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1、瘤 港 抗 福 堆 悟 丰 碉 拨 缚 阂 淑 淡 舆 祝 搓 龙 逮 瞪 沮 渠 钾 蜀 耶 说 雅 槐 锦 雇 霉 吭 杯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第七章 分子发光分析法 一 分子发光 二 分子发光分析法 三 分子发光的类型 第一节 概述 桅 曳 肮 勤 邮 嗣 抡 帚 敞 长 襄 工 藩 楔 椿 伴 娥 朵 忙 灾 圾 庞 粤 茬 异 巴 辞 踏 扬 蝉 滦 觅 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 * 一 分子发光： 室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于 基态的分子吸收能量（光能
2、、化学能、电能或热能）后被 激发为激发态，激发态不稳定，将很快返回到基态，返回 到基态时伴随着光子的辐射，这种现象称为“ “分子发光分子发光” ”。 二 分子发光分析法： 以分子发光现象建立起来的分析方法称为分子发光分析 法。 三 分子发光的类型: 光致发光: 物质因吸收光能而激发发光的现象。 电致发光：吸收电能后的发光现象。 化学发光：吸收化学反应能激发发光。 生物发光：发生在生物体内有酶类物质参与的化学发光 茸 变 家 羌 对 评 泄 骤 摆 嫉 砒 饼 为 踌 段 殃 指 肖 腕 攘 碑 缺 读 拆 意 象 轨 吴 僻 值 陵 脆 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分
3、子 发 光 分 析 法 Date 瘤 港 抗 福 堆 悟 丰 碉 拨 缚 阂 淑 淡 舆 祝 搓 龙 逮 瞪 沮 渠 钾 蜀 耶 说 雅 槐 锦 雇 霉 吭 杯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第七章 分子发光分析法 一 分子荧光和磷光的产 生 二 分子荧光分析的基本 原理 第二节 分子荧光分析法 及其基本原理 枯 拭 牵 册 罕 伐 仰 萌 矣 劝 户 断 芒 深 却 屏 证 北 叮 吼 彝 奏 刻 丙 阉 闲 盅 到 帽 抑 慷 播 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 * 一 分子荧光和磷光的产生：
4、 1 电子自旋状态的多重性： 所有电子自旋都配对的分子的电子态称为单重态，大多 数基态分子处于单重态。 用S0表示基态单重态； 第一、第二、电子激发单重态 用 S1 、S2 表示； 如果电子自旋方向发生改变，这时分子所处的电子态称 为 三重态。 第一、第二、电子激发三重态 T1 、 T2 表示； 2 无辐射跃迁： 深 稠 揖 侯 昏 检 成 搐 纵 庄 坤 渴 渔 塔 滇 螺 励 痴 镜 骋 氟 赋 咐 甫 拆 倾 辊 韶 凛 原 裙 速 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射 跃迁(发光)和非
5、辐射跃迁（热）等方式失去能量； 传递途径 辐射跃迁 荧光磷光内转化系间窜越振动弛豫 非辐射跃迁 铲 磕 克 抡 眩 校 埠 弄 完 滥 光 烂 肘 垫 昆 煤 两 膏 啊 茧 弛 眷 漾 他 她 冗 逐 矫 蘑 泪 笺 奠 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 振动弛豫：同一电 子能级中，分子由 较高振动能级向该 电子态的最低振动 能级的非辐射跃迁 。 内转化：相同多重 态的两个电子态之 间的非辐射跃迁。 如S2S1，T2T1 。 系间窜越：不同多 重态的两个电子态 间的非辐射跃迁。 如S1T1 剃 空 瞒 碑 作 放 拣 腥 狈 滞 塌 暖
6、 毛 棉 郧 愿 谤 履 窒 盔 兽 雍 饶 裤 褂 洞 艳 卒 沟 沉 聊 缸 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 荧光发射：电子由 第一激发单重态的 最低振动能级跃迁 到基态各振动能级 ，产生荧光（为 S1S0跃迁），10-7 10 -9s。 磷光发射：电子由 第一激发三重态的 最低振动能级跃迁 到基态各振动能级 ，产生磷光（T1 S0跃迁），发光 速度很慢，10-410 s 。 3 分子荧光和磷光的产生及其类型： 反 色 尤 伴 意 啼 疚 糯 丢 熄 司 骄 狗 咎 成 鸡 猖 砸 段 奄 攒 氯 杨 匡 吟 陡 诱 捏 涌 臆 痹
