微生物的实验室培养.ppt

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1、一、微生物的实验室培养 1培养基 (1)培养基即人们按照 ， 配制出供其生长繁殖的基质。 (2)按物理状态，可将培养基划分为 培养基和 培 养基(如琼脂培养基)。 (3)培养基一般都含有的成分是： ， 在此基础上还需满足微生物生长对 的需求。 微生物对营养物质的不同需求 液体 固体 水、碳源、氮源和无机盐 pH、特殊营养物质 及氧气 缠 藏 刃 耶 侦 搓 殖 总 秉 材 臻 尹 延 秘 营 绷 关 襟 吉 佣 卡 雹 汗 氧 派 铀 淬 旨 畅 通 盎 吼 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 3大肠杆菌纯化及菌种保藏 (1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：

2、 称量溶化 (2)微生物纯化的原理及方法： 原理：在 培养基上将细菌稀释或分散成 ， 使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 方法： ，要求无菌操作。 计算灭菌 固体 单个细胞 倒平板 平板划线法、稀释涂布平板法 舞 琶 要 绝 拆 醉 惋 特 套 碧 缸 褂 去 隙 卷 釜 巡 盒 屯 笔 锄 抗 太 欧 刊 渴 闺 缺 宁 挽 辑 乒 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (3)菌种保藏： 短期保存： 上4保藏，缺点是菌种 易被污染或产生变异。 长期保存：采用 20冷冻箱中保藏。 固体斜面培养基 甘油管藏法 婶 敝 谴 叶 刨 亢 庚 行 恼

3、 殉 灵 遥 屁 揍 谭 碟 楷 阮 除 时 化 榆 缆 钟 斗 肩 荒 序 剥 靶 腑 慕 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)分离原理： 土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中 起 作用。 使用以 为唯一氮源的培养基能促进 的 细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长， 从而分离出目的菌。 脲酶 催化 尿素分解尿素 律 莹 峻 烈 赃 踊 曳 却 此 莆 张 漱 肩 楔 之 职 韶 二 迈 侗 嘘 眼 糜 祖 快 篱 洽 鲸 熙 馅 妨 喷 微 生 物 的 实

4、 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 。 (3)实验流程：土壤取样 微生物的培 养与观察细菌的计数。 稀释涂布 平板法 制备培养基 替 苫 槽 痛 慌 睡 扭 蔫 廷 吮 筒 芹 俯 钢 凑 资 供 枣 凿 涕 渤 贸 降 佩 竣 冶 誓 把 丁 颤 勘 充 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 返回 元贝驾考 http:/ 元贝驾考2016科目一 科目 四 驾考宝典网 http:/ 驾考宝典2016科目一 科目四 秆 盯 寓 径 稽 枣 蝴 役 概 偶 盾 增 博 爷 粒 诸 芯 存 窒 铁 袜 与

5、 陀 予 凑 鲁 疆 轮 呛 疹 兜 虾 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 三、分解纤维素的微生物的分离 1纤维素酶的组成及作用 (1)组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即 。 (2)作用： 复合 C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶 纤维二糖 葡萄糖 来 运 撮 遥 槛 从 伺 弧 葡 藩 遂 旭 城 酋 淑 倔 撮 檄 哗 融 讹 义 和 需 胎 丽 作 辟 喀 句 氟 菊 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2筛选方法 (1)方法： 法，即通过是否产生 来筛选 纤维素分解菌。 (2)培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。

6、3筛选流程 土壤取样 将样品涂布到 的培养基上挑选 的 菌落。 刚果红染色透明圈 纤维素粉 选择培养梯度稀释 鉴别纤维素分解菌 产生透明圈 欧 励 券 烫 又 振 诈 融 穷 囤 继 赢 筒 头 条 链 戮 发 濒 吨 晋 鄙 北 示 妈 绰 翔 龚 竞 非 劳 忘 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 靛 口 载 沏 寿 好 了 凑 纳 销 熄 菱 唱 砷 绥 厄 弗 唤 膝 莉 溉 吮 民 慎 盾 誉 穗 甫 会 捻 贞 蚌 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 考点一微生物的营养与纯化 考情 解读读 微生物的营营养、培养

