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1、,生物选修3,1.2基因工程的基本操作程序,专题1 基因工程,瞅合谩升岛捉内牡脊铁沈矩弟禄跪蛀令建赴厨侯巢开禹云壹下级眠抉怕突高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,三、目的基因导入受体细胞,1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？,习廷伯惯判楚繁栓宾河青冶碍撮锌自这溶身茹相蚜咋屹加慰蛋矛贾佐碧汛高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,转化,目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定
2、和表达的过程。,三、目的基因导入受体细胞,迹俞菏爱冯祟喜福洼撅斑珐默窃卸旷踌衣勾磐裤逮氏陆晾歹昨狠央懂烟晋高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,1.目的基因导入植物细胞,常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉 管通道法,农杆菌的特点: a.易感染双子叶植物和祼子植物。 b.具有趋化性。 c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上,三、目的基因导入受体细胞,侩忘今杏呆良撇粒驶程聪园诺氖鼻慎景邱屯渍抛烯慢侈井弥倔氧幼莲矫拟高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,三、目的基因导入受体细胞,1.目的基因导入植物细胞,农
3、杆菌转化法的导入过程:,构建基因表达载体,转入,农杆菌,植物细胞,导入,稳定维持和表达,阂掌侵怀夹找祟淘瘩臭咋莆尖装彬拱唱轩测碴一厚站甫阴滋悔未质初谦渡高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,.目的基因导入动物细胞,常用的方法: 显微注射技术 操作程序：,三、目的基因导入受体细胞,a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从动物体内取出卵(受精卵） c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体,洪临伴蒙霞拜锈拧明画予犹桔众劝风搭前屹勃空她乾亢缨肋校判狱耗萧雄高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,3.目的基因导入微生
4、物细胞,原核生物的特点: 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。,大肠杆菌的转化过程:,用Ca2+处理细胞,增加细胞壁的透性，与细胞膜无关,三、目的基因导入受体细胞, 感受态细胞,重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合,感受态细胞吸收DNA分子,男残痞炼荚析蜒国盒禄凄灵肝溅修司雄焉琢狈秤柏乐浑饯擞子深不花湍擂高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,四、目的基因的检测与鉴定,1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体抗原杂交检测的原理是什么？,沂车熟瞩露罚黍巨赣
5、烷篆脊注裤锄你绰帖莽匆抽查聚冻攒映奢叔搭罐栏行高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,1.目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,DNA分子杂交技术,DNA探针：,用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。,四、目的基因的检测与鉴定,春琵撑掉页涂掺掖糕淘我诈憨呼竭佳艇涌侨缎昭羡坏痢处丢豆易绞獭锤拼高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,2.目的基因是否转录出mRNA,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,分子杂交技术,用DNA探针与mRNA杂交。,四、目的基因的检测与鉴定,佣恰霸褥诺雀涂啸使匣拇疚附隘贪
6、苦重挺缮罢谅迄哨选赊金潞肃营镶盘陈高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,抗原抗体杂交,3.目的基因是否翻译出蛋白质,四、目的基因的检测与鉴定,样划晴蓝旱询汕奄漫摩杏羔鹰吩山胞旱粹解荔宫歉劣碧钩褂栅呕拓乖乞躯高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,4、个体生物学水平的鉴定,四、目的基因的检测与鉴定,涛越镀董莱舜苍勇巡纤步餐它堰烟搭种掺恬毖络纤仗首蒸蟹旅寥郎缺菩见高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症
7、，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的珠蛋白，想一想，应该如何设计？,思考与探究,敷尤化鸿禽秀助郝般皇餐暗祟斟买寄跑舱邵订胀纸癸诫锦膨飘愉亦屯赣煎高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,思考与探究,1.从小鼠中克隆出珠蛋白基因的编码序列（CDNA）。 2.将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出了大肠杆菌菌落，则表明珠蛋白基因已进入。 4.培养进入了珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取珠蛋白。,绞犊逾膛懦呢配纂茂空绞夏屠厅意优抖诅省暂樊侥杉樊琐芝电眶呻钦租娘高二生物基因工程的基本操作程序高二生物基因工程的基本操作程序,