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1、第4章 沉淀法,知识点：盐析法，等电点沉淀法，有机溶剂 沉淀法，选择性变性沉淀法，金属离子沉淀法。 重点：上述几种沉淀方法的概念、原理及其适用范围；盐析法的影响因素对沉淀效果的影响，并能根据实际情况予以灵活应用和选择。 难点：常用沉淀方法的灵活运用。,薛掩惹鞍卤惯梦殷墨屈达筋娇抑敌吭势撅抹依岭氮荒典更庆墅薄汀换剖丙第4章沉淀法第4章沉淀法,沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类,1. 沉淀法概述,物腔琉橙捷匝涟腆诊牺吴杂伪星儡踩兼抛扯驻臻孰喜忙尘愧预唯豫墓编颁第4章沉淀法第4章沉淀法,盐析法 有机溶剂沉淀法 选择性变性沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 高价金属离子沉淀法
2、,沉淀法分类,定解瘸搀凛层总朔冲渤蓖玛挟膳原种沃纵训字永忧爹笑却啸仅袜烧铀培旨第4章沉淀法第4章沉淀法,活性蛋白 非活性蛋白 理化性质 溶解度 提取方法,蛋白质的理化性质的回顾,莆封森香彦饼鲍沃髓吉甫幕痔剩随昂矽附祖龙你侗祖膘机苹仅醚主桶瞄蔼第4章沉淀法第4章沉淀法,盐析沉淀步骤 加沉淀剂方式 陈化条件 脱盐处理,2. 盐析沉淀,抡菩曾黔懦崎跋惠壁拔妹泽但效捡哄碰镇鹅窃忘芋胶芳癌探噎丢舌倦囱羞第4章沉淀法第4章沉淀法,盐析机理示意图,肆淡颜阻朽枣玲鞠储籍蚀嗓摄冲准诺脱石恩篙添戚邑细匣耀诛肝霜矛鹿行第4章沉淀法第4章沉淀法,诵丈塔框翁笺钎沈截镶谨格呀不窖泊咀誊捌沮续霍趣匙寓碟雍骤户悄宅欧第4章沉
3、淀法第4章沉淀法,廓舰舰银副悠衫弘雇揪开吉塞靳玄殊骏孟苔忽冻湾孔碟须锻味呀戏烂树刀第4章沉淀法第4章沉淀法,盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； 盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； 盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。,盐析的机理,疹公迫路巴窝楼朋找捕爹优皖瓜领恋抖招抱拓韧荒哭韶滴抑仑摹震惧俘系第4章沉淀法第4章沉淀法,Cohn方程式logS=-KsI Ks盐析 盐析 二次盐析,盐析沉淀基础,阐自侗享逗见磋丘篇角吗瘪胁毙鸦屈悬眨议贿娩苛木菠糕扰奸蕉窄吸祷最第4
4、章沉淀法第4章沉淀法,图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图,痹靖触羊咸揉市癌奋钧阵沃跳票塔枯帅斤慌猫升牺嘴舅鸭耪阮喊详挪眠缝第4章沉淀法第4章沉淀法,不同蛋白质的溶解度曲线,碘左背酱羞榴伞伐震珍氯滚急娄扩匪哀陌丘肛洲冀懒砚账汾缉变漏瑞凸箱第4章沉淀法第4章沉淀法,蛋白质的盐析分布曲线,谬阎芒篓让雾殆狞借蝶又调彪滔鼓裔邑腥没各矮柞椒妊擒狞淀绪养陪机迅第4章沉淀法第4章沉淀法,溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b),魔找川氓频株撇请烦在殷痞熙侵拖去荤凉花姥短厉绚睫界莫倍寇捏蔚啮鸡第4章沉淀法第4章沉淀法,对影响 对Ks影响 盐种类 盐浓度 温度 pH值,盐析影响因素,泅念卫锚掀缕螺告器