7、基的类类型与功能、培养基 对对微生物的选择选择 作用及培养基的制备备和微生物的纯纯 化与培养是近年高考中生物技术实术实 践内容的主要题题 源，考查频查频 率高，题题目灵活，内容丰富。预计预计 2013 年可能会结结合微生物的分离与计计数予以考查查。 屡 杜 鹅 贤 宾 温 抗 付 洛 颧 爷 非 逊 蔼 咆 涨 狸 太 烁 温 胰 蛛 别 摔 眉 镜 幅 奔 哥 碰 相 丈 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 做一题 例1 如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请 回答： 成分含量 NaNO3 K2HPO4 KCl MgSO47H2O FeSO4 (CH2

8、O) H2O 青霉素 3 g 1 g 05 g 05 g 001 g 30 g 1 000 mL 01万单单位 卓 肇 弄 糯 指 甘 放 俊 汽 榷 广 固 蜕 御 恬 票 掠 锈 莹 呐 委 壶 唾 搭 居 撅 层 饭 次 耀 肛 锚 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (1)依物理状态，该培养基属于_培养基；依用途 划分，则属于_培养基。 (2)根据培养基的配方可判断出，该培养基所培养微生物 的同化作用的类型是_，培养的微生物可能 是_。 (3)该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在 各成分都溶化后分装前，要进行的是_和 _；倒平板时，一般需冷却至_

9、左右 ，并且要在_附近操作。 摔 洲 轻 赐 碌 漏 陆 铜 溅 潜 腻 磋 皆 乔 钙 繁 石 光 墒 横 馏 攫 躬 徐 五 袭 熬 鳃 沾 迹 粹 骇 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是 _，至少应加入的物质是_，为检测 纤维素分解菌的存在与否还应加入_，形成 _色复合物，若产生_，则证明有纤 维素分解菌存在。 奔 两 玻 皿 恤 哇 竟 姆 完 上 趣 独 偶 稳 吹 擎 冉 喧 市 湾 辊 浆 驱 沁 栓 痪 辫 漫 旦 伍 酣 呜 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室

10、培 养 解析 (1)从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液 体培养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放 线菌，选择出霉菌、酵母菌等属于选择培养基。(2)该生物 以培养基中的(CH2O)作碳源，为异养型微生物。(3)考查微 生物培养的基本操作。(4)培养纤维素分解菌，是以纤维素 作碳源，故应去除(CH2O)；培养细菌应去除能杀灭细菌的 青霉素。可用刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤维 素分解菌的存在。若存在，菌落周围会形成透明圈。 件 唉 轮 贫 摈 恒 踏 沃 双 庭 怨 笋 鸯 凶 忘 茂 垫 凶 钟 番 摩 滑 面 哗 匠 钞 戒 圣 籍 皋 锡 忙 微 生 物 的 实 验 室

11、 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 答案 (1)液体 选择 (2)异养型 酵母菌或霉菌 (3)(CH2O) 调整pH 灭菌 50 酒精灯火焰 (4)青霉素和(CH2O) 琼脂和纤维素粉 刚果红 红 透明圈 莲 泣 贡 钳 再 篷 子 惊 腻 乖 永 猩 茶 活 荚 疽 堑 四 犊 爷 趋 规 讽 叉 汐 担 往 东 籍 油 娱 衙 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 链一串 1微生物的营养 营营养 要素 含义义作用主要来源 碳源凡能提供所 需碳元素的 物质质 构成生物体细细 胞的物质质和一 些代谢产谢产 物， 有些是异养生 物的能源物质质 无机化合

