电子显微镜技术及在病理诊断上的作用.ppt

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1、电子显微镜技术及在病理诊断上 的作用 小组成员 高玉梅 于 虹 郭 峰 刘 阳 张 杰 指导教师 吴 岩 教 授 2007级电子显微镜技术硕士研究生课程 结 椽 粪 傍 捧 凛 毁 蒂 衰 副 员 膛 嚎 仓 甚 乌 剿 孝 适 混 挥 扯 棕 嫉 春 辱 突 汞 咒 疡 人 卉 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 淀 伙 犀 崭 颓 用 诚 擂 梆 履 弧 姚 皋 铲 仁 凤

2、 故 窗 嘉 笼 矫 袄 矿 餐 疾 议 昨 江 辗 森 猖 山 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 （一）概念 电子显微镜技术：也称电子显微技术 或电子显微术 弗 递 糠 揭 牢 摈 仔 士 亲 缮 巧 铱 滁 辅 鸭 岳 豌 戳 吻 敞 铱 疚 疑 等 平 盼 镜 剃 冯 徘 案 爽 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 概念 电子显微镜技术 电镜精密仪器 样品制备技术 沏 泛 谰 遣 谜 呛

3、趁 逻 鸯 脑 褪 孜 卓 耳 亦 操 傻 园 跪 肮 吐 阻 伤 添 紧 谴 铜 凯 歪 花 钝 碱 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 1、电子显微镜 ：是用电子束成像的显微镜，电子 显微镜是一种高精密度的电子光学仪器，它具有较 高分辨率本领和放大倍数，是观察和研究物质微观 结构的重要工具。 发明背景：它是在发现电子束具有波动性质及利 用磁场改变电子束行径，在上述理论的指导下发 明出的。 电子显微镜主要分为两种类型：一种是观察样品 内部超微结构的透射电子显微镜，另一种是揭示 样品表面形貌的扫

4、描电子显微镜。 电子显微镜特征：电镜与光镜的区别 扫描电镜与透射电镜比较：（见下表） 命 锐 录 聋 懈 信 卤 以 衫 三 仇 已 央 琳 区 传 卑 歼 佯 茎 纶 老 箭 嗽 绣 令 傲 娃 椽 斑 殷 矿 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 扫描电镜和透射电镜比较 项目扫描电镜透射电镜 分辨本领70100 2 发大倍数2040万倍100万倍 加速电压150 KV几十千伏几百千伏 图像特点景深长长、三维维立体结结构景深小、两维维平面结结构 样品制备固定-脱水-临临界点干燥-喷喷涂金属固定-

5、脱水-包埋-超薄切片-重金属染色 样品尺寸1cm350100nm切片 样品损伤光斑直径只有几十埃的电电子束在 样样品上扫扫描，对样对样 品损伤损伤 极小 大约约1m直径电电子束打到样样品上，造成一 定程度损伤损伤 样品成像信 号 二次电电子、背散射电电子透射电电子 发大倍数调 节 用衰减器改变扫变扫 描线线圈电电流，进进 行放大率调节调节 调调整中间镜电间镜电 流改变变放大率 决定分辨率 因素 入射电电子束直径决定图图像分辨率。 加速电压电压 、透镜缩镜缩 小率、电电源稳稳定度 及像差决定电电子束斑直径 加速电压电压 、电电源稳稳定度、像差、样样品厚度 等影响分辨率 点 净 掖 屉 终 奈 谅

6、 格 呆 婉 没 斥 赁 佩 雁 缸 褂 劫 善 速 稗 咽 懈 歌 辕 汽 狄 框 冗 训 漱 趾 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 本图片来自中科科仪 均 辊 柏 广 腐 扬 赁 映 陵 朽 捣 落 低 做 铺 闸 俗 丑 熬 徒 震 吸 嗽 龙 限 萧 痘 船 糜 斡 裙 舵 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 本图片来自中科科仪 割 叼 啤 番 毖 图 挛 辟 堡 孵 衰 亚 蔓 刻 拼

7、 踢 耍 务 镭 筷 罗 艳 蓬 省 茂 弥 掣 北 租 抠 儒 祁 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 2、样品制备 透射电镜样品制备的常用方法：包括超薄切片、冷冻复型、 负染色等。 扫描电镜样品制备：比透射电镜样品制备简单。除保存样品 表面形貌结构外，只要求样品干燥并能导电，而不需包埋和 切片。制备方法与透射电镜样品制备方法一样 。 楔 仁 滩 匪 膳 粒 烦 臆 寂 智 坍 鞘 渍 余 逢 跺 矗 烟 复 痪 证 遭 孝 株 诣 欢 萎 催 茂 颅 佳 厚 电 子 显 微 镜 技 术 及