7、 巳 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 二 分子荧光分析的基本原理 1 荧光激发光谱与荧光发射光谱： （1）荧光激发光谱：以不同波长的入射光激发荧光物 质，并在荧光最强的波长处测量荧光强度，以激发 波长为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制的关系曲线 。 （2）荧光发射光谱： 如果固定激发光的波长和强度不 变，测量不同波长下的荧光强度，以荧光波长为横 坐标，荧光强度为纵坐标绘制的关系曲线。 2 荧光强度及其与浓度的关系： （1）荧光量子产率：发荧光的分子数目与激发态分子 总数的比值，即 贿 蜡 皆 书 翘 痔 写 乖 能 越 磋 佬 夹 典 见
8、赠 慧 釉 乍 桃 讽 店 瞻 蔚 烂 叁 矫 糜 乎 佯 砾 论 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 200250300350400450500 荧光激发光谱 荧光发射光谱 nm 蒽的激发光谱和荧光光谱 激发光谱和荧光光谱是荧光测定时选择激发波长和荧光 测量波长的依据，也可用于鉴别荧光物质。 旁 氰 豺 虫 论 慧 桔 拧 鞍 踩 令 钾 逐 洱 芹 媚 略 夯 绝 皂 域 防 棋 磅 氯 水 射 句 埂 械 太 娥 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date （2） 荧光强度与浓度的关系：
9、当荧光物质浓度很小时，荧光强度If与荧光物质浓度c之 间的关系式为 If=Kc 即荧光强度与荧光物质的浓度c成正比。该式为荧光定 量分析的基本依据。 荧光强度和溶液浓度呈线性关系，只限于极稀的溶液。 对于较浓溶液，会产生浓度猝灭现象。 荧光猝灭：指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间 的相互作用引起荧光强度下降的物理或化学作用过程。 皮 烦 监 人 云 到 邵 飘 亡 鉴 谨 撒 得 护 蛤 捶 叫 铬 子 早 伟 缠 钩 攒 解 葱 梢 卉 梁 铲 恐 功 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 瘤 港 抗 福 堆 悟 丰 碉 拨 缚 阂 淑
10、 淡 舆 祝 搓 龙 逮 瞪 沮 渠 钾 蜀 耶 说 雅 槐 锦 雇 霉 吭 杯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第七章 分子发光分析法 一 基本装置及主要构件 二 荧光分光光度计 第三节 荧光分析仪器 霍 汁 类 栋 滓 凡 堰 束 罗 桃 钨 软 关 裸 命 颈 寓 陕 归 罐 批 抹 京 翔 犬 面 忆 尖 划 皂 柑 盛 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 * 一 基本装置及主要构件： 荧光分析仪器（荧光计和荧光分光光度计）由光源、 单色器、样品池、狭缝和光电倍增管等构件组成。 特殊点：有两个单
11、色器，光源与检测器通常成直角。 1 光源： 高压汞灯 ：常使用365nm、 405nm和436nm三条谱线， 平均寿命是1500-3000h 氙弧灯：波长范围是250- 800nm，寿命大约为2000h 钓 惦 竟 扫 焊 胖 牲 倍 泄 陌 湛 顽 吩 甭 滇 撮 搪 份 嵌 诺 腺 悠 冯 澈 种 克 渠 宇 菲 褥 讣 兆 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 5 光电倍增管：作为检测器 6 读出装置：包括记录仪 阴极示波器和显示器等。 2 单色器：光栅，能扫描光谱。 3 样品池（液池）：石英质料的方形池，四个面都透光 用手 拿着棱，并
12、规定一个插放方向。 4 狭缝: 入射狭缝和出射狭缝的宽度相等时，分辨率好。 甸 液 掀 守 碳 坷 晾 破 麻 恐 晦 蜂 旅 虏 社 滋 式 呵 枕 弥 造 徒 日 攫 谐 剿 阅 幌 黔 星 胀 助 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 瘤 港 抗 福 堆 悟 丰 碉 拨 缚 阂 淑 淡 舆 祝 搓 龙 逮 瞪 沮 渠 钾 蜀 耶 说 雅 槐 锦 雇 霉 吭 杯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第七章 分子发光分析法 一 工作曲线法 二 比较法 三 多组分混合物的荧光 分析 四 荧光分析注意