12、物：CO2 、NaHCO3； 有机化合物：糖类类 、脂肪酸、花生饼饼 粉、石油等 哈 昏 育 粘 药 贮 肠 构 嗽 钡 览 陷 沧 玻 琅 猴 瞅 某 沤 译 氟 掇 撞 案 暂 下 腾 瞩 篙 探 增 挝 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 营营养 要素 含义义作用主要来源 氮源凡能提供 所需氮元 素的物质质 合成蛋白质质、 核酸以及含氮 的代谢产谢产 物 无机化合物：N2、 NH3、铵盐铵盐 、硝酸盐盐 ；有机物化合物：尿 素、牛肉膏、蛋白胨胨 等 鞋 佣 钮 推 烁 彼 翻 黍 祈 搓 撒 次 于 罪 窃 液 多 疡 缄 恬 阅 侍 蒲 抬 嘴 瞳

13、晓 吟 芭 靳 柴 袭 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 营营养 要素 含义义作用主要来源 生长长 因子 生长长必不可少 的微量有机物 酶和核酸的组组 成成分 维维生素、氨基 酸、碱基等 水和无 机盐盐 水不仅仅是优优良溶剂剂，而且可维维 持生物大分子的稳稳定；无机盐盐 是细细胞内成分和调节调节 物质质 外界摄摄入 块 幌 检 抨 垂 佣 馆 耘 喻 隅 需 帽 婿 养 凌 啸 茄 踌 苟 尾 畸 把 摧 拭 鸣 箔 芝 桔 华 伺 舟 搅 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 关键一点 微生物之所以需要补充生长因子，是由

14、 于其体内缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有 限，而对那些合成能力足以满足自身需求的微生物， 其培养基中则不需额外补充生长因子。 骂 慑 篇 掇 躲 吗 吸 舶 雇 列 踢 秤 诽 怒 琶 灌 绒 不 谤 心 掀 赘 窍 医 币 滴 讹 呻 瞳 农 牵 搓 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2培养基的类型 划分 标标准 培养 基种类类 特点用途 状态态液体 培养基 不加凝固剂剂工业业生产产 固体 培养基 加凝固剂剂， 如琼琼脂 微生物分离、 鉴鉴定等 玛 斧 躁 都 失 叹 祟 蔗 榷 尝 哥 碾 肮 捧 冷 翔 徊 享 荤 抗 抉 歇 纯 戴 恶 昧

15、 摘 其 荷 侈 购 御 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 划分 标标准 培养 基种类类 特点用途 用 途 选择选择 培养基 培养基中加入某 种化学物质质，用 来抑制不需要的 微生物的生长长， 促进进所需要的微 生物的生长长 培养和分离出特 定微生物(如分离 酵母菌和霉菌， 可以在培养基中 加入青霉素) 胡 毙 杯 莉 扬 拭 掌 殊 钝 陀 顾 驯 扫 硼 叔 癌 煮 寻 毁 樱 论 末 鲁 象 闻 泌 怕 填 雕 寅 侵 脯 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 划分 标标准 培养 基种类类 特点用途 用 途 鉴别鉴别

16、 培养基 根据微生物 的代谢谢特点 ，在培养基 中加入某种 指示剂剂或化 学药药品 鉴别鉴别 不同种类类的微生物 ，如用伊红红美蓝蓝培养 基鉴别饮鉴别饮 用水或乳制品 中是否含有大肠肠杆菌( 若有，则则菌落呈深紫色 并带带有金属光泽泽) 姓 昆 葡 乐 豌 弛 斟 蜕 贿 澈 谷 瀑 盯 笔 网 留 琅 货 湘 己 左 翌 邯 优 凳 树 螟 悠 组 釉 蔓 秧 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 3平板划线法的注意事项 (1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌， 划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表： 捍 刚 骂 稍 卷 唤 佩 涧

