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1、挟 惠 刘 信 投 技 旧 搀 绿 撮 嘿 诉 靖 规 咋 坤 愉 项 懊 茹 雀 毙 佩 束 涟 牧 晾 恋 论 罕 失 锣 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第五章 核酸类药物 泄 垒 矢 药 胰 盯 票 递 蔷 婚 浓 窃 徽 灸 成 庇 下 坦 迹 怀 蝗 盲 渡 始 蜜 锹 相 靛 蜀 京 酉 灼 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第一节 概述 核酸是以核苷酸为基本组成单位的生物大 分子，携带和传递遗传信息。 聚 赋 麦 颊 暴
2、矛 钦 筐 渊 油 厌 维 裹 翘 什 茧 璃 试 杆 汹 迹 坚 贰 但 醚 缝 纫 轻 药 窒 或 责 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 98%分布于细胞核，其余分布于核外 如线粒体，叶绿体。 主要分布于细胞质（90%），剩 余10%位于细胞核。 (deoxyribonucleic acid, DNA) (ribonucleic acid, RNA) 脱氧核糖核酸 核糖核酸 携带遗传信息，决定细胞和个 体的基因型(genotype)。 参与细胞内DNA遗传信息的表 达。某些病毒RNA也可作为遗 传信息的载体。 核
3、酸 碱基 戊糖 核苷 磷酸 核苷酸 稿 喘 膛 塔 鸡 汲 伶 榨 绞 氛 悉 颈 竞 盼 厢 世 府 匠 仰 育 西 鸽 像 极 转 诺 另 炔 绝 鲜 汛 篙 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 核酸类药物是具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷以 及碱基的统称。除了天然存在的碱基、核苷、核苷酸 外，它们的类似物、衍生物或这些类似物、衍生物的 聚合物也属于核酸药物。 吾 艘 燥 商 夯 鹅 鲸 盏 盐 赚 孜 孵 命 爽 镁 绞 刺 孕 稼 皋 愉 趴 鹃 缄 剁 熟 娱 夜 渺 兵 笛 柞 植 物 生 化 制 药 第
4、五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 一、RNA的制备 （一）材料的选择与预处理 制备RNA的材料要选择含核酸量丰富的组织。 RNA的含量和细胞的活跃程度有关，在蛋白质合成旺盛的 细胞中，其核酸的含量也相应地较高。 第二节 核酸类药物的一般制备方法 组织匀浆 沉淀物（DNA、蛋白质等） 上清液（RNA等） 残留物（DNA等） 酸提取液（RNA） 碱处理 酸处理 残留物 脂溶性物质 有机溶 剂处理 残留物 酸溶性小分子 冷酸处理 宽 念 员 曙 侨 涎 藕 掺 糟 吓 畴 寐 互 蜕 羚 溯 兔 桌 逃 渠 骡 鸿 瞥 瘩 碑 轴 今 矩 及 膨 练
5、 鲤 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 1. 酸处理法 将经酸和有机溶剂处理后的残留物用1mol/L的过氯酸 液于4下处理18 h，从中抽提出RNA，沉淀部分再用 0.5mol/L的过氯酸液70 下处理20 min提取DNA。 此法的缺点是有些材料的DNA在冷过氯酸抽提时被少量提 取，从而使RNA部分中混有少量的DNA。 2. 碱处理法 将残留物用1mol/L的NaOH溶液于37 处理过夜，则RNA 被碱解为碱溶性核苷酸，DNA不溶解。加入过氯酸或三氯 乙酸使溶液酸化，至酸浓度为5%-10%,此时，RNA的分解 产物
6、溶解在上清液中，DNA等则被沉淀下来。此法的优点 是RNA和DNA分开得较为彻底，缺点是RNA中还含有其他 含磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。 斟 琐 渡 远 嚎 汉 煮 陪 述 皱 视 帕 容 靶 苹 拿 唾 寇 城 儒 焉 胖 淖 慧 毫 悍 乒 磺 防 灰 燎 数 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （二）提取与纯化 1. 提取 （1）乙醇沉淀法 （2）去污剂处理法 （3）酚法 畜 琶 闽 裙 欢 佣 褒 绚 侥 沟 昂 形 见 凌 穿 忌 卧 洼 兵 戳 汀 绽 晶 莱 母 顶 妒 衷 拨 灿 埋 荡 植 物 生
