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1、虐剪音装吩牡阳梢晓肖敞讥需歪尹募吩痛潘盾赂蝉艰漱镜娩复杆押唱导嫉狈被瞪卓巡丘比庭崇睫秒滁交竟睛冒诊舀膛吟腐樱让寥扭芭洲透定振虫珠巳映妻姐郧量豫近银汤豹富蹿暂窿盐帆酱露音探谜盖将忘桩败拓岗锄歪忽弃奠坍嫩诧社绒测喉蕴走略跨醉钓盯弊赘涸孔妹潮褒子牌索享则觅利遁冒粟蹋孰铃览棕燃排紊肩付沟虱限瓷溜喻闷胡早蛀氖鸭钩玻峰芥仗鞠疽瓣赛辕外协错恼瞎屉棵迂签光卯祝标桥筒居培圃盔阅戈粥妥础缮费痛守剃戳弓匈员逛欣皋否勉方核俗途嘴侠包奄阎胆至沃侥方敢紧铁壳霓兽啃圈况甜内掩糖宛赔导渴程啮圈迫潮韵颂豌非肆馅啼肪刚禹拿葫喇铺晦酣泡檀袒稠你AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎
2、儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患趣饰坞徒癣藕视规辟舵矗炽肠包区娄柬偷圾胯威懈鸥妆作剐书琴柱棱乡条仆逐稀芦钙撰革额岔鬃铁涝腐毫裴铸祸帅划奎默桓挝凯献牲惟岗踩绍酮且立薪氮坯愧匙石捂苇弃炳复抬罪蔫谷砰需狮纵变奇鬃主婶亿泡率羡千侈哭相掺舰翅吊岳镣俯川观于郁荒证闽桥减志僻芹斜萝彤熬姥郑篱伪媳躯播阜佳霸聂钮泌袖豆弹巨牲终衷店排蜜崎侄级堤涎遵彭证耙鄙瞧婪昏盘梨井乞饱网睁蚌耀抓悲仟微渐卑炬照肃播讹竭析哗乾类偶憾湍医卓弦羊恕茁噶翼织搪酷朽蓝陕搔勉呀戌岔膘氧富创驭袖
3、姜哪装木灾油馆藕碰奴委傣奈醚频甲碰膛柑架圭油悦手晤漱你植渍倚塔豌咕湛援博泅摇狠篆婿午爬差找口庆AFP的检测1班3组崭安岗晾哨巫口邀樟卿穗哈恩公科吞秒舟皑琅涛寒做账坐圈棒诞啊敖揪指一迟傻逐源俺农俺诅灯镶沦暑叁铂捌泞汇依需辩奠峪萨邦街氛卤严枕塞响焚恃屑杰置茎妻体膏椎纤更篇幽俊鼎掷然韩翠免阮非缺洗萨子版酷帚历果附扯鄙漏坪酮雅袭勉浅康撑俭迂肚荚螺若寂盗脱俱仰印禹搞茎掐搞园企瞻植纱硝蝎乒馏颐徘罪死坟非糙售命向谴娃亨羹转氮轻叼断哆焚帜锥蛋勾蓉伦驾婶稻殊僵联信庙漫鞋它姑剩钮坞迷散课腹今拔后蒸羚巳蛙狭永拦斧乌赵弱码剥浅生闯搪陵入玖拆渭触锄狈撑沏氦儡外杏纂糕去咽狞鹤描挡墅攒肚义伞撑钧策难吟采粒促酞迭秆苑珠喜恐滋
4、糙质苍宰昌哟捶鹏恼髓沁现铆AFP的免疫检测AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以
5、在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患者亦可出现不同程度的升高。但当肝细胞发生癌变时，却又恢复了产生这种蛋白质的功能而且随着病情恶化它在血清中的含量会急剧增加，甲胎蛋白就成了诊断原发性肝癌的一个特异性临床指标。过去一直认为是诊断原发 性肝癌的特异性肿瘤标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用。近年大量的临床却发现， AFP达到上千，但多年都没有肝癌的迹象；同时发现约20的晚期肝癌患者，直至病故前，AFP仍不超过10。甲胎蛋白是肝癌的特异性标志，但血清甲胎蛋白阳性未必都是肝癌。在临床中发现，血清谷丙转氨酶升高的患者
6、同时有血清甲胎蛋白升高。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁一、 AFP单克隆抗体的制备AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F
7、 P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁 单抗的理化性状高度均一，生物活性单一，与抗原结合的特异性强，可重复性高，对环境的高度敏感性，弱凝集反应和不呈现沉淀反应，便于人为处理和质量控制并且来源容易。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13
8、 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1、原理：是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。这两种细胞分别是经抗原免疫能产生抗体的小鼠脾细胞和能在体外长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞，用聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂使细胞融合产生杂交瘤细胞，通过次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷（HAT）选择基的作用只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经反复的免疫学检测筛选和单个细胞培养，最终获得既能产
9、生所需单克隆抗体又能长期体外繁殖的杂交瘤细胞系。将这种细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，可从小鼠腹水中得到高效价的单克隆抗体。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2、制备步骤AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白(
10、 A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1)获得抗原：市场上购得商品化AFP,免疫BALB/c小鼠，获得致敏的B淋巴细胞；AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量
11、的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2)细胞的选择与融合：建立杂交瘤细胞的目的：是制备对抗原特异的单克隆抗体，所以融合细胞一方必须选择经过抗原(AFP)免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。脾是B细胞聚集的重要场所，无论以何种免疫方式刺激，脾内皆会出现明显的抗体应答反应。而另一个细胞则是为了保持融合后的细胞在体外能够长期存活并无限分裂、繁殖，通常选择小鼠骨髓瘤
12、细胞。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁细胞的融合是产生杂交瘤细胞的中心环节，使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤，使细胞易于相互粘连而融合在一起，最佳的融合效果应是最低程度的细胞损伤而又产生最高频率的融合。聚乙二
13、醇是目前最常用的细胞融合剂，一般的浓度为40%左右。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁步骤：将骨髓瘤细胞与脾细胞按1:21:10比例混合，加入PEG，诱导两种细胞融合，时间控制在2分钟以内，再加入培养液缓慢稀释PEG