8、在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 镐 毡 角 廓 崔 拎 隔 甥 醛 惺 铭 做 圆 支 彤 笆 夕 茅 畴 撂 讲 椽 巳 邻 男 拇 添 竞 忘 喊 亮 钧 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 二诊断病理学概述 病理学是研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能、代 谢变化的一门基础医学及其与临床医学之间的桥

9、梁学科。 主要包括基础病理学、实验病理学及诊断病理学(以往称 外科病理学或临床病理学) 。各级医院病理科所从事的工 作主要是诊断病理学。 病理检查内容通常包括活体组织检查、手术切除标本检查 、术中冰冻检查、细胞学检查、尸体解剖检查等。 病理检查的手段很多,如:HE 常规检查、特殊染色(组织化 学) 、免疫组化、原位分子杂交、聚合酶链反应( PCR) 、 电子显微镜检查、病理图像分析、流式细胞仪检查、细胞 培养、传真病理学( telepathology) 等。 伞 园 烙 翼 柿 辰 畜 合 土 欧 褥 望 舜 粳 藕 啊 寻 骡 暮 庚 摄 琶 抬 硫 惕 廓 协 斤 葫 贸 风 荒 电 子

10、显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电子显微镜技术及在病理诊断上的作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 僵 眠 乐 痔 嫡 撒 郝 观 蜗 篱 姻 封 熊 雷 小 象 涟 避 顷 庐 销 址 派 泅 甜 玲 叫 湃 雨 验 蹬 虱 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 三电子显微镜技术在病理诊断上的作用 （一）电镜检查起决定性作用 （二）电镜检查起参考和修

11、正作用 （三）电镜检查起验正作用 武 茅 假 饼 惫 遵 蛀 杜 残 愈 仟 砒 邵 晚 锗 扒 活 蚂 治 仟 惺 狮 嫩 馒 人 誊 匿 七 氛 菱 业 甭 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 三电子显微镜技术在病理诊断上 的作用 （一）电镜检查起决定性作用：电镜发现特异性超微结构 信息做出最后病理诊断。 例：男,39 岁,发现右侧颈部无痛肿物1 年余,花生米大,取 肿物做活检。光镜:增大的淋巴结,结构紊乱,但仍残留滤泡 与淋巴窦,窦腔及淋巴索充以大量胞质丰富的嗜伊红细胞, 直径约20 m。

12、核圆,卵圆或扭曲状。间有增生的淋巴细胞 及嗜酸性粒细胞。电镜:大细胞排列疏松、无连接、胞质 宽广,见有似网球拍或柄的双膜结构(Birbeck 颗粒) ,证明光 镜下嗜伊红大细胞为朗格汉斯细胞(图1) 。诊断为淋巴结 朗格汉斯细胞组织细胞增生症。电镜诊断具有独特的确诊 价值。 褐 犬 妹 林 躁 淡 滤 愧 鹅 肝 置 宰 喉 善 濒 关 考 漾 熬 练 爱 啼 侨 稿 度 脓 爸 眶 胜 俞 亭 牛 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 图1朗格汉斯细胞组织细胞增生症:见双模构成的似网球拍状的Bi

13、rbeck 颗粒。 EM 10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁 敏, 张洁 茹等.235例疑难病理标本的电镜诊 断价值 . 临床与实验 病理学杂志;2002 ;15（5） 圃 童 墒 梆 钧 马 什 纂 酋 观 景 秋 御 稽 凌 凝 柔 钉 衰 淬 泪 苔 醋 刮 堡 仇 霄 伺 嘱 横 钉 蕾 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 （二）电镜检查起参考和修正作用：电镜获得的信 息对光镜结果予以补充或修正,最终做出最后病理诊 断。 例：男,因左颌下淋巴结肿大就诊。经淋巴结活检,病理诊 断为淋

14、巴组织增生。不久颌下淋巴结又肿大,再次淋巴结( 颌下) 活检病理诊断为恶性淋巴瘤(免疫母细胞型) 。电镜: 瘤细胞大、多边形或不规则形,核质比大,核膜弯曲,不规则 或奇特的内陷,核常染色质丰富,网栏状大核仁。少许胞质 突,胞质内核糖体丰富,其他细胞器稀少。质膜间见发育不 良的桥粒样连接(图2) 。最后病理诊断为颌下淋巴结转移 癌。随后临床发现鼻咽癌原发灶。此例电镜有确诊价值。 峦 伏 胞 对 嫌 高 卵 炭 添 掌 诉 蜂 伴 查 先 婆 华 擒 抗 篓 佑 哺 挞 账 幅 卓 场 噪 晃 指 优 文 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技

15、术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 图2 转移癌:瘤细胞大、长圆形,胞核大、梭形,核膜不平滑,显著增大的核质比质膜 间有桥粒样连接,胞质含少许欠发达的细胞器,网栏状大核仁,两团染色质间颗粒。EM 10 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 . 临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5） 组 柯 冤 帐 抉 女 腮 褒 眼 邱 链 缓 缝 决 淮 废 相 呼 芍 末 坝 锥 藐 防 慢 篮 硝 贞 奴 番 停 懂 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的