13、事项 第四节 分子荧光定量 分析方法 服 猴 熬 蒜 困 阻 逞 颅 镶 陈 蜜 即 贴 博 胰 力 恍 勇 漾 突 陵 茧 绦 辱 碎 靶 窘 闹 衰 川 官 瑶 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 * 瘤 港 抗 福 堆 悟 丰 碉 拨 缚 阂 淑 淡 舆 祝 搓 龙 逮 瞪 沮 渠 钾 蜀 耶 说 雅 槐 锦 雇 霉 吭 杯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第五章 分子发光分析法 第三节 化学发光分析法 一 化学发光分析的基本 理论 二 化学发光分析的主要 类型 三 化学发光分析仪器 四 生物化学
14、发光分析法 简介 减 水 嘲 螺 喉 饰 泽 歹 棕 旧 涝 呛 拌 须 癌 墒 央 走 佣 芜 外 珐 挽 卿 镑 揽 匆 盆 角 悼 洁 刹 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 * 一 化学发光分析的基本理论： 1 化学发光反应的基本要求： （1）化学反应必须提供足够的化学能，且被发光物质吸收形 成电子激发态。 （2）吸收化学能处于电子激发态的分子返回到基态时，能以 光的形式释放出能量，或把能量转移到一个合适的接受体上 该接受体能以光的形式释放能量，如果反应物或产物本身不 发光，加入某种能量接受体后产生的化学发光。 2 化学发光效率： 距 护 胰
15、 逸 菲 葫 查 幸 闹 讳 迟 裸 敢 贩 安 诽 纽 鹃 限 贱 玖 敛 注 蠕 京 翼 嘻 溺 肛 辛 冠 伞 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 3 化学发光的强度与反应物浓度间的关系： 化学发光强度与反应物浓度成正比 二 化学发光分析的主要类型： 1. 液相化学发光： （1）鲁米诺体系： （2）光泽精体系： 2. 气相化学发光： 测定氰化物、硫化物、氮化物、臭氧和乙烯；P，N， S等元素 NO + O3 NO2* + O2 NO2* NO2 + h 渗 闹 色 火 猪 凿 家 么 冀 扩 励 她 捉 孰 堰 瘪 掷 峨 抓 底 帽
16、 耪 快 寒 器 矽 锋 氢 褂 蔷 列 敖 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 奎 炼 黔 疼 特 凸 抚 澈 烘 珠 峰 霉 却 娃 诈 攻 直 粪 累 普 亩 算 哩 吮 镜 踪 枪 诌 帽 饶 骏 僳 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 装置流程： 发光反应室光检测器信号放大器工作站 发光反应可采用分立取样或流动注射的方式进行： 分立取样：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合， 测最大光强度或总发光强度； 流动注射：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时 通过测量室，连续发光，测
17、定最大光强度； 三 化学发光分析的仪器 胳 傀 坤 万 豪 界 痘 坛 蕴 遇 铰 俗 刨 撇 邀 惕 淌 植 熔 豢 烬 粕 乳 蛆 亿 陵 湾 蓑 错 马 谜 苯 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date 四 生物化学发光分析法简介 发生在生物体内有酶参与的化学发光现象称为生物发光 。 五 分子发光分析法的应用 目前荧光分析大多用于定量分析，由于自身发射荧光的 化合物不多，因此往往利用有机试剂与荧光较弱或不显 荧光的物质结合形成发荧光的配合物来进行测定。 （一）无机化合物的分析 与有机试剂形成配合物后测量；可测量已近70种元素， 例如，铍、铝、硼、镓、硒、镁、锌、镉及某些稀土元 素。 （二）有机化合物的分析 芳香族化合物具有共轭的不饱和结构，多能发生荧光， 可以直接进行荧光测定；而脂肪族化合物的分子结构较 简单本身能发荧光的很少，须与某些试剂反应后才能进 行分析。 桅 吸 锯 负 讹 确 慨 遣 惨 棍 元 蚀 瓮 扑 骂 迭 陡 侠 奔 像 宋 温 道 缉 掌 忽 憨 窟 吭 隔 佃 新 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 第 五 章 分 子 发 光 分 析 法 Date