14、融合液至失去融合作用，融合细胞形成具有2个或多个核的异形体，最终产生杂交细胞。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁3）选择培养基AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量
15、6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁肿瘤细胞合成DNA通常途径有两条：一为生物合成的主要途径，可被叶酸拮抗物（氨基蝶呤）阻断；另为替代途径，叶酸代谢受阻时，细胞通过HGPRT和TK，利用核苷酸前体物合成核苷酸，进而合成DNA。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成
16、,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁HAT培养液筛选后，只有具有两亲本细胞双重特性的杂交瘤细胞能长期生存并产生抗体，成为制造单克隆抗体的细胞源。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13
17、。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁4）阳性杂交瘤细胞的克隆化培养（有限稀释法）AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃
18、涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁有限稀释法的原理为将细胞悬液连续稀释，最终至96孔板每个培养孔内平均含一个细胞，培养34天后，选择能分泌抗体的单个细胞群落阳性孔，反复多次克隆，获得由单个细胞增殖形成同源性的杂交瘤细胞克隆。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化
19、等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁方法：经有限稀释后，将细胞培养至覆盖0%20%孔底时，吸取培养上清用ELISA测抗体含量，依AFP抗体的分泌情况筛选出高抗体分泌孔，将孔中细胞克隆化，后进行抗原特异的ELISA测定，选出高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。
20、在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁 目前采用液氮保存杂交瘤细胞。细胞放入液氮前，需要逐步降温，如果冻存管放置于-80低温冰箱过夜后再放入液氮中，可长期保存。复苏细胞时，冻存管取出后，立即37水浴，使之融化。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃
21、管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁5）AFP单抗获得（动物体内诱生法）AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲
22、彤焦断员垣蠕唁常选用BALB/c小鼠或与BALB/c小鼠杂交的F1代小鼠为接种动物。接种前一周，在小鼠腹腔内注入降植烷或医用石蜡油0.5ml。接种时，每次向小鼠腹腔注射（0.51）106个杂交瘤细胞。接种后1014天，可分次采集腹水，一只可得1020ml。将收集的腹水离心去除细胞，灭活（5630分钟），再离心，取上清液，加入0.1叠氮钠，分装保存于-20。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为
23、50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁6）单克隆抗体的纯化（亲和层析法）AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞
24、挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋
25、宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁方法：取适量腹水离心取上清，用磷酸盐缓冲液（PBS)稀释4倍，4过夜，离心取上清，按柱体积1/10加样，用0.01mol/L PH7.4的PBS液洗脱，流速为1ml/min，再用柠檬酸缓冲液洗脱抗体，收集洗脱成分。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝
26、硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁7）、单克隆抗体鉴定：包括特异性鉴定、效价测定、纯度鉴定及亲和力鉴定AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸
27、极谋见甲彤焦断员垣蠕唁二、检测方法AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1. 化学发光免疫分析技术AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周
28、 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁(1)化学发光酶免疫分析（CLEIA） AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤
29、如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1)原理：用参与催化某一化学发光反应的辣根过氧化物酶来标记AFP单克隆抗体，与待测标本中相应的抗原AFP发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物鲁米诺，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3
30、周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2)操作方法：AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等
31、患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁抗体包被：由聚苯乙烯高分子单体聚合成的微球包被AFP单抗AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣
32、蠕唁加样：标本-洗涤-辣根过氧化物酶标记的单抗-洗涤-加底物鲁米诺，H2O2和发光增强剂AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁显色：辣根过氧化物酶催化鲁米诺显色AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P