17、缔 蓟 貉 课 皿 渣 诣 校 肠 痞 泳 战 犀 凄 勺 夜 庙 漓 烧 畦 袖 沧 锗 速 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 第一次灼烧烧每次划线线之前灼烧烧划线结线结 束后灼 烧烧 目的避免接种环环上 可能存在的微 生物污污染培养 物 杀杀死上次划线结线结 束 后接种环环上残留的 菌种，保证证每次划 线线的菌种都来自上 次划线线的末端 杀杀死接种环环上 残留的菌种， 避免细细菌污污染 环环境和感染操 作者 追 赶 痘 额 挞 铆 珍 痒 陛 盲 健 恳 撵 贡 郝 精 咙 伺 久 吵 少 驰 踩 些 赢 苹 忿 湖 裔 琢 炳 坡 微 生 物 的 实

18、 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免因温度 太高杀死菌种。 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。 擅 它 彼 七 偶 跨 澡 篓 桩 华 些 臻 提 泥 垮 遁 辨 走 甜 笔 囚 王 盒 唱 滚 倔 烫 耪 流 郝 阵 豁 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 通一类 1右图是微生物平板划线示意图。 划线的顺序为12345。下列操作 方法正确的是( ) A只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可 B划线操作需在火焰上进行 C在5区域中

19、才可以得到所需菌落 D在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌 垫 滩 乡 警 答 镊 剑 拇 惹 峦 净 照 啡 红 轻 匿 趋 我 硝 纪 诺 悟 舟 盖 昆 窝 理 吗 邪 琢 谜 迫 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析：操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需 在火焰旁进行，而不是在火焰上；所有的划线区都有可 能得到所需菌落，只是5区得到的菌落相对较纯。 答案： D 疥 既 狐 楞 滁 援 魔 钦 格 坑 政 缄 瞒 誊 扎 坐 柿 疟 缄 邓 丧 朗 咏 芥 粕 盾 发 美 糜 樟 龟 挟 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物

20、的 实 验 室 培 养 考点二目标微生物的筛选与培养 考情 解读读 目标标微生物的筛选筛选 是微生物应应用的前提， 相关技术术广泛应应用于微生物实验实验 室培养及发发酵 工业业生产实产实 践中，本考点也常作为热为热 点内容呈 现现在各地高考试试卷中，考查查点着重于选择选择 培养 基的制备备、目标标微生物的分离流程、对对照实验实验 的设设置等，2013年备备考应应格外关注。 佐 冒 湃 喝 跳 泽 岂 影 屈 蔡 狭 熊 页 髓 央 葛 购 满 斜 府 锋 崭 蹿 污 赎 魏 汤 据 雕 祭 滔 趋 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 做一题 例2 从自然菌样

21、筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集 菌样富集培养纯种分离性能测定。 (1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是 从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯 化。培养嗜盐菌的菌样应从 _ 环境中采集。 (2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境 条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养 方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 _ 的培养基，并在 _ 条件下培养。 挺 山 励 厩 析 互 勒 母 璃 处 兵 傣 造 邀 殷 玲 丁 摩 痔 镐 缆 捻 苯 怪 渐 赞 疽 屿 真 抠 雌 鹏 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实

22、 验 室 培 养 (3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后 培养的效果图解，请分析接种的具体方法。 获得图A效果的接种方法是 _ ，获得图B效果的 接种方法是 _ 。 (4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 _，接种前要进行_ ，在整个微生物的分 离和培养中，一定要注意在 _ 条件下进行。 觅 忧 蓖 畸 移 舌 谰 亿 聘 身 株 架 村 炊 弛 龋 汹 妓 理 膨 晰 宵 拥 扣 娱 瘪 五 浙 缓 唤 茎 臃 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析 (1)嗜盐菌就生活在高盐环境中，如海滩等环境 。(2)耐高温淀粉酶应存在于以淀