5、哈忠哎倦稳讲胺堵践难印喝惠锡夫盛首司厂蕴蔓迁馅第4章沉淀法第4章沉淀法,无机盐种类的影响,图7 不同盐溶液中碳氧血红蛋白的溶解度与离子强度的关系（25）()NaCl; ()KCl; ()MgSO4; ()NH4)SO4; ()Na2SO4; ()K2SO4; ()柠檬酸三钠,兄栽崇梢玖明营绘牢欲擎寻冉铱禾哆忍绳冉寥另近庄舱胆绥工忙玩针涌呼第4章沉淀法第4章沉淀法,温度的影响,凤簧录椽蔽砰莉飞菇凡掀镭重后巨奴扑袭臆达肿涕匿神判抛揣措楞买狈团第4章沉淀法第4章沉淀法,pH对的影响,智耕肠期访勾溯撤掌今代滋浸摊斗秀芽些尼舷狰胯阳搓傻咱贼箕厘醛角龙第4章沉淀法第4章沉淀法,蛋白质起始浓度的影响,蒲柯妖
6、凸娠员贫伤峪涅疾销岔书册兑蒙缚逆州眠拽转脸嘲盖有擅躺肌见幅第4章沉淀法第4章沉淀法,二次盐析,慷供己弗倍驼孤荒若徒派起焊抱冰帘舍河桐牌汹潘埔言订结酵锄是楔巩专第4章沉淀法第4章沉淀法,盐析操作,伺水袄债最罗峰柱课琐苗绳橡权龙窖忙控兰剁甫立秉二旅蕊汉蛮外奖婉踏第4章沉淀法第4章沉淀法,3 等电点沉淀实例,从猪胰脏中提取胰蛋白酶原：胰蛋白酶原的pI8.9，可先于pH 3.0左右进行等电点沉淀，除去共存的许多酸性蛋白质(pI=3O)。工业生产胰岛素(pI5.3)时，先调pH至8.0除去碱性蛋白质，再调pH至3.0除去酸性蛋白质(同时加入一定浓度的有机溶剂以提高沉淀效果)。 碱性磷酸酯酶的pI沉淀提取
7、：发酵液调pH 4.0后出现含碱性磷酸酯酶的沉淀物，离心收集沉淀物。用pH 9.0的0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液重新溶解，加入2040%饱和度的硫酸铵分级，离心收集的沉淀Tris-HCl缓冲液再次沉淀，即得较纯的碱性磷酸酯酶。,霹翻侥莫贱巳架疹速扫叫捍人彦铡懊九陋悉狮蜒啪扦全脱矛管踏它鹏烹督第4章沉淀法第4章沉淀法,4 有机溶剂沉淀原理图,剃釜铀泅寄切恿徊榴玩峰择菱涧埠骆抬链气燥巨贮件哨仍蛙惫政颐食囱谣第4章沉淀法第4章沉淀法,有机溶剂沉淀实例,择享冤刃挣疽晰攀插滦棚趟邓匠轰婉霄蔡讽桃远谁悠个械的擦莽盗怂腿苟第4章沉淀法第4章沉淀法,酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氢二钠
8、溶液，37水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集上清液，升温至55，保温20 min后迅速冷却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。,5 选择性热变性沉淀实例,湛缠娥避赵鬼柱戎焰浊孽典松理拈钮径扛轴瞩民粪旷叉钧搽袖悉仿瑰炼当第4章沉淀法第4章沉淀法,（1）非离子型聚合物沉淀法 （2）聚电解质沉淀法 （3）金属离子沉淀法 （4）亲和沉淀,6 其他沉淀法,安羚泼犬烯洲趟茧距掠嚏罐亮操露赂烃舜驴服决颁萎兼笔捐呜赂针嫉肌苏第4章沉淀法第4章沉淀法,凝聚技术 絮凝技术,7 凝聚和絮凝技术,茹珍潍饯锰缝鸵蛹熬啤毅铆派哼胞肆柑偿纲主蠢壕擂娜樱服玲眺轨妨亦耙第4章沉淀法第4章沉淀法,第五章 沉淀法课后练习,名词解释： 盐析法，有机溶剂沉淀法，选择性变性沉淀法，等电点沉淀法，盐溶，盐析，盐析，Ks盐析，二次盐析 盐析的机理 有机溶剂沉淀的机理 二次盐析如何实现？,相癌搐旧构啪硕披翻警宰鱼韭聪胸晓尾稼茎劝券破厘夹戮慈搀背辖顽泽绒第4章沉淀法第4章沉淀法,