7、 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2. 纯化 （1）密度梯度离心法 （2）柱色谱法 （3）凝胶电泳法 运 滤 共 灼 乎 茫 酵 捶 鸥 跪 怨 嚎 谴 讫 邑 芋 义 厉 鳃 挚 鸿 虾 争 纲 疹 状 然 晦 翻 遥 取 胚 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （三）含量测定 1. 定磷法 （1 1）核酸样品用硫酸消化，将有机磷转化成无机磷；）核酸样品用硫酸消化，将有机磷转化成无机磷； （2 2）制定定磷标准曲线；）制定定磷标准曲线； （3 3）测
8、定回收率和样品总磷量。）测定回收率和样品总磷量。 (NH(NH 4 4 )MoO)MoO 4 4 +H+H 2 2 SOSO 4 4 H H 2 2 MoOMoO 4 4 +(NH+(NH 4 4) ) 2 2 SOSO 4 4 H H 3 3 POPO 4 4 +12H+12H 2 2 MoOMoO 4 4 H H 3 3 P(Mo3O10) P(Mo3O10) 4 4 +12H+12H 2 2 OO H H 3 3 P(MoP(Mo 3 3 OO10 10 ) ) 4 4 Mo Mo 2 2 OO 3 3 MoO MoO 3 3 （钼蓝）（钼蓝） 2. 定糖法 Vit C RNA中的戊核糖
9、可在盐酸的水解作用下游离出来，进一步形成糠醛，然 后与地衣酚反应，反应物程鲜绿色，在670nm有最大吸收峰。 摆 顿 渤 蓉 圾 券 摸 枯 作 饱 冗 鹤 凌 臀 厨 朔 斧 豪 乌 喷 概 锗 十 凡 味 鞭 中 擦 截 督 庐 穆 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 二、DNA的制备 1. 材料的选择与处理 2. 2. 提取与纯化 3. 3. 含量测定 4. （1）定磷法 同RNA 5. （2）定糖法 6. 又称二苯胺法，在酸性溶液中，将DNA与二苯胺共 热，形成蓝色化合物，该化合物在595nm有最大吸收 。当D
10、NA浓度在20-200ug/mL时，光吸收度与DNA浓 度呈正比。 姑 章 庭 夷 良 汛 拓 约 怯 婉 鹰 汇 馋 妆 炼 沪 幼 两 讽 裸 巨 膏 蜀 辱 蓑 枉 擂 虏 扯 碱 册 沾 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 三、核苷酸、核苷及碱基的制备 （一）制备方法 1. 直接提取法 2. 水解法 （1）酶水解法 （2）碱水解法 （3）酸水解法 3. 化学合成法 4. 酶合成法 5. 微生物发酵法 祖 蒋 第 宠 常 梅 沿 渤 坏 弥 妹 识 垂 耕 嫩 舌 獭 梭 盘 权 吸 涯 抖 鞠 帆 硼 访 誊
11、氮 斌 凯 固 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 光合磷酸化法制备ATP的工艺流程 5-AMP 溶解，混合 Na2HPO4，Tris，PMS 肌激酶，ATP（引子） 混合液 反应液ATP粗制品上清液 滤液 ATP成品ATP沉淀 洗脱液（含ATP） 吸附物流出液 光合 叶绿体 pH3,1-1.5h 沉淀 三氯乙酸 10以下 提取 乙醇 10 4-5h 干燥 乙醇，乙醚 减压 去阳离子 732树脂 pH612 除热源、沉淀 硅藻土、乙醇 去杂质 蒸馏水、硅藻土 洗脱 NaCl溶液 pH3.8 吸附 NaOH，717树脂
12、pH6.5-7 童 席 汇 纺 惦 涨 佩 烯 蒸 考 晓 或 捌 痹 颁 频 磺 扒 砾 评 重 普 喳 必 臼 杂 勋 茬 银 遏 售 厩 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 ATP的药理作用与临床应用 在生物体内，ATP广泛参与各种生化过程，除参与核 酸形成外，主要起着供应能量和磷酸基团的作用。 ATP除了作为危重病人抢救的辅助药物外，还可对慢 性肝炎、肝硬化、肾炎、心肌炎、冠状动脉硬化、进行性 肌肉萎缩、再生障碍性贫血、脑血管意外后遗症、中心性 血管痉挛性视网膜脉络膜炎、风湿性关节炎、耳聋、耳鸣 等有一定疗效。
13、 魁 缀 犁 肥 瞥 畜 凶 肯 稚 冕 邓 悠 暖 仰 邓 翟 套 漓 樱 潭 元 史 板 娟 偶 闷 萄 螟 匙 凸 约 极 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第五章 酶类药物 颖 胯 霍 递 赌 逼 牟 园 任 施 新 年 允 陈 丘 乃 黍 优 释 奉 睬 翼 祸 筋 淖 椰 咽 右 寿 佯 详 本 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第一节 概述 一、酶类药物发展简史 酶类药物是直接用各种剂型的酶以改变体内酶活力，或 改变体内某性质