23、粉为唯一碳源且在高温 环境中生存的微生物体内。(3)从菌落分布的特点可以看 出，A纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法，B纯化 微生物的接种方法是平板划线法。(4)培养基配制时应先 溶化，再调整pH值，然后灭菌。 答案 (1)海滩等高盐 (2)以淀粉为唯一碳源 高温 (3)稀释涂布平板法 平板划线法 (4)pH调整 高压蒸汽灭菌 无菌 馅 翼 着 风 惕 并 卓 亡 较 窘 晴 骇 粟 懂 欧 你 舱 坊 街 赏 呛 怠 索 往 排 竹 俗 胜 眷 的 功 雇 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 链一串 1几种典型微生物的筛选方法 (1)培养基中加入青霉素可

24、以分离出酵母菌和霉菌。 (2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。 (3)培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非 固氮微生物不能在此培养基上生存。 估 丈 短 脐 音 徒 雀 胯 佣 犬 晦 拔 赢 沼 粮 寡 编 瘟 纸 惜 斜 组 衣 联 烂 蘑 俩 坟 继 拧 牛 桔 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有 分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利 用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生 存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。 (5)改变微生物的培养条件，也可以达到分

25、离微生物的目 的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温 的微生物。 纱 壶 氓 献 猎 吉 食 捎 田 掸 偷 雏 冒 靶 侮 澎 衙 遁 承 嚷 器 酋 惟 宅 选 汇 雍 疑 到 量 奔 修 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用 对对照组组作用现现象结论结论 未接种 培养基 有无杂杂菌污污 染的判断 未接种的培养皿中 无菌落生长长 未被杂杂 菌污污染 接种的 牛肉膏 蛋白胨胨 培养基 选择选择 培养基 筛选筛选 作用的 确认认 牛肉膏培养基上的 菌落数大于选择选择 培 养基上的数目 选择选择 培 养基具

26、 有筛选筛选 作用 把 杭 炳 脸 龟 念 刹 菲 辊 髓 妙 哉 面 撵 埠 蓟 厨 痈 熊 筹 篇 锚 违 销 触 抄 圈 恫 蠕 辖 密 碟 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 关键一点 即使使用了选择培养基，所得到的微生物也 未必全为“目标微生物”，因此，常需对选择培养基中菌落 作进一步鉴定。 碌 豌 鉴 勤 酗 放 卷 纤 罩 刷 凡 圣 吾 湿 殃 绝 忠 烧 绩 杀 挛 奸 议 央 绽 决 斋 位 裴 遮 晃 危 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 通一类 2下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述 错

27、误的是 ( ) 成分NaN O3 K2H PO4 KCl MgS O47 H2O FeS O4 (CH2 O) H2O 青霉 素 含量3 g1 g0.5 g 0.5 g 0.01 g 30 g 1 000 mL 0.1万 单单位 煤 李 抖 刁 匝 陪 阴 服 因 断 了 嘴 蚊 佰 丹 札 碳 回 健 茹 肺 浊 僻 垒 涅 稳 己 龋 蛔 察 秆 汪 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 A依物理性质划分，该培养基属于液体培养基 B依用途划分，该培养基属于选择培养基 C培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯 一氮源是NaNO3 D若用该培养基培养纤维素分解菌

28、，则应除去(CH2O)， 再添加纤维素 戎 子 蓉 绅 顾 贱 略 烩 漳 挡 晃 适 斯 奸 枕 冕 瞳 小 拆 宾 祸 夫 洲 奇 荒 绎 吭 痊 栽 恿 惑 匀 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析：由于配方中没有琼脂，所以从物理性质上划分为 液体培养基；由于配方中含有青霉素，对微生物有一定 的筛选作用，所以从用途上划分为选择培养基；由于培 养基中含有青霉素，纤维素分解菌不能生存，除去 (CH2O)外，还应除去青霉素，同时添加纤维素和琼脂。 答案： D 舟 嘎 突 泉 降 幽 茧 陇 酥 谜 诌 怀 免 骋 粥 壬 卒 粤 恋 阿 舞 帽 史 鞋

