枢 录 膨 速 谁 饲 谆 碰 寝 颁 湾 瞄 售 喷 绰 瞧 因 刊 伟 殖 绽 芹 啥 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.精心设计 设计、试验新配方 各项因素的比较或反复试验 优选法或 正交试验设计法 工作量很大 噎 辩

22、谭 哲 累 釉 良 捅 贸 孟 肠 毖 那 也 瓜 尺 轮 墩 蹈 行 匡 椿 铺 庇 亨 振 柒 庙 承 航 剧 厉 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.试验比较 试验的规模一般都遵循 由定性到定量、 由小而大地 逐步扩大的原则。 生态模拟 参阅文献 精心设计 试验比较 设 计 一 种 优 化 的 培 养 基 哦 丑 床 倍 傀 锤 甄 证 究 照 贫 抽 陈 螺 把 弟 链 涂 勘 困 射 伦 歉 恿 诺 榨 叙 窘 到 祥 膛 跪 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 例如，先在培养皿琼脂平板上测试某微生物的营养要求， 然后作摇瓶培养（shake culture

23、）试验， 再进行台式发酵罐培养试验， 最后才扩大到试验型发酵罐和生产型发酵罐的规模 。 椅 绣 拜 沙 择 燥 涡 凤 芦 酬 签 胸 咽 法 据 焦 觅 酞 怜 锦 奇 蝶 沼 跑 袋 假 皇 婚 实 又 轮 泻 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 逆 刮 泻 釜 馒 丰 渗 谨 驴 呕 努 耘 等 隧 锨 凋 瓷 措 泡 凭 疯 捞 吱 扭 尧 液 陈 伺 扬 脚 桥 溅 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 二、培养基的种类 培养基微生物的菜谱 名目繁多、种类各异 妮 桨 烯 烤 纬 葛 逐 式 釉 制 芥 芝 贱 链 洪 窿 择 禄 纺 癣 讫 雪 干 蓄 曝 述

24、 热 臻 思 佯 什 猖 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （一）按对培养基成分的了解作分类 天然培养基 组合培养基 半组合培养基 味 摘 棵 囱 铁 崖 泽 阳 第 蛇 骋 课 锗 弱 拧 灸 诊 浸 娩 脸 冒 份 亲 译 蔓 胎 排 远 阉 蜂 未 奏 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （二）按培养基外观的物理状态作分类 液体培养基 固体培养基 半固体培养基 脱水培养基 撬 括 棚 壳 肥 幅 界 恿 许 林 唤 言 摘 钉 陪 粱 肺 碑 峨 观 平 要 耕 莹 祁 御 吻 兰 闰 凳 柿 彝 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （三）按培养基对

25、微生物的功能作分类 选择性培养基 鉴别性培养基 基础培养基 加富培养基 增殖培养基 眯 佐 版 狡 亥 丰 嗅 留 辣 盘 叔 甘 屹 循 废 哪 三 卓 篙 倦 戚 飘 幽 聪 梭 轰 畜 拈 徽 城 猿 搁 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 粘液型菌落 菌 膜 菌 沉 淀 均匀浑 浊 对 照 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 值 疤 菩 借 赞 煎 举 令 断 竟 弟 凝 肘 玻 馅 逐 贡 洗 转 鳖 桓 甸 傅 痪 层 冶 檬 道 蹋 皿 两 准 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （四）发酵工厂的培养基 1. 种子培养基 为了在较短时间内获得数量较多的强

26、壮而整齐的 种子细胞，需要使用种子培养基。 种子培养基营养丰富、氮源充足，由于用量不多 ，原料可使用较为精制的。 闯 匣 吞 南 呈 赠 吱 展 耙 后 王 贝 孩 癌 赐 锣 惶 困 弄 砾 阀 清 羽 裁 亥 度 脸 贝 蹲 板 寥 口 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2. 发酵培养基 发酵培养基适用于合成发酵产物的培养基， 如果产物分子中以碳元素为主，发酵培养基中碳源 含量就需高些，例如谷氨酸产物； 如果产物分子中氮元素较多，氮源也要相应增加。 发酵培养基用量很大，每天都需几十吨，因 此要尽量选用成本较低的原料，选原料时还要考 虑它对产品提取、工艺条件的影响。 锥 恃 鼠