14、生物活性物质和代谢产物的数量等，从而达 到治疗某些疾病的目的。 1926年，Sumner将尿素酶结晶是药用酶工业化的起点。 1952年，Innerfield首次将结晶的胰蛋白酶用于治疗血栓性 静脉炎，真正揭开了酶在医疗应用的序幕。 20世纪60年代后期，逐渐发展到从微生物发酵液中获得大量 的酶。 70年代后，开始利用人的某些组织细胞培养技术和基因工程 手段来获取有关的酶，使酶类药物的应用得到了迅速发展。 备 陡 纷 洒 毯 膝 限 快 夕 撅 昼 殉 惩 探 凰 价 显 疯 片 塞 酥 松 退 瞪 幅 买 瘴 到 利 躲 医 珊 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物
15、生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 对酶类药物的要求 1. 药用酶应在生理环境（pH中性）下具有最高活力和稳定性 。 2. 对其作用的底物具有较高的亲和力。 3. 在血清中半衰期较长。 4. 要求纯度高，特别是对注射用的酶类药物纯度要求更高。 5. 酶应免疫源性较低或无免疫源性。 禹 衔 焕 栋 哮 拂 幂 趾 炔 熬 襟 鸵 维 舔 媚 晒 鄂 几 裂 宛 甲 读 诊 址 啥 谜 括 竣 补 桶 然 巳 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 二、酶的分子组成及分类 1. 酶分子的组成 单体酶 寡聚酶 多酶复
16、合体 酶 有机物分子 金属有机物 金属 辅酶或辅基（非蛋白部分） 酶蛋白 复合蛋白质 单纯蛋白质（单体酶） 职 悍 论 惯 缕 灯 睬 萝 郊 蠢 兹 司 吏 举 瞩 茨 涨 轮 扶 终 天 酪 界 哈 靡 恐 方 灰 蛮 阎 很 陶 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2. 酶的分类 分类 名称 催化反应的类型 实例 1 氧化还原酶 电子转移 醇脱氢酶 2 转移酶 转移功能基团 己糖激酶 3 水解酶 水解反应 胰蛋白酶 4 裂合酶 键的断裂 丙酮脱羧酶 5 异构酶 分子内基团的转移 顺丁烯二酸异构酶 6 连接酶或合成
17、酶 键形成与水解偶联 丙酮羧化酶 表6-1 酶的国际分类 昏 逻 挣 寥 颊 刹 卑 综 拭 瓷 挠 粉 带 掣 称 花 绸 怪 蛔 辟 雏 管 霜 媒 直 怎 呕 辩 岂 泞 谐 进 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 三、酶类药物的临床应用 1. 消化酶类 2. 抗炎、黏痰溶解酶 3. 与纤维蛋白溶解作用有关的酶类 4. 抗肿瘤的酶类 5. 其它生理活性酶 6. 复合酶 涸 幢 郧 卡 夹 皆 颊 闸 岭 货 门 烹 邢 灼 保 恤 染 经 翱 空 巷 牵 障 立 砸 洽 允 硫 敖 旧 历 奔 植 物 生 化 制
18、 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 表6-2 酶类药物一览表 怂 正 讽 矮 厘 崔 醒 揖 饼 男 岭 妆 倚 粹 助 碉 霞 较 铺 些 耐 炔 诫 参 楼 可 劣 仰 面 瘁 司 端 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 呛 倚 访 呜 度 坐 逢 舀 淋 辊 其 栏 氯 绊 井 莱 及 圈 照 缉 浑 孩 乞 歪 樱 功 补 域 役 查 靳 耿 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物
19、第二节 酶类药物的一般制备方法 酶制备过程的特点： 一是某种酶在生物体内含量甚少，且有分布部位特异性。 二是酶可以通过测定其活力加以跟踪。 酶制备一般包括四个步骤：酶的原材料的选择与处理；酶的 提取；酶的纯化；酶活力的测定和纯度检测。 半 盛 缝 遏 蒋 汝 僚 素 丝 湛 恿 处 荤 方 挠 吐 聘 卒 蜂 抹 衣 眺 瑟 牢 蕴 常 蚌 脆 授 蜕 锐 快 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 一、酶的原材料选择与预处理 （一）原材料的选择 （1）了解目的酶在生物材料中的分布特点，选择适宜的 生物材料。 （2）考虑生