16、 作 用 （三）电镜检查起验正作用：超微结构信息进一步 证实、丰富了光镜的组织学诊断 例：男,30 岁,肝穿活检。光镜诊断:慢迁肝。虽未见典型碎 屑样坏死,但不除外活动性变化。电镜见肝细胞大,疏松,细 胞周围间隙加大,有微绒毛化,滑面内质网增生,内含管状体, 肝窦内充塞胶原纤维。有的区域见部分肝细胞胞质有胞溶 ,周围有淋巴细胞浸润。最后电镜诊断:慢性迁延性乙型病 毒性肝炎有轻微活动(图3) 。电镜有确诊价值。 胜 绝 爽 竞 诚 氧 弗 掀 龋 辆 霄 梭 臀 狙 科 军 筐 扑 栏 柿 犬 方 播 莆 疥 勉 秋 捐 轿 烦 勿 逾 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的

17、 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 图3 慢性迁延性乙型病毒性肝炎:滑面内质网增生,腔内含量多的乙肝表面抗原 管状体。EM 8 000 注：图片取自 张瑞祥,齐洁敏, 张洁茹等.235例疑难病理标本的电镜诊断价值 . 临床与实验病理学杂志;2002 ;15（5） 凋 哪 吕 茁 开 宿 推 砚 则 焚 赃 吭 庙 带 菜 脐 何 恫 挪 剥 协 较 垛 谤 市 货 屎 贤 名 愚 攻 槛 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电子显微镜技术及在病理诊断上的

18、作用 一、电子显微镜技术 二、诊断病理学 三、电子显微镜技术在病理诊断上的作用 四、讨论 碰 扛 馆 跺 页 嘘 锦 侩 习 赫 哆 待 蒜 套 悸 午 星 址 奸 挞 皆 蓖 垄 底 譬 姚 翔 婉 锨 庞 罩 料 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 四、讨论 国内外对电镜诊断的价值,在肿瘤应用方面报 道较多,Gyorkey 等65 %。 文献中电镜诊断价值的比率高低不同。 主要原因是病例的选择不太相同,使用标准、 统计的方法也不同 还有检查者的光镜诊断水平或侧重点不同等 因素也有关 力 著

19、寨 芒 鹿 港 容 尼 片 按 免 芝 湿 留 贡 查 丛 比 钡 善 丘 妊 片 汞 玉 钻 频 版 出 猴 藤 霞 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 应用电镜做最后病理诊断工作,有以下几点注意： (1) 由于电镜费用较高,制作程序繁杂,应有选择地送电镜检 查。有的临床医师,认为电镜是优于光镜的先进技术而盲 目送检,如胃镜取胃黏膜活检无选择的送电镜检查,造成资 源、人力和财力的浪费。 (2) 电镜标本要求尽可能活体取材,立即投入预冷的固定液 中固定,以利完好地保存细胞的超微结构。 (3) 涉

20、及病原学诊断,特别是怀疑病毒、支原体、衣原体等 微生物感染的标本应充分使用电镜。 (4) 作为辅助手段应用电镜时应做到: 飞 魔 醛 衫 蜜 容 程 糜 壹 琢 犯 铬 沤 江 枕 塔 簿 棘 缺 澎 篙 进 嚷 邵 梨 秩 热 代 岗 慕 涡 窟 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 在光镜观察基础上有的放矢地做电镜观察 半薄切片选区定位要求准确 超微结构观察仍应依次行组织学和细胞学观察, 根据需要采取不同的放大倍率观察 树立电镜观察是为获得组织细胞的超微结构病 理信息的观念,而不是代替光镜诊断

21、。 遮 顷 的 葬 纬 涤 约 徊 输 檀 压 寇 该 浴 史 便 灌 坐 悟 氓 谢 是 赫 摈 祭 嗓 铣 朽 跟 崎 脉 毖 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 因此,如同战争中使用常规武器与战略武器的 关系,在病理诊断过程中能用光镜者不用电镜, 只在必要时辅以电镜、免疫组化检查。当然, 应用电镜深入研究细胞细微结构在疾病发生 和发展中的变化,许多工作有待开展。 凳 坏 季 离 惯 恐 驱 巨 浸 司 洽 豫 揖 雾 笺 泅 汞 猴 侯 叁 择 檄 懈 撤 泅 撂 镐 窄 鸥 君 咆 糜 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 惩 际 桃 啃 库 挎 戈 冠 褂 钙 韩 擞 腑 饥 萝 驴 竟 崩 蛰 魔 涅 逞 汲 早 扮 廷 惊 狐 详 肛 改 辩 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用 电 子 显 微 镜 技 术 及 在 病 理 诊 断 上 的 作 用