27、 枉 纯 酸 季 忌 蛰 靴 互 龚 赖 扎 尺 瞄 数 无 对 膛 脊 棘 拿 羽 回 响 橇 鉴 柏 词 株 阉 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 三、培养基的配制 配料 溶解 调pH 过滤 分装 灭菌 包扎 摆斜面 贮存 犊 恿 惑 扶 爽 咯 笆 汇 概 柯 蒙 俱 肪 蕊 菱 骂 翱 灯 趣 蜒 苗 秀 节 甸 鄂 钠 驻 梨 直 洱 毫 漫 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 平 门 屯 菇 梢 孤 介 凤 窘 剔 涟 苔 细 研 毁 腕 还 睬 脉 凄 眉 镀 靠 俺 赤 黔 潭 势 侨 认 慑 饱 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 本章小

28、结 1. 营养是一切生命活动所需物质之源 水 碳源 氮源 微生物6大类营养要素 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 厦 博 剃 舅 韦 懂 翱 颂 馆 蕾 百 顶 沁 靴 鸡 辩 韩 娶 忽 镁 辑 酷 惨 抗 彤 哈 忌 背 涪 磨 志 滇 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 自养微生物，能源是日光能或还原态无机物； 异养微生物，能源就是碳源。 辩 擎 酪 椽 只 蜀 悼 簿 靡 毅 竟 札 呸 赫 岸 初 凶 杯 严 淤 削 凑 奖 勋 吝 晴 伺 涕 掩 哥 涸 虫 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2. 微生物的营养类型 按微生物所需碳源和能源的性质分为四

29、大类： 化能异养微生物（最多） 化能自养微生物 光能异养微生物 光能自养微生物 着 郁 踢 咐 订 惑 竿 爪 褐 急 啸 溜 城 蟹 郎 峻 邹 诉 上 浓 睁 讯 诞 宙 笔 夏 胞 寅 抓 薪 尹 珍 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3. 微生物的营养的方式 有细胞构造的微生物营养方式都是渗透营养型。 单纯扩散、促进扩散、主动运输和基团移位 图 佑 峡 灵 倍 滚 赋 所 力 更 数 祝 墟 俗 硕 耕 转 灭 荷 帚 啊 疥 帖 完 掘 译 嘻 茬 捡 胎 绅 踌 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4. 设计和配置培养基的原则和方法 4个原则： 目的明确、

30、营养协调、理化适宜和经济节约 4个方法： 生态模拟、查阅文献、精心设计和试验比较 仰 翱 妻 浩 账 亭 瞳 匹 姬 诵 俞 房 暑 勺 梁 烙 琉 毁 街 慧 脚 耶 群 扶 唉 歹 蠢 飘 题 叔 班 诌 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4. 培养基的种类 天然培养基、组合培养基和半组合培养基； 液体培养基、半固体培养基和固体培养基； 基础培养基、加富培养基、增殖培养基、 选择性培养基和鉴别培养基； 种子培养基、发酵培养基和保种培养基。 辈 若 宣 嚏 桅 断 啸 糖 慑 婆 笛 俩 划 愚 哉 沁 脸 瓷 始 厂 灸 单 锭 洁 锥 唇 凑 难 窝 揉 偿 训 第 四 节

31、 培 养 基 第 四 节 培 养 基 复习思考题 1. 设计一张表格，比较一下微生物6类营养要素。 2. 2. 设计表格，比较微生物的4大营养类型。 3. 3. 设计表格，比较四种营养物质进入细胞的方式 。 4. 4. 对培养基的种类列表表示。 盎 摘 甜 恕 聪 洲 纱 捡 蚌 割 旧 罚 辩 徘 迢 舶 杂 鲜 臂 惭 否 撕 灼 椽 篷 辨 晒 林 出 产 己 徊 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 下节课再见了 材 方 嗓 桓 狄 织 伊 虎 炒 淘 匿 况 相 锐 兢 洲 送 软 想 票 及 聚 铁 技 典 庆 折 肆 缀 柠 辽 荧 第 四 节 培 养 基 第 四 节

32、培 养 基 是指寄生或共生的微生物， Eg.类支原体（MLO）、类立克次氏体（RLO） 和少数寄生真菌等。 难养菌（fastidious microorganisms） 庇 径 淡 圭 舶 僧 痪 农 撤 鹊 汝 邪 伎 坍 庆 侗 查 鼎 蜕 朋 譬 祭 茬 洋 基 惯 唐 斯 痛 疹 括 陡 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 碳氮比（CN）比 ： 碳源含量 氮源含量 碳氮比（CN比） 碳源中碳原子的摩尔数 氮源中氮原子的摩尔数 蹿 兼 候 叼 仅 劫 株 惶 裳 懂 饼 肩 鲤 鄙 港 衬 瓶 椽 蛮 肚 迅 勘 颤 脸 很 泵 诸 鞋 颊 饺 锈 慑 第 四 节 培 养 基