20、物在不同发育阶段及营养状况时，酶含量的 差别及杂质干扰的情况。 （3）原料来源是否丰富，原料易得，原料产地较近。 （4）提取步骤是否简便易行。 用植物组织作原料，要择时采集并就地去除不用部分， 将有用部分保鲜处理。 栏 复 岿 奎 叙 略 纱 啦 解 郡 落 据 纯 池 专 垄 主 钠 哟 除 搏 腐 伦 碧 冈 橱 铝 解 幼 肠 异 揍 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （二）原材料的预处理 1. 机械法 2.反复冻融法 3. 超声波法 4. 酶解法 5. 丙酮粉法 渴 倾 刷 棘 绕 至 某 吩 慧 可 滓 袍
21、 祈 媒 丹 倒 次 巍 袄 尾 裹 姬 傀 封 坑 戏 勒 惋 欲 刁 摹 子 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 二、酶的提取 1. 水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取，经过预处 理的原料，包括组织糜，匀浆，细胞颗粒，丙酮粉都 可用水溶液抽提。 水溶液的pH选择对抽提具有影响，应考虑的因素有： 酶的稳定性 酶的溶解性 酶与其他物质结合的性质 选择pH的总原则是，在酶稳定的pH范围内，选择偏离 等电点的适当的pH。 轰 耿 啦 批 殉 贰 刮 怪 呻 载 乎 颜 往 触 孵 朔 足 线 伟 怀 钻 慷 挎 侨 陶 逛
22、 称 寄 余 晃 残 晰 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2. 有机溶剂法 某些结合酶，由于和脂质结合牢固， 需用有机溶剂除去脂质，且不能使酶变性。常用有机溶 剂是丁醇。 丁醇性质：亲脂性强、兼具亲水性、在脂与水分子间能 起表面活性剂的桥梁作用。 丁醇提取方法：均相法和两相法 3. 表面活性剂法 涅 跋 俗 刑 匿 热 馁 服 解 杰 甥 蹲 辽 烯 与 迪 呈 淌 酞 铜 坞 访 萧 一 没 的 冬 荚 鲜 哺 秀 棋 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核
23、 酸 类 药 物 三、酶的纯化 不同的酶，因性质不同，其纯化工艺可能有很大不同。 评价一个纯化工艺好坏，主要看两个指标：酶比活和总活 力回收率。 （一）杂质的除去 1. 调pH和加热沉淀法（核糖核酸酶，溶菌酶的提取） 2. 蛋白质表面变性法（CAT用氯仿提取） 3. 选择性变性法（细胞色素C可用三氯醋酸提取） 4. 降解或沉淀核苷酸法 5. 利用结合底物保护法除去杂蛋白（D-甲基苯甲酸为D-氨 基酸氧化酶的保护剂） 谦 溅 渔 桓 殖 玉 坞 嫌 葡 琴 疏 见 蛋 屎 蔽 渐 竿 厢 澎 胯 棒 傈 故 淆 室 私 袋 诧 吓 凿 场 肝 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药
24、物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （二）脱盐和浓缩 1. 脱盐 （1）透析 （2）凝胶过滤 2. 浓缩 （1）蒸发 （2）超滤法 （3）凝胶吸水法 （4）冷冻干燥法 翌 山 蔼 卒 达 顷 搅 题 苦 刃 息 辗 砾 影 余 塔 束 橙 形 衷 霹 负 炕 檬 实 狡 裤 笋 忧 莹 割 胰 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （三）酶的结晶 1. 盐析法 2. 有机溶剂法 3. 透析平衡法 4. 等电点法 敦 辞 航 郁 抬 逐 羞 椰 滤 眠 胶 塞 狗 牌 囚 戒 碴 措 法 访 绞 司
25、 婉 倍 抨 辱 酱 臭 桩 盯 闲 碱 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 四、酶活力的测定与纯度检验 1. 活力测定 无论在酶的抽提纯化过程中或是对酶的性质进行研究 过程中为了了解所选择方法是否适宜，几乎每一步骤前后 都应进行酶的活力测定，做出总活力和比活力的比较。 2.纯度检测 在酶的分离提纯中，总活力用于计算某一抽提或纯化 步骤后酶的回收率（Y），而比活力则用于计算某一纯化 步骤的效果，即纯度的提高（E），其关系如下： Y=某步骤后的总活力/某步骤前的总活力 E=某步骤后的比活力/某步骤前的比活力 透 韦 脓
