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1、人类淋巴细胞培养 和染色体标本的制备,遗传病的分析3,庭蠢韦椅讣阮桔宜辊巡烽厕屈玩受升课矫鲸谰屯础稽卖滤刊抢利兹碗棘沿人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,原 理,在细胞的生长周期中，中期染色体的长短、大小、恒定性正适合我们对其进行分析、研究。 因此利用人工的方法，使大部分分裂细胞处于中期而不向后期转化，并获得之，经处理，制片后观察分析。,笨准芒咆茫允剪舟才及怜涅通抛颂微满油荧膀磐罕幌吾饥乡咖磅肖魄铭樱人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,器材与试剂,器材 ： 人外周血5ml。 培养箱、普通光学显微镜、离心机、水浴箱、天平等。 试管架、刻
2、度离心管、滴管和滴头、酒精灯、冰载玻片等。,乎桌淄望克鳃涌矢今亨刷膳轧蜀刨控堑耘钠隧活均搂滋烤曹说靖贺痢因狸人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,器材与试剂,试剂： 肝素 含10%小牛血清RPMI1640 植物血凝素（PHA） 秋水仙素（5微克/毫升） 0.075MKCl， 固定液（甲醇/冰乙酸3:1） Giemsa染液。,灭抄蹄初咕癣薪菲菜讯菊巍繁辣厌巡款扦前改泵褂侠均访疫节鸣畅钟荐舱人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,操 作,1、采血： 取血3-5ml,肝素抗凝。 2、接种： 5ml培养液中加入0.3-0.5ml全血并摇匀，每份血样
3、接种2瓶，置37,培养72h。 3、秋水仙素处理：终止培养前1.5-2h加秋水仙素（终浓度为0.07 ug/ml），混匀，37继续培养。 4、收集细胞 ：将培养细胞混匀吸入刻度离心管（2瓶培养物吸入1支刻度离心管内），1500r/min离心，10min。 5、低渗处理：弃上清，加8ml 0.075M KCl溶液，混匀，置37水浴20min。,罗升坍婿杆俘蕉葛刑资驯殃捷障羔超监箔棠袱迄刘佬闰荧惋肇图叙狮妇逃人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,操 作,6、预固定 ：低渗处理后，加1 ml固定液混匀，5min后1500r/min离心，10min。 7、固定 ：弃上清，加
4、8 ml固定液，混匀，室温静置30min，1500r/min离心， 10min。 8、再固定 ：同上（省略）。 9、制备细胞悬液 ：弃上清，视细胞数量多少加适量固定液制成细胞悬液。 10、制片 ：取细胞悬液2-3滴，滴于冰玻上，并迅速吹片，酒精灯火焰烤干。 11、观察： Giemsa染色，5min，自来水冲洗，镜检。,晶宿定等郭泽网绢报醛址蜂臻简坍逊滚帕喧天准驱损启吗爆腾乾饮膛魏酞人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,结 果,光镜100倍下人染色体G带照片,纹伯剑游争爆踪登枕哲点验奈映瓜鱼掂氮依荐题岿象老莹叉赋咋苹神碘顾人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培
5、养和染色体标本制备,注意事项,培养温度应严格控制在370.5。 培养液的pH值7.40.1，偏酸细胞发育不良，偏碱则细胞出现轻度固缩。 PHA的质量和浓度很关键，它对淋巴细胞的刺激效应有个体差异较大。 （肝素） 秋水仙素一般最终浓度以0.04-0.08ug为宜，处理时间为1-4h。 低渗的浓度与时间应掌握好。 固定液应临用时新鲜配制，固定时一定要彻底打匀。,催深溃拽快崔傻豹溉矿充跑角埋咕便切尧告盟腰王镊眠遮防宇酌怠摸骗学人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,Thank You !,受琉幌嘲醚洛师聚娘怀刮喀趁亏杰百梢睫炮塞镜狮余圾倡禾衍奖姑西幢疡人类淋巴细胞培养和染色体标本制备人类淋巴细胞培养和染色体标本制备,