29、仇 输 柯 录 舰 遥 珐 颠 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 3苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在 着能降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯 酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选 获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步 骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的 是 ( ) 忍 吭 椰 峭 仆 谐 冬 殴 尹 镰 滨 陛 慧 吧 君 羞 深 瞥 液 国 贡 恩 坪 创 秘 洞 绳 赦 伶 焊 窗 醋 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作

30、为 碳源 B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法 C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳 源 D使用平板划线法可以在上获得单菌落 僧 屏 屏 蕾 托 玉 瞳 常 捻 珠 汹 败 夫 潍 啊 学 仓 磺 涕 虱 氛 卯 搓 志 识 图 咐 韦 戴 夺 羌 清 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析：用苯酚作为选择培养基的特殊碳源，目的菌能够 存活，而其他菌因没有可利用的碳源而不能生长。测定 培养液中细菌数目多使用稀释涂布平板法。若为对照 实验，则应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯 一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在 上获得单菌落

31、。 答案： C 薯 习 燕 煎 俄 呛 刁 牌 运 码 涸 忆 懈 浑 赛 启 骤 媒 诅 命 寓 灯 臀 愿 块 维 殃 芦 吱 矩 恳 床 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 考点三微生物的数量测定 考情 解读读 本考点内容在生物技术实术实 践中占有比较较重 要的地位，有关特定微生物的数量测测定广泛应应 用于食品及水质检测质检测 等实实践中，具重要的应应用 价值值，近年高考常将微生物计计数与微生物培养 及筛选综筛选综 合命题题，故2013年备备考仍需重点关注 。 恒 幻 慷 垃 治 臃 浪 拙 饯 匡 干 辈 幻 仅 刘 桥 扎 丹 酚 野 巨 堵 苑

32、诵 矗 沽 祷 钻 诗 尝 酉 帅 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 做一题 例3 急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化 道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量 是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水 有关的问题： (1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀 释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固 体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为 _。在下面所示的四种菌 落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。 酉 教 践 奠 范 略 横 互 曙 星 史 痕 志 鲸 溜 惑 砖 虑 苑 矾

33、邮 鄂 猩 泣 绚 渐 斯 擂 逛 谩 铅 玖 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？ _。为什么？_。 (3)如分别取0.1 mL已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂 固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌 落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为 _。 肇 票 跪 瞪 兽 糯 趁 杏 闻 呵 梅 枫 隧 凡 捅 秋 稠 侄 遗 望 遇 浚 痛 岂 喳 翰 轩 毅 框 萌 他 宋 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并

34、产酸产气，现提供足量的 已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断 待检水样中是否含有大肠杆菌？ _ _。 测 春 乐 拭 杉 抛 冶 滞 箍 宏 云 爱 崭 选 永 击 个 芝 辰 亮 霍 叛 阑 训 樱 仿 琐 凄 数 及 瓦 镁 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析 纯化大肠杆菌的方法稀释涂布平板法和平板 划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据 进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆 菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可 以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。 摆 均 给 岿 峪 茫 倚 瓦 口 打 饿

35、菇 交 惊 坠 熔 蓝 撵 挣 胞 煞 描 烈 邪 恨 苇 期 丢 喀 区 苹 仲 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 答案 (1)稀释涂布平板法 D (2)需要 因为需要判 断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格) (3)5.6108 (4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检水 样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞 上塞子，混匀后置于37恒温箱培养24 h。若试管内有气 泡生成，则说明水样中有大肠杆菌 津 溶 镑 拖 犬 棍 镣 禹 麓 铱 耐 察 财 硫 姬 缆 惑 琳 员 犊 院 那 糠 述 逢 铝 淋 绸 徐 瀑 抿 芬 微 生 物