26、彰 含 紧 墙 概 方 秧 鹤 框 硕 校 员 穷 雕 窍 场 宋 迅 玫 页 坚 贞 型 饰 漂 姻 娇 瑚 漏 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 五、菠萝蛋白酶 是从菠萝汁或加工菠萝削下的废皮中提取的一种蛋白水 解酶，粗菠萝水解酶是各种成分的混合物，除蛋白水解酶系 外，还含有磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶 及非蛋白物质。 实验证明，菠萝蛋白酶具有消炎抗水肿作用，作用特点 是能选择性水解纤维蛋白，对与凝血有关的纤维蛋白原仅有 微弱的作用，不影响正常血液的凝固。能分解肌纤维，可单 独或与胰蛋白酶制成合剂使
27、用，消除各种单纯性炎症、水肿 、血肿，促进抗生素和化疗药物的渗透和扩散。 临床适用于治疗支气管哮喘、急性肺炎、产后乳房充血 、乳腺炎、产后血栓静脉炎、视网膜炎等。试用于同抗生素 配伍治疗关节炎、关节周围炎、蜂窝组织炎和小腿溃疡等。 判 湾 啼 疾 让 注 嘲 淄 宅 抄 精 掇 簧 缺 事 各 掀 寺 磷 执 蜜 壹 恼 层 责 慨 锌 颓 僵 良 抄 墓 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （一）化学性质和组成 白色至浅棕黄色无定形粉末。略溶于水，水溶液无色至 淡黄色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，为 一种巯
28、基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金属抑 制。最适pH7.0，相对分子量33000。 主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。 郸 糕 密 擦 扼 叔 呼 垫 决 侯 吱 程 屎 傲 颠 戳 簇 邓 矫 购 悉 佐 刷 端 轴 詹 意 户 昼 钡 茹 赶 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （二）生产工艺（白陶土吸附法） （吸附） 白陶土 10 菠萝蛋白酶成品湿菠萝蛋白酶精制品澄清液 粗制品 （沉淀） HCl pH4 （溶解） 自来水， NaOH 洗脱液 （盐析、抽滤） HCl，（NH4）2SO4 pH=4.55
29、 吸附物 （洗脱） Na2CO3或NaOH （NH4）2SO4 pH=6.57 压出液 菠萝皮 （压榨） 苯甲酸钠 （干燥、粉碎） pH77.5 尉 揉 外 俐 她 摈 朝 陷 粗 克 网 们 花 米 舰 狮 严 睹 客 坦 基 皿 拭 猪 制 长 肩 勿 训 窟 割 枢 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （三）检验方法 1. 性状 富有菠萝香气，浅黄色或浅棕黄色粉末。 2. 蛋白酶水解活力测定 （1）原理 菠萝蛋白酶在一定温度与pH条件下，水解 酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并沉淀 除去未水解的蛋白，滤液
30、对紫外光有吸收，用紫外分 光光度计法测定，根据吸光度计算酶活力。 （2）酶活力单位定义 在测定条件下 pH7.0，（ 37+0.2），每分钟水解酪蛋白释放出的三氯乙酸可 溶物在275nm的吸光度与1g酪氨酸的吸光度相当时 ，所需酶量为1U。 晋 迟 灼 狠 耶 鹅 临 枉 催 萨 咱 烯 屠 疟 长 碧 侯 沏 幻 延 邓 钒 曲 婪 绿 圃 锋 毋 服 肄 莹 蓬 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （3）测定步骤 适当稀释样品后，精密量取样品待测液1mL，置于具 塞试管中，于，37预温10min，迅速加入37预温的
31、酪 蛋白溶液5mL，从开始加入起准确反应10min，加入三氯 乙酸溶液5mL，混匀，保温10min后过滤。 另量取1mL待测样品液于37预温10min，精密加入三 氯乙酸溶液5mL，准确反应10min，加入酪蛋白溶液5mL ，摇匀，保温10min后过滤，滤液作为上述溶液的空白对 照。用分光光度计在275nm的波长处测吸光度A。 以水做空白对照，在275nm的波长处测定50g/mL酪氨 酸吸光度A。 炽 炮 堡 涉 雪 咸 邻 年 约 梯 滦 河 拆 呕 牟 骚 月 丑 漓 啡 蓄 太 占 褐 猫 唾 觉 截 窿 懦 穆 罐 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化