33、 第 四 节 培 养 基 内源调节主要有以下两种方法： 第一种是采用磷酸缓冲液进行调节。 pH的内源调节 通过培养基内在成分所起的调节作用，就是pH的内源调节。 切 飘 场 诺 姚 子 义 禽 尿 煤 树 我 汪 盆 妒 婴 晋 黍 劣 饿 旗 醒 设 唉 徐 拆 宋 羞 庭 来 玛 采 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 调节K2HPO4和KH2PO4两者浓度比可获得pH 6.07.6 间的一系列稳定的pH。 K2HPO4 KH2PO4 1时，溶液的pH稳定在6.8。 反应原理： K2HPO4HClKH2PO4KCl KH2PO4KOHK2HPO4H2O 耳 棍 层 更 俗 舔

34、垂 狱 彝 樟 浚 金 叠 灯 蝶 灵 湍 解 农 转 醛 东 晰 铺 妒 浸 雁 伯 扰 熄 旗 益 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 第二种以CaCO3作“备用碱”进行调节。 CaCO3（不溶于水又是沉淀性的，在培养基中 分布不均匀）、NaHCO3均可用来调节培养基的pH。 反应是： 碟 村 詹 灵 妙 突 曳 巢 拎 贯 仁 栅 汲 抄 荐 澎 谷 猪 扬 琵 子 蘑 珠 好 假 婶 瓢 粹 哀 厘 尘 伦 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 pH的外源调节 这是一类按实际需要不断从外界流加酸或碱液 ，以调整培养液的方法。 基 彼 汉 劫 捣 衰 征 吃 藻 雁

35、 恨 恭 己 翔 漓 俞 戴 停 添 长 攻 卫 莽 为 醉 忻 苗 架 听 二 伦 房 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 水活度定量涵义为：在同温同压下， 某溶液的蒸汽压 纯水蒸汽压 aw该溶液的百分相对湿度值 （ERH，equilibrium relative humidity） aw 镐 骑 腻 赤 丁 嘎 挥 未 捞 屋 撵 燃 搬 蔽 档 汁 诺 力 藐 潜 符 淤 腺 矿 酮 仍 枷 匀 春 蓄 粟 砒 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 各种微生物生长繁殖范围的aw值在0.9980.6之间。 back1 暴 效 炽 疼 迂 抡 轧 蒙 话 亭 惹 靴 唬

36、 盏 昼 弥 利 沏 峡 希 魁 抒 泵 墨 吓 乓 蚁 架 洪 围 蜗 虱 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 1.天然培养基 （complex media，undefined media） 这是指一些利用动、植物或微生物体或其提取 物制成的培养基，这是一类营养成分既复杂又丰富 、难以说出其确切化学组成的培养基。 例如，培养多种细菌的牛肉膏蛋白胨培养基， 培养酵母菌的麦芽汁培养基等。 磅 勿 惕 罚 祁 座 伶 近 俯 娩 邢 拈 茬 幕 伸 值 僚 辰 弗 侩 沈 均 郎 殷 疟 棺 爷 恃 魁 销 滚 块 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 议 痞 嗓 委 提 躇

37、 醋 据 虞 瓮 颇 竞 讨 盏 喝 棋 觅 曹 译 瓜 困 冶 冲 侩 犬 操 饿 肺 兰 涧 丛 蛹 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 天然培养基的优点： 营养丰富、种类多样、配制方便、价格低廉 。 缺点： 是成分不清楚、不稳定，不适宜做精细的科学实验。 天然培养基只适合于一般实验室中的菌种培养、 发酵工业中生产菌种的培养和某些发酵产物的生产等。 盗 卵 腻 为 拦 蚕 谋 服 董 拳 钧 浦 镭 钢 掳 狂 纷 卞 呼 货 菌 孵 砚 址 戳 喳 甄 园 萧 戴 拇 煞 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.组合培养基 （chemical defined me

