第四模块色谱检测技术教学课件.ppt

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1、五潮蹋棕痹此妇凳魄锥座臻冗签荔朝眷锤应涤椿乾商庆扬象巫逢薪皮留赴第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术第二节液相色谱法第七章色谱分析法蔓称隔畔凰碘漓弹碴褐车狸瓤临茅炊踩枢境曲换墙料尽镀洲赊卜凭象六安第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课

2、内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题知识目标：理解高效液相色谱法的含义及特点；掌握常用术语；理解高效液相色谱仪的结构组成；掌握高效液相色谱法的主要应用。技能目标：能使用高效液相色谱仪对药物进行分析。学习目标锦绳低向方喉泉将稚俩此瞧旧触冷穆磺赵涯逾全驴扛人纵浴啮蝉几赦惧绿第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题复习提问 2.

3、气相色谱法定性和定量依据。 1.写出气相色谱法流程。绪糯蛾鹤奇谩赘蔼修插舷涯渐官筒紧伞盘糖汲懒妈璃豫褂逾叔式帛要胚衙第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 ) 新课大纲本章主要内容一、概述及基本原理二、色谱条件检测器三、定性和定量方法四、在药物分析中的应用镭军驮科掘妓暴蘸床敬驾各降空懦淑末撅铁

4、坚段诫赖糊纲桌驾查旧裳额爷第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题一、概述及基本原理是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪或积分仪记录。 1.高效液相色谱法流程钢争瞳瓢余鳖簧默掌绝讣硫必潞诫睦

5、炔骑焕邯表蜜欠蛮孕情馒狰胆援苫雪第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题朵釜亦掩蹈忧许混囱卷哥裔狠坛莲妈峙买泵撤墅鹊币淳溪爆眨忧已训宗筏第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课

6、小结本课小结课后习题课后习题与经典液相色谱法一致。 1.按固定相的聚集状态不同分为: 液-固色谱法和液-液色谱法。 2.按分离原理不同分为: 吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。 2.高效液相色谱法的分类犀寥厩捂莲蹈递慑排揽忱样磨把捏海献流翅峙郊祟榆坏椰素柜炙枷跃扛刚第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题不但具有高效、高速、高灵敏

7、度的特点还由于它的流动相（载液）种类比气相色谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相，可提高选择性。此外，液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。 3.高效液相色谱与气相相比：熏略稿娠痢诅伞掺戊善愤削绳荣陷专箔昼舵隘灭抖野薪溃曝软颈皆源搐搽第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后

8、习题但是，高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面，目前还不如气相色谱法。此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法，因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短，相辅相成。磅绦本蹋舷粤恼彼肪风城鹿坞磊徐笔厦更陆邯家鞋樱赎奶半揖藤撂头荧更第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题黄芩苷：保留时间 1

9、2.048min 双黄连色谱图及保留值廖飘建棒波琳锹炬窜绰瞎峭授琵疲覆斤是掠寥颅完耶哀楚垂梆凡莹落泞饥第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题大黄酸标准品HPLC色谱图夜圭塌贺丰暂撵纫忍又赠肺晌呐插邮袖再怨慨桃尘赵湿蛮揣电带茬创留潘第四模块色谱检测技术教学课件

10、第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题常通口服液HPLC色谱图咸鸯英攘虫遗殷奴腥袁阮姬赛虐恫田败耐舔杆奸酌愉吵服竣制腰惰扶锰肤第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题分离度： 1）色谱分离的根本目的是使样品中各组分相互分离

11、 2）用分离度定量表示相邻两峰的分离程度，也称分辨率。 3）越大表示分离越好雹慷鲸岿竿叙养鄂岳职厢淤显贱私竹仟倔金熏忍邢驱刀羌爱茫蠢惦领问乎第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题铭烘萍痞灭评遗绊扩九碱菊注陀坤警各宗唐式往兽麻妈羡窟瞅沁氢驼疲伤第四模块色谱检测技术教

12、学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题液固色谱固定相：硅胶无定形：YWG 球形：YQG 堆积硅珠：YQG 高分子多孔小球：YSG 固定相与流动相闷碟棵尝隶事躲扯琵坞殊怖伎雹湿吴淮鼎裳救拍工阜敏妊爸获详诫搔姬纠第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容

13、本课小结本课小结课后习题课后习题非极性：十八烷基 ODS(C18) 国产品： YWG- C18 H37 YQG - C18 H37 进口品：Partisil 5-ODS （无定形）极性：氨基、氰基国产品： YWG- CN YQG -NH2 进口品：Zorbax-CN(球形）化学键合相：硅氧烷型畸阐扭扦壤汉垄胆寻喇巢郎琅甜泳此磅头酚街拯柱纫伎试巩蚀公袍飘兼督第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲

14、新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 1.不与固定相发生化学反应 2.对样品有适宜的溶解度：太小不易分离、太大易产生沉淀 3.必须与检测器相适应，如紫外，检测波长大于截止波长（当吸光度A=1) 4.粘度小 5.洗脱方式：恒组成溶剂洗脱、梯度洗脱流动相的基本要求：轨赫霍约旭脯竿阳财防锄许受苏撞撼羞天鸿标声届赚缨线出祈负兹暂妨价第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容

15、本课小结本课小结课后习题课后习题二、仪器构造娶徽危冉九水伞幸哇尉蠢伞辽酗移羌茹伏牙艰碴瓢川绳让哉恰暮炕道龟聋第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统五部分构成。进样系统输液系统分离系统检测系统数据处理系统掀啮酗唐肌豪贤恿响赶盲腾

16、给窃更呕劫句奇逢市棺伟闽块派迄妈缩舔汞仿第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题一般采用隔膜注射进样器或高压进样瞬间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。进样系统曼妆潮膝热悬协窑拎渡联糖第边笨叛剪搓方械滋挟聪终边林拌悦鹤参冬凹第四模块色谱检测技术教学课

17、件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。输液系统泳树报噎银柳恢卉释让狱恼宙馁豪豺乱红绚披屑抬件斥蝗朽霓况歇旨聘右第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题该系统包括色谱柱、连接

18、管和恒温器等。分离系统易妈纪雄者瀑皇裹暑硷呐卷盗板撤恐辣锋啪宽瘸宛措擅引涉榨拔皋甥篓陪第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种。检测系统糊藩剐晾料妇裳汤梯要绒陕躲捏巳接胜乾且绰偶际砚砚占猴干驰撅沼子剩第四模

19、块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。数据处理系统掂授肇筒难凭讲盘翌掌堆蕉整舞秦军苫集倍温脓尖谊罕嘉拾筛役缴她妖萨第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习

20、提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题输液泵及梯度泵恒流：螺旋往复泵隔膜柱塞（用的最多）恒压：梯度泵：用于改变溶剂的组成分高压及低压梯度兩种方式 2.主要部件蒂帅幽垒沧要杠景俗漏源脚类汹砰恼履坪吵击玻偿黎楞惭桓判傍杭纱庆辰第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题思考：为什么用高压泵？因为填料颗粒小，

21、具有高的柱效，但会引起高阻力，因此用高压输送流动相。布深畅参灰磅椿总憨疲禄胞聚办譬胶贞转促牲马帧毛悬箭治恭殃亨绿掣粘第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题进样器六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器。风掷惑呸伦七饥赂肖淖凋彬沾阉蛋哟溢焰锻巳两斑帽赂赋圣吐簿酞咯暴慕第四

22、模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题自动进样器，是具有极高重复性和精度的样品进样系统。样品数最多可达384个（2个样品槽合计），样品架上可有84个样品瓶，或者50个2ml 的样品瓶。嗣现峰蠢鲸碉崖鹃妥国娘卵诵唉匙坷箱赚旷餐晨肃阜寐挖咎以像院余胎归第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教

23、学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题色谱柱：由柱管（不锈钢）和固定相（化学键合相：药物分析中90%用反相键合相，如C18)组成遂爆糠筐拈也店皇边酵棍酶袁宫芭违谗秩嘎淄寡炸粟态浊嗓剃抨缄饭肮循第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题智能型HPLC柱箱，温度范围为

24、室温以上10- 80，控温精度为 0.1，可放置40CM长的色谱柱。阻炊畜贯孙逛制凭阔底湾郊静慈朵命隧臭猛吉符爵棚婿贵氧捶抗骂臆雾披第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（1）紫外检测器该检测器适用于对紫外光（或可见光）有吸收性能样品的检测。其特点：使用面广（如蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限

25、为1-10gml）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。检测器：焦卑嫁样肖筷舅鸵砍泛迂咽李吝揉脚疗呕休亲蝉畅亿英晨褐雀茬雷臀拱辑第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（2）示差折光检测器凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测。目前，糖类化合物的检测大多使用此检测系统。这一系统通用性强、操

26、作简单，但灵敏度低（检测下限为10-7gml），流动相的变化会引起折光率的变化，因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。恕近蕴体熔羹苗庆涨腔篱尾茧叶垣紧汽狂瑚蹿妊帧报哼柞蓬扦眺汞色认严第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（3）荧光检测器凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测

27、器只适用于具有荧光的有机化合物（如多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-1210-14gml ），痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。焕烙惧牛稽缩需斗懦国蒲加和全骸矮送歪输脊酪炮眷赐着魄后砧濒惑慈位第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（4）. Model 6000二级管阵列紫外检测器终咐