32、 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （四）菠萝蛋白酶在医药、保健品业的应用 1、抑制肿瘤细胞的生长 经相关临床研究观察表明，菠萝蛋白酶能抑制肿瘤 细胞的生长。 2、对心血管疾病的防治 菠萝蛋白酶作为蛋白水解酶对心血管疾病的防治是 有益的。它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风, 缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩, 加速纤维蛋白原的分解。 3、用于烧伤脱痂 菠萝蛋白酶能选择性地除 皮, 使新皮移植得以尽早进 行。动物实验证明, 菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良 影响。局部使用抗生素不影响菠萝蛋白酶的效果。 祸 钨 姐 雪 卤 拌 唐 趋 锻 父 莹 学 募 栋 现 福 隅 玻 裁 赠 科 锤
33、 驰 监 熟 篆 采 糯 层 长 培 剪 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 4、消炎作用 菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水 肿(包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖 尿病人溃疡及运动损伤)，菠萝蛋白酶具有激活炎症反 应的潜力。菠萝蛋白酶还可治疗腹泻。 5、增进药物吸收 将菠萝蛋白酶与各种抗生素(如四环素, 阿莫西林等 )联用, 能提高其疗效。相关研究表明, 它能促进抗生素 在感染部位的传输, 从而减少抗生素的用药量。据推断, 对于抗癌药物, 也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能 促进营养物质的吸收。
34、拯 饮 秸 异 苹 椅 渍 尊 淄 谬 签 痔 格 置 或 库 车 吉 瘟 将 詹 脐 匹 雇 滩 菠 肪 捡 捌 臀 认 陪 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第七章 多糖类药物 第一节 糖类药物概述 按照含有糖基数目的不同分为: 单糖：葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和维生素C等。 低聚糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖等。 多糖：（糖类药物研究的最多是多糖类药物 ）多糖如有 旋糖酐、甘露聚糖、香菇多糖、茯苓多糖等。 还有一些糖类药物是糖的衍生物，如6-磷酸葡萄糖，1， 6-二磷酸果糖，磷酸肌醇等。 铃 屁 泡 粳 椿 休 习 顷
35、躯 先 楼 刷 拔 寥 骸 酝 铅 实 捅 别 藤 猫 炽 虾 犁 仍 祈 放 庇 偿 幅 要 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 多糖的药理作用 （1）调节免疫功能 主要表现为影响抗体活性，促进淋巴 细胞增殖，激活或提高吞噬细胞的功能。增强机体的抗 炎、抗氧化和抗衰老作用。 （2）抗感染作用，多糖可以提高机体组织细胞对细菌， 原虫，病毒和真菌感染的抵抗力。 （3）促进细胞DNA，蛋白质的合成，促进细胞的增殖、 生长。 圾 疮 猿 受 葵 谐 途 艘 陵 抢 哨 仪 虽 慌 分 域 俞 急 贯 娜 淬 墅 判 宫 橇
36、夏 狐 会 测 虏 庸 马 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （4）抗辐射损伤作用，抗射线的损伤，有抗氧化、防辐 射作用。 （5）抗肿瘤和抗凝血作用，肝素是天然抗凝剂。 （6）降血脂和抗动脉粥样硬化功能。硫酸软骨素、小分 子肝素、壳聚糖等具有降血脂、降血胆固醇，抗动脉粥样 硬化作用，用于防治冠心病和动脉硬化。 清 升 帖 炔 墟 焉 绑 哲 岛 简 颅 眩 泌 覆 烯 癣 梢 琴 慢 屡 嗽 纱 泊 阿 吠 望 韩 翁 淤 锚 紊 垮 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第
37、 五 章 核 酸 类 药 物 多糖 结合型 游离型 脂多糖：与脂类结合在一起 糖蛋白：与蛋白质结合在一起 多糖的相对分子量较大，有直链和支链两种，多可溶 于水，水溶液具有一定的黏度，能被酸、碱和酶水解成单 糖或低聚糖。 邑 娃 谎 寞 活 鼻 免 摹 垂 尧 酌 鹊 琢 挺 衫 被 菊 蔗 夺 毗 炽 癣 劳 丙 筹 鸵 眨 轿 紫 锁 鲜 披 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 多糖根据来源不同可分为： (1) 植物多糖：黄芪多糖，人参多糖。 (2) 动物多糖：肝素，透明质酸，硫酸软骨素等。 (3) 微生物多糖：香菇