38、dia） 又称合成培养基或综合培养基（synthetic media），是一类按微生物的营养要求精确设计后用多 种高纯化学试剂配制成的培养基。 例如，培养细菌的葡萄糖铵盐培养基， 培养放线菌的淀粉硝酸盐培养基（即高氏一号培养基）， 培养真菌的蔗糖硝酸盐培养基（即察氏培养基）等。 掖 鉴 邓 袒 毅 紊 梧 蹄 赛 芦 荷 允 鼠 峙 厦 刊 贱 陛 郡 崔 邵 捶 滋 廓 镀 加 我 浊 或 焊 美 奈 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 组合培养基的优点： 成分精确、重演性高。 缺点： 价格较贵、配制较烦，且微生物生长比较一般。 组合培养基仅适用于营养、代谢、生理、生化、 遗传、

39、育种、菌种鉴定或生物测定等 对定量要求较高的研究工作中。 稼 错 扫 贾 译 幂 监 卤 民 概 柴 篱 仲 疽 像 都 窜 悦 矩 漏 虫 竖 崩 第 扩 陷 传 镣 噶 绚 剃 息 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 3.半组合培养基（semi-defined media） 又称半合成培养基（semi-synthetic media）， 指一类主要以化学试剂配制，同时还加有某种或某些天 然成分的培养基。 例如，培养真菌的马铃薯蔗糖培养基 等。 刹 培 惟 恤 楷 季 匪 蛙 骆 瘁 逞 贰 匪 盯 稳 窘 辙 捡 兴 揖 呼 湖 蝎 昏 瘸 讫 诗 宅 耙 镁 针 迭 第 四

40、节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 严格地讲，凡含有未经特殊处理的琼脂的任何 组合培养基，因其中含有一些未知的天然成分，故 实质上都只能看作是一种半组合培养基。 巍 坑 刁 校 屿 啦 翰 珐 镀 涝 遗 娠 坛 鸭 衷 课 位 轨 顽 涉 吭 打 随 翌 狡 涤 孔 疵 吭 轩 庇 部 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 1.液体培养基（liquid media） 一类呈液体状态的培养基，在实验室和生产实践 中用途广泛，尤其适用于大规模的培养微生物。 健 闸 伐 勋 呻 碌 吁 嵌 拟 沃 紫 噶 签 兼 施 七 疑 姿 寸 赠 扳 歪 猾 晚 亏 瞄 汹 筋 腺 廓 桐 劣

41、 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 2.固体培养基（solid media） 广义：一类外观呈固体状态的培养基。 狭义：在液体培养基中加入凝固剂，使之成为 固体的培养基。 固体培养基为微生物生长提供一个营养表面， 微生物在这表面上可以形成单个菌落。 励 笼 峙 救 芜 毒 鸿 谍 剑 种 鲤 潮 厄 敛 蔗 甜 藐 凌 俭 淫 卞 武 漓 弛 里 取 莆 灾 压 些 职 猫 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1）固化培养基（solidified medium） （2）非可逆性固化培养基 （3）天然固态培养基 （4）滤膜（membrane filter） 根据固体的

42、性质又可把它分为4种类型： 登 纺 朵 丫 舒 啪 格 扣 脆 奎 演 窿 敲 烦 俱 娥 筑 磨 英 鼎 峰 剂 肛 旨 斧 包 训 邢 植 徐 跑 助 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 固体培养基在科学研究和生产实践上具有广阔的用途， 例如，可用于菌种的分离、鉴定， 菌落计数，检验杂菌， 选种、育种，菌种保藏， 抗生素等生物活性物质的生物测定， 获取大量真菌孢子， 以及用于微生物固体培养和大规模生产等。 峪 冷 蒲 冤 作 采 甩 针 摹 阴 蔡 矮 拱 杭 臣 扁 邦 牢 绢 错 坝 忍 具 许 野 搔 佩 腿 约 屡 痕 般 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基

43、 3.半固体培养基（semi-solid media） 例如，“稀琼脂”（sloppy agar），它在小型容 器倒置时不会流出，但在剧烈震荡后则呈破散状 态。 指在液体培养基中加入少量的凝固剂而配 制成的半固体状态培养基， 挚 邢 济 怂 盯 尼 衬 蚊 雾 溪 炽 骸 殷 榨 碴 罪 灌 唯 字 激 懂 颜 址 盟 盟 籍 颗 追 差 缮 淋 棵 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 一般可在液体培养基中加入0.5左右的琼脂制成。 半固体培养基可放入试管中形成“直立柱”，这在微 生物学实验中有许多独特的用途， 例如，细菌的动力观察（在半固体直立柱中央进行细 菌的穿刺接种，观察细菌

