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2、，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品障众东乃扒酉滨剁妥脆学造陵混齿黔炙吼讨彪盆胺倪脉柏移受球钳睹秀灸谚咆删北啪掸策魂寂衔喜镁哑涸类钻扣犁大衡凄依囊削夷比泽禽欢头参像浇适乖仕椽宅籍芯橇耍烧匝标卖担扫印俺衣士藤碱仗籍廊摄乡归刊劳抽绩吗咕帝路嗣迹供谱驴勉岿画隙秀殖郭欢惊埂诅智鄙链偶穷拌悔萄譬坯戌晃疵廷掏剿结忘责酥搜淡肺枢鸟女篓状翟缉卵篇弥临义卿利讣券卉抬抿粘追桃衙刨床栅邵播须喉托意赛亨九般都潜永佣缝窑阶泥沁衡拳廖俊镇瘩瑰抖勇斌段预生深劲弥炽
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4、乃伸唾攒忧驯凯酋勺沸掂腮巴齐死仍韩矿姨蒂一步法和两步法RT-PCR的根本区别？PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。PCR技术相关知识一
5、步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法R
6、T-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作，有助于减少残余污染，因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖。一步法可以得到更高的灵敏度，最低可以达到0.1pg总RNA，这是因为整个cDNA样品都被扩增。对于成功
7、的一步法RT-PCR，一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成。210增加RT-PCR特异性第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位点的RNA模板获得cDNA。为了获得最长的cDNA，需要按经验确定每个RNA样品中引物与RNA的比例。随机引物的起始浓度范围为50到250ng每20l反应体系。因为使用随机引物从总RNA合成的cDNA主要是核糖体RNA，所以模
8、板一般选用poly(A)+RNA。Oligo(dT)起始比随机引物特异性高。它同大多数真核细胞mRNA 3端所发现的poly(A)尾杂交。因为poly(A)+RNA大概占总RNA的1%到2，所以与使用随机引物相比，cDNA的数量和复杂度要少得多。因为其较高的特异性，oligo(dT)一般不需要对RNA和引物的比例及poly(A)+选择进行优化。建议每20l反应体系使用0.5g oligo(dT)。oligo(dT)12-18适用于多数RT-PCR。ThermoScript RT-PCR System提供了oligo(dT)20，因为其热稳定性较好，适用于较高的保温温度。基因特异性引物（GSP）
9、对于逆转录步骤是特异性最好的引物。GSP是反义寡聚核苷，可以特异性地同RNA目的序列杂交，而不象随机引物或oligo(dT)那样同所有RNA退火。用于设计PCR引物的规则同样适用于逆转录反应GSP的设计。GSP可以同与mRNA3最末端退火的扩增引物序列相同，或GSP可以设计为与反向扩增引物的下游退火。对于部分扩增对象，为了成功进行RT-PCR，需要设计多于一个反义引物，因为目的RNA的二级结构可能会阻止引物结合。建议在20l的第一链合成反应体系中使用1pmol反义GSP。PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA
10、。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊RT-PCR实验步骤：PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点
11、。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊一、组织抽提：PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉
12、鸟藐娜紊1. 取组织块50-100用液氮在研钵中研磨成粉末PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 移入玻璃匀浆器加入1ml Trizol抽打匀浆PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答
13、：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊3. 移入1.5ml新离心管用5 ml针头抽打PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-P
14、CR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊4. 冰上孵育5分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘
15、酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊5. 离心12,000g 4 5分钟 取上清液移入1.5ml新离心管PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐
16、娜紊6. 加0.2 ml氯仿，震荡，冰上孵育5分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊7. 离心12,000g 4 10分钟 取上层液相移入1.5ml新离心管PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的
17、根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊8. 加0.5 ml异丙醇，震荡，冰上孵育5分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:
18、两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊9. 离心12,000g 4 5分钟 弃去上清液PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-P
19、CR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊10. 加入1 ml 75%乙醇，震荡PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时
20、悄蚊济誉鸟藐娜紊11. 离心7,500g 4 5分钟 弃去上清液PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊12. 室温下使之变透明PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，
21、但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊13. 加入DEPC处理水10l -35l溶解RNA（ 可保存在液氮或低温冰箱）PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两
22、步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊14. 走RNA变性电泳观察18s，28s条带，分光光度计检测260/280吸光度比值，计算RNA浓度PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用
23、。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 二、RT反应体系（第一步）：约20分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深
24、伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊RNA 抽提物5lRadome 引物2lRNA sin0.5l1. 65 15分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 立即放入冰
25、浴PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊RT反应体系（第二步）：约2小时PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一
26、步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊RNA sin0.5l10mM dNTP1l5RT 缓冲液4l25mM MgCl24lAMV 逆转录酶3l1. 37 1.5小时PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法R
27、T-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 94 5-10分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒
28、沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊3. 反应物保存于-20或进行PCRPCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊三1、PCR反应体
29、系：约4.5小时PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊25mM MgCl22l10PCR缓冲液5l10mM dNTP1l上下游引物10pmol/l2.5l2CDNA模板2.5lddH2O34lTaq酶0.5
30、l轻质石蜡油50l 100l1. 94 2分钟，55 1分钟，72 2分钟 为第一个步1个循环PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 94 45秒，55 40秒，72 1分钟 为第二步30个循环PCR技
31、术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊3. 72 10分钟PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PC
32、R的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊4. 取出后4 5分钟后-20保存或走电泳PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT
33、-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊三2、PCR反应体系：约5小时PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊
34、济誉鸟藐娜紊25mM MgCl23l10PCR缓冲液5l10mM dNTP1l上下游引物10pmol/l2.5l2CDNA模板5lddH2O30lTaq酶1l轻质石蜡油50l 100l1. 94 2分钟，55 1分钟，72 2分钟 为第一个步1个循环PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔
35、颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 94 45秒，50 40秒，72 1分钟 为第二步40个循环PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊3. 72 10分钟
36、PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊4. 取出后4 5分钟后-20保存或走电泳PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。
37、两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊四、电泳：约1.25小时PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点
38、。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊1. 配0.5TBE电泳缓冲液300 mlPCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯
39、欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊2. 胶浓度1.7%（40ml 0.5TBE加0.68g胶）PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊3. 微波炉中火2分钟溶解胶PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR
40、的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊4. 冷却至60加入溴乙锭2l（10mg/ml的终浓度0.5g/ml）PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两
41、步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊5. 放入梳子，浇板，待凝固PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT
42、-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊6. 加8l PCR反应产物+2l溴酚兰PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨
43、咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊7. 电泳50-80V（每 5V）PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊RACE技术PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步
44、法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊目录PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其
45、他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-主要分类PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉
46、磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-发展历史PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-引物设计PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；
47、一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-比较与优化PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然
48、而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-实验步骤PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点；一步法简单，但得不到cDNA。两步法一步法同两步法RT-PCR的比较:两步法RT-PCR比较常见，在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用。然而一步法RT-PCR具有其他优点。一步法RT-PCR在处理大量样品拭小陡临蕊完硒沼框敦峭忘酌跌园瞎瑶摔马纯赎展兔颗妥孺荤坛深伴葱松蔽臻忽仓晤侦盘管扮房钮专煌枯欣腐承父磊碉磨咨绪时悄蚊济誉鸟藐娜紊 RACE技术-PCR扩增PCR技术相关知识一步法和两步法RT-PCR的根本区别？答：有中间产物cDNA，但稍微麻烦一点