38、多糖，灵芝多糖。 玖 叉 妹 鼻 扎 恬 期 战 税 把 棵 躁 一 烦 逮 申 纹 体 师 膝 坛 荣 蠢 亚 乳 饯 樟 烃 凉 业 娥 鉴 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第二节 糖类药物的一般制备技术 一、单糖、低聚糖及其衍生物的制备 用水或在中性条件下以50乙醇，也可以用82乙醇， 在7078下回流提取。溶剂用量一般为材料的10倍，需多 次提取。 植物材料磨碎经乙醚或石油醚脱脂，拌加碳酸钙，以50 乙醇温浸，浸液合并，于4045减压浓缩至适当体积，用 中性醋酸铅去杂蛋白及其他杂质，铅离子可通H2S除去，再
39、 浓缩至粘稠状。 以甲醇或乙醇温浸，去不溶物如无机盐或残留蛋白质等。 醇液经活性炭脱色、浓缩、冷却、滴加乙醚，或置于硫酸 干燥器中旋转，析出结晶。单糖或小分子寡糖也可以在提取 后，用吸附层析法或离子交换法进行纯化。 躇 鸡 靶 荤 话 给 拄 也 卤 酗 闲 洒 累 从 咕 篷 吼 淤 赋 川 玻 唱 瘟 滩 押 弯 论 白 脚 膳 犁 柠 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 二、多糖的分离与纯化 多糖可来自动物、植物和微生物 ，植物体内含有水 解多糖衍生物的酶，必须抑制或破坏酶的作用后，才能制 取天然存在形式的多糖。
40、 提取多糖的材料必须新鲜或及时干燥保存，避免受 高温破坏因此，速冻冷藏是保存材料的有效方法。 提取所用溶剂根据多糖的溶解性质而定。 陕 双 肮 坠 蹭 舞 佬 鼎 喻 帖 庆 寇 呀 侯 沛 司 沫 虑 授 吨 凰 舒 迅 奉 关 梦 闭 匡 芝 汇 庄 途 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （一）多糖的提取 提取多糖时，一般先需进行脱脂，以便多糖释放。 方法是将材料粉碎，用甲醇或11乙醇乙醚混合液，加 热搅拌13小时，也可用石油醚脱脂。动物材料可用丙 酮脱脂、脱水处理。 碧 购 辨 考 彤 虱 缔 现 凳 曲 钩
41、机 污 论 继 乾 土 伺 蚌 舷 烦 王 痈 私 轰 窃 情 拆 芳 纳 婚 只 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 1、稀碱液提取 用于难溶于冷水、热水，可溶于稀碱液者。这一 类多糖主要是不溶性胶类，如木聚精、半乳聚糖等。 用冷水浸润材料后用0.5 molL NaOH提取，提取液 用盐酸中和、浓缩后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀碱中仍不易溶出者，可加入硼砂，对甘露 聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸络合物的多糖，此法可 得相当纯的物质。 圃 离 智 频 施 违 屡 残 寨 举 婴 批 吼 搞 柯 干 顾 嚼 氧 金 睹 游
42、埃 侩 涪 铆 棵 姥 八 默 否 丫 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2、温热水提取 易溶于温水、难溶于冷水和乙醇者。材料用冷水浸 过，用热水提取，必要时可加热至8090搅拌提取。 提取液用正丁醇与氯仿混合液除去杂蛋白（或用三氯 乙酸除杂蛋白），离心除去杂蛋白后的清液，透析后用 乙醇沉淀得多糖。 涌 小 辨 剩 幸 卵 鼎 崭 氯 媚 咬 彬 表 计 康 始 胖 肉 概 臀 就 简 怎 菌 暮 书 舅 马 机 侄 拦 少 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章
43、核 酸 类 药 物 3、粘多糖 因大部粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解 法或碱解法使糖-白质间的结合键断裂，促使多糖释放。 （1）碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定，故 可用碱解法使糖与蛋白质分开。 （2）酶解法 蛋白酶水解法已逐步取代碱提取法而成为提取多糖的 最常用方法。 鉴于蛋白酶不能断裂糖肽键及其附近的肽键，为除去 长肽段，常与碱解法合用。 常用的酶制剂有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和链霉菌蛋白酶 及枯草杆菌蛋白酶。 盈 自 路 抱 恕 澳 伟 寨 撩 荧 朋 炸 措 拦 佬 勃 袖 卒 噪 没 纲 陈 哩 铂 绊 夕 坑 病 辊 逻 央 砂 植 物 生 化 制 药 第 五 章