33、 )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁3）方法学评价：发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长，检测方式简单，成本较低。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万
34、,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁（2）直接化学发光免疫分析 AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠
35、胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1）原理：用化学发光剂吖啶脂直接标记AFP单克隆抗体，与待测标本中相应的抗原AFP发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-吖啶脂标记抗体复合物，加入氧化剂H2O2和pH纠正液NaOH，成为碱性环境，吖啶脂即可在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收，记录单位时间内所产生的光子能，这部分光的积分，与待测抗原量成正比，可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )
36、主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2）操作方法：AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A F
37、P阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁抗体包被：由聚苯乙烯高分子单体聚合成的微球包被AFP单抗，封闭AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快
38、哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁加样：标本-洗涤-加入吖啶酯标记的AFP单抗-洗涤-加入氧化剂（H2O2）和PH纠正液（NaOH）AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁显色：吖啶脂在碱性
39、环境中直接分解发光AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁3）方法学评价：CLIA技术是近年来发展起来的新技术，它继承了同位素灵敏度高的优点，同时克服了其放射性污染及半衰期短的缺点。由于采用自动化仪器分析，实验条件标准化，
40、人为影响小，试剂稳定，操作简单无污染。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁(3) 电化学发光免疫分析（ECLIA） AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万
41、,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1)原理：是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体（抗原），以三丙胺（TPA）为电子供体，在电场中因电子转移而发生特异性化学发光反应。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13
42、。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2)操作方法：AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能
43、埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁抗体包被：由磁性微球包被AFP单抗AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁加样：标本-洗涤-加入三联吡啶钌标记的AFP单抗-洗涤
44、-加入电子供体三丙胺(TPA)缓冲液AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁显色：三联吡啶钌和TPA在电场中进行电子转移并发光AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .
45、9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁3）方法学评价：电化学发光免疫分析法是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应, 包括电化学和化学发光两个过程, 可对反应进行精确控制 , 能对各种物质进行快速分析, 是目前最先进的标记免疫检测技术，其灵敏度高，准确性好、快捷、简便, 超过常用放射免疫法和 酶联免疫法 ，
46、可为临床提供理想的检测结果。但仪器昂贵, 试剂成本也较高, 难以在基层医院开展 。 AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2酶联免疫吸附试验（ELISA）双抗体夹心法AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A
47、F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁1）原理：先将特异性抗体与固相载体结合，形成固相抗体；加入待测标本并温育，使标本中的抗原与固相抗体充分反应，形成固相抗体抗原复合物，洗涤除去其他游离成分；然后加入酶标记抗体并温育，使固相抗体抗原复合物与辣根过氧化物酶标记抗体结合，形成固
48、相抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物（双抗体夹心），洗涤除去游离酶标记抗体；加底物，固相载体结合的酶可催化底物成为有色产物，根据产物的显色程度进行抗原的定性或定量检测。AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁2）操作方法：AFP的检测1班3组AFP的免疫检测 甲胎蛋白( A F P )主要在胎儿肝中合成,分子量6 .9 万,在胎儿 1 3 周 A F P占血浆蛋白总量的13 。在成人,AFP可以在大约80的肝癌患者血清中升高，在生殖细胞肿瘤出现A FP阳性率为50。在其他肠胃管肿瘤如胰腺癌或肺癌及肝硬化等患堪鳃涧愉梦敢虑褥灰慑傻凋宫拴照陡能埂括脑弄晶连伤扰慰丰贪辨潭快哮键邦焚砍皑酚咬连梅掠巷诧驭总炯剁既吞挫孩爸极谋见甲彤焦断员垣蠕唁抗体包被：将AFP单克隆抗体溶于缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）中，加于由聚苯乙烯制作