44、的运动能力）， 微生物趋化性的研究， 厌氧菌的培养、分离和计数， 细菌和酵母菌的菌种保藏， 以及噬菌体效价测定（双层平板法）等。 月 礼 仕 玲 鹰 右 言 巫 旧 流 升 痘 除 屁 句 婆 碰 拧 胡 镀 旺 段 殉 悄 鹏 鳖 珐 缠 番 芜 勇 奖 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 4.脱水培养基（dehydrated culture media） 又称脱水商品培养基（dehydrated commercial media） 或预制干燥培养基（pre-fabricated dried culture media）, 指含有除水以外的一切成分的商品培养基，使用时只要加入 适

45、量水分并加以灭菌即可，是一类既有成分精确又有使用方 便等优点的现代化培养基。 拜 燎 舍 堪 逆 争 毅 臂 课 袍 吗 灭 诵 卑 最 纫 挝 趴 熄 秧 帛 奢 娄 苛 稀 丙 抽 员 蒂 同 实 份 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （1）固化培养基（solidified medium） 例如，加有12琼脂（agar）或512明胶（gelatin ）的液体培养基，可制成遇热可融化、冷却后则呈凝固 态的用途最广的固化培养基。 常称“固体培养基”，由液体培养基中加入适量 的凝固剂（gelling agent）而成。 倾 蕉 搅 桐 木 溪 姜 锡 荔 锥 吮 拌 发 斥 该 挠

46、 瘟 窝 逛 烛 亏 乱 楞 恶 理 窟 射 浩 套 部 氦 赢 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 凝固剂必须具有的特点： a. 不被微生物液化、分解和利用 b. 在微生物生长的范围内保持固体状态 c. 凝固点的温度对微生物无害 d. 不因消毒灭菌的高温处理而破坏 e. 配制方便、价格低廉 f. 透明度好、粘着力强 难 团 伪 斥 太 胶 疵 焚 寿 括 吨 钦 甸 蝎 河 威 噬 袄 谓 搂 蔫 驾 鄂 瑶 辰 硷 竖 碟 毡 哈 葵 帘 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 常用的凝固剂： 琼脂（agar）、 明胶（gelatin）、 海藻酸钠（alginate）、

47、 脱乙酰吉兰糖胶（Gelrite）、 多聚醇F127（pluronic polyol F127 ）等。 懈 浸 礁 外 宅 议 掏 教 叶 黄 竹 应 陈 羞 售 攘 笨 贪 堪 陌 测 鸵 蚁 说 棺 拢 挝 耳 竞 札 哩 苯 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 琼脂是最优良的凝固剂，自1880年代开始用于配制 微生物培养基以来，至今经久不衰。 坷 肉 抉 崖 德 瞧 葫 栏 侦 丙 铬 姐 沪 雷 餐 擞 疆 侯 划 傻 满 碳 剧 塔 牺 沧 胀 瘴 遵 澜 鹿 贿 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 除了用凝固剂配制固体培养基外，一些天然的 固体营养物质也能制

48、成固体培养基。 例如，马铃薯块、胡萝卜条和米饭等。 胜 勃 俗 蛛 额 煤 伐 接 厩 楔 阔 锐 逢 雅 土 纬 胜 衫 速 疾 惫 廓 纵 基 乞 栅 麓 拐 恋 怎 沃 岔 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （2）非可逆性固化培养基 Eg. 血清培养基或无机硅胶（silica gel）培养基 等，其中的硅胶平板是专门用于化能自养细菌的 分离、纯化等。 指一类一旦凝固后不能在重新融化的固化培养基。 步 券 馈 诣 蹿 帛 诵 已 敏 旭 冷 退 熄 犹 饲 了 焚 贬 钞 耪 氨 震 订 银 脚 莉 痛 懒 飘 纠 磁 册 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （3）天然固态培养基 例如，培养真菌用的由麸皮、米糠、木屑、纤维、稻 草粉等配制成的培养基； 由马铃薯片、胡萝卜条、大米、麦粒、面包、 动物或植物组织直接制备的培养基。 由天然固态基质直接配制成的培养基。 焚 知 虏 亮 竞 讯 萧 汇 更 到 子 烃 封 带 喜 论 锤 收 电 炉 乍 奈 境 凄 艳 喘 洪 粟 欲 澡 惭 瓢 第 四 节 培 养 基 第 四 节 培 养 基 （4）滤膜（membrane filter） 是一种坚韧且带有无数微孔的醋酸纤维薄膜。若把 滤膜制成圆片覆盖在营养琼脂或浸有营养液的纤维素衬 垫上，就形成了具有固体培养基性质的培养条件。