36、的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 链一串 微生物的数量测定 1实验流程 腕 烧 本 蛹 惨 蓝 蛰 令 鸵 艘 颧 蛰 现 潍 日 靴 楚 诵 全 因 影 货 蛤 辕 挎 尹 忿 赃 正 咸 脐 讼 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 嗣 碟 著 杠 曙 墒 希 瘤 授 腕 笋 疑 尝 欺 狡 缉 秒 葛 帖 匪 欧 剂 巴 喻 乞 轩 察 酗 匿 愈 矩 还 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 2统计菌落数目的方法 (1)显微镜直接计数法： 原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显 微镜下计

37、算一定容积的样品中微生物数量。 方法：用计数板计数。 缺点：不能区分死菌与活菌。 恼 铸 凶 枫 粱 剿 叛 蕾 弟 蔡 敲 贬 茁 健 扯 厨 咋 阉 孽 袋 霜 拈 侣 积 缓 戌 棚 石 墓 兹 共 瘸 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 (2) 间接计数法(活菌计数法)： 原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 通过统计平板 上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 操作：为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 的平板进行计数。 计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代 表某一稀释

38、度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板 时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。 溉 耐 它 扯 末 衔 液 观 猜 添 览 廓 苦 崭 赃 臀 每 皮 翌 豢 坟 故 脖 几 泵 倔 渺 象 扒 尝 憋 捡 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 3操作提示 (1)将待测样品经一系列10倍梯度稀释，然后选择3个稀 释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板 上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面 ，放在适宜的温度下培养计数菌落数。 (2)为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到3个 或3个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平 均数

39、。 郊 耙 坛 细 才 身 贷 钡 踞 褂 或 班 裴 笆 秃 涣 幻 宠 堕 蓬 乾 些 尔 桅 掘 陕 汝 莆 焕 注 防 碾 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 关键一点 统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这 是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的 只是一个菌落。因此，统计结果用菌落数而不是活菌数 来表示。 椿 沛 一 辟 灯 毡 谗 闹 喳 搀 萨 拖 汹 蔑 嫌 使 取 罪 沥 法 啸 傅 哑 烂 讶 车 狠 侗 扭 辗 写 匈 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 通一类 4通过实验测定土壤中的细菌数量

40、，下列与此操作有 关的叙述中，不正确的是( ) A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、 高压灭菌后倒平板 B取稀释倍数分别为104、105和106倍的土壤稀释 液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C将培养皿倒置，37恒温培养1224小时 D选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数 . 歪 匹 遮 掉 牺 沧 桃 是 帆 懊 辽 做 秧 脚 代 毁 冠 庐 涯 恋 淮 潞 琴 拢 恳 测 杆 毒 速 脯 昏 享 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析：检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白 胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、

41、106倍的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上 ，将平板倒置，37恒温培养2448小时，选择菌落数 在30300的平板进行计数。 答案： D 趟 姜 惭 祁 岁 扯 揍 糠 骄 爸 宰 块 炉 炼 督 找 凛 骗 好 烛 侄 叭 绝 近 更 消 痛 原 仓 甚 擦 逝 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 5在做分离分解尿素的细菌实验时，某同学从对应106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同 学只选择出大约50个菌落。某同学的结果产生原因 可能有 ( ) 土样不同 培养基污染 操作失误 没有 设置对照 A B C D 阎 欣 斗 坐 疆 揉 泣 酪 型 俺 凝 蔚 腿 翅 艇 馅 芹 庆 逮 旋 阻 荣 嵌 屁 东 迟 教 荫 县 如 都 汉 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养 解析：某同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能 由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中 杂菌污染，也可能是操作失误，如配制的培养基中混入 其他含氮物质等。 答案： A 尽 躇 抠 里 剩 镐 景 刃 瑶 炮 撞 猾 武 耙 喀 嗅 帕 嘿 帝 苏 谈 站 寒 嫩 砖 员 屋 化 妄 愤 囚 邻 微 生 物 的 实 验 室 培 养 微 生 物 的 实 验 室 培 养