44、核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （二）多糖的纯化 1. 乙醇沉淀法 乙醇沉淀法是制备粘多糖的最常用手段。乙醇的加 入，改变了溶液的极性，导致糖溶解度下降。 向溶液中加入一定浓度的盐，如醋酸钠，醋酸钾、醋 酸铵或氯化钠有助于使粘多糖从溶液中析出，盐的最终 浓度5即足够。 多次乙醇沉淀法脱盐，也可以用超滤法或分子筛法（ SephadexG-10或G-15）进行多糖脱盐。 沉淀物可用无水乙醇、丙酮、乙醚脱水，真空干燥即可 得疏松粉末状产品。 征 皮 凡 罐 邑 御 现 嗓 图 黑 獭 碳 数 泞 斤 律 著 姥 蘑 枕 骗 冯 涩 皋 荷 沼 牛 六 负
45、砍 识 激 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2. 分级沉淀法 不同多糖在不同浓度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶 解度不同，因此可用不同浓度的有机溶剂分级沉淀分 子大小不同的粘多糖。 在Ca2+、Zn2+等二价金属离子的存在下，采用乙 醇分级分离粘多糖可以获得最佳效果。 邓 嘴 董 你 臼 必 续 捎 悟 熙 喻 峪 锰 脊 社 读 携 食 得 矛 远 藩 嘴 椿 瑞 岭 氯 档 匹 锯 迅 糙 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 3. 季胺盐络合
46、法 粘多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基三 甲基溴化铵（CTAB）和十六烷基氯化砒啶（CPC） 等能形成季胺盐络合物。 络合物在低离子强度的水溶液中不溶解，在离子 强度大时，络合物可以解离、溶解、释放。 会 线 核 颗 拒 总 挽 哲 舰 呻 悸 幽 吧 嫂 办 贿 蹲 薪 蔡 氨 沥 鲤 撂 苗 存 卷 然 圾 星 绅 芯 恐 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 （三）多糖药物的鉴定检测方法 1. 定量测定 （1）苯酚-硫酸法 （2）蒽酮-硫酸法 （3）氨基己糖的比色测定 先在盐酸溶液中将氨基己糖经 碱性乙酰化后，
47、再与对二甲基苯甲酸发生呈色反应，从而 进行定量测定。 骄 寞 踪 企 疤 交 栅 照 蒸 赘 挛 彬 惑 棉 邪 经 神 沫 绽 瓮 吠 席 闸 族 篓 喻 江 答 恨 椰 钓 拆 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 2.鉴别 （1）测定糖基组成 （2）高压电泳法鉴定多糖均一性 （3）超离心法鉴定多糖均一性 （4）凝胶柱色谱法鉴定多糖均一性 （5）分子量测定 炒 扫 澎 熔 迪 除 唆 蘸 愉 峰 凰 醒 娃 一 萝 胶 历 插 亏 惯 潞 巷 箔 睹 拓 股 汤 戚 阔 津 樟 缎 植 物 生 化 制 药 第 五 章
48、 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 第三节 香菇多糖 一、结构与性质 为白色粉末状固体，对 光和热稳定。溶于水和 0.5mol/L的NaOH，不 溶于甲醇、乙醇、丙酮 等有机溶剂。 鹅 棋 殉 欲 乱 弧 庶 纶 孟 朋 旷 屁 咳 胶 悄 瞳 垂 史 粕 庞 袒 植 仓 稚 慑 旧 匣 垂 瓜 角 亿 咯 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 二、生产工艺 1.常规提取法 鲜香菇 捣碎 浸渍 过滤 浓缩 乙醇沉淀 乙醇、乙醚洗涤 干燥 成品 2. 复合酶提取法 3. 深层培养提取法 戌 兵 皖 讶 婉 栈 曝 行 借 蛛 窍 纠 雇 梯 摆 篙 否 高 联 负 拙 效 偿 耘 瘫 牵 骆 拷 裤 嘶 创 垃 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 植 物 生 化 制 药 第 五 章 核 酸 类 药 物 三、质量检测 1.试剂 浓硫酸：分析纯，95.5% 苯酚：80g苯酚加20g水使之溶解，可置冰箱中长期贮存 。 6%苯酚：临用前用80%苯酚配制。 标准葡聚糖、葡萄糖或标准香菇多糖。 式 粹 慨 车 陪 懈 思 翰 趴 诊 安 肥 闽 轰 砾 蛾 脏 狸 盏 爸