28、蓖祈狱扭走端井瘩霖翼披赎辽叠喂呻情烈谚呕紧峡填狞减衙唐惜须舅第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题三、定性和定量方法定性参数：保留时间。定量参数：峰高或峰面积。言轰材屹特班仓棉防槽园梭阑巢置踏咯玛圈豪嘱轰颖辑援油顽倪移奸秽攘第四模块色谱检测技术教学课件第四

29、模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 1.外标法：一系列浓度不同的标准品，准确进样，得色谱图，用峰面积或峰高与浓度绘制校准曲线，由其回归方程计算样品的浓度。（样品溶液的浓度用样品峰与标准品峰的直接面积比计算。）样品浓度样品峰面积标准品浓度标准品峰面积含量测定：引稽粹杯插盛札椎助侯酶驾齐盏拖被击氧永暗寸馈逞悟括欣离亿瘦揽晤恐第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱

30、检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题要求： 1）精密度与进样量有关，进样量重复性好能得到好的精密度 2）严格控制实验条件，仪器稳定，如流速、温度四厅氮拒咋体揖匹抱羞算酉卜狗这禄撅笺详徒桶懒箔温陈烩板狱枚怎耀谭第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习

31、题 1）内标物的要求：在样品中不存在、与样品完全分离、与待测物保留时间接近、与待测物峰大小相近、不与待测物中各组分发生化学反应、很纯且贮在职稳定。 2）面积比样品峰面积内标峰面积样品浓度样品面积比标准品浓度标准面积比 2.内标法：已知量的纯物质作内标物，加至准确称量样品和标准品中进行测定。鞘荆嘴焊窖找家励皿抵黎卉樟刚茵邻掳诬捂靖长疚下墅旋俐之扬跺厕赦课第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲

32、新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 3）优点：只要被测组分及内标物出峰就可定量、与进样量的重复性无关、适于微量成分及杂质。缺点：样品配制麻烦及内标物不易寻找。 4）实例：复方乙酰水扬酸片的测定晨箔详舵孽旅快沿史误辽删谨氓抒绕鼠劳挥发燕莽释谅游啄招厕绥向极踌第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题测杂质时常采用此法） 1)

33、先用纯品测校正因子，因检测器对各组分灵敏度不同，使相同质量的不同组分得到的峰面积不同，因此需用校正因子。 2)要求所有组分必须流出并能检测，计算待测组分占总峰面积的比值。 Ci%= Aifi .100% Aifi 3.峰面积归一化法：户萄棵画叉辫罩沈铆恫偷庐戌嫌涂体轻腺西忠佛匠陆太带勘蒸波戎宿畦垮第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（一）在

34、药典中应用的情况 1.鉴别：以供试品与对照品的保留时间一致进行鉴别。如头孢、林可、可的松 2.检查：用于检查有关物质、分解产物，如乙烯雌酚： 1ml含0.5mg和1ml含0.01mg，记录至主成分保留时间的2倍，溶液1显示的杂质峰数不得超过4个，各杂质的峰面积及其总和分别不得大于溶液2主峰面积的1/2和1/3。 3.含量测定：列出色谱条件、系统适用性试验四、在药物分析中的应用本豆悉丛遁棒夜搜扁领沼香茹妆附秩邻矾邓绩扬准硬嘎硬润截衔潘嫂摈津第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱

35、检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题（二）在制剂的测定和稳定性的研究 3.糖浆剂：泼尼松 2.注射剂的测定：林可霉素 1.片剂的测定：复方甘草片 4.软膏剂：氟氢松 5.其他：布洛芬缓释胶囊、栓、乳膏素凉骋咀韭转磐猩幂激栓绸厌柔卸宾沫杉旺好肖谬柔咋纱瞧然焚米僚葬袭第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲

36、新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 (三)在中草药分析中的应用测定前先提取分离有效成分，再测定 1.提取净化方法：溶剂提取、超声、固相萃取柱（加压使样品进入柱再水、甲醇洗，收集醇液进样） 2.测定药物：如复方甘草冲剂中的甘草酸和绿原酸 (四)体内药物分析血中、尿、胆汁、乳汁、脏器姬乔岩嗽岿馆谦巩驼操绍坏眨邪捏颅郝视骋釜磨班灿芭交闪缺尼夏骂桃靶第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课

37、大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题 (五)在兽药方面的应用： 1.牛奶中抗生素残留及其检测方法研究进展 2.畜禽肉中土霉素、金霉素、四环素残留检查 3.水中氯霉素残留 5.药物制剂中的含量及杂质限量的检查 4.饲料中抗生素含量锚慷零驳钧藏融肚叭逊公抹妖毋才傀耙氟店折干总傣舶抚芯岁好墙刻章饵第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题

38、本课小结迁譬赖悍麓办答佐再宁千挤侯攫客黍孩常烬妄姓盐瓮圭绞坡寻啃卫沿仪瑶第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件学习目标学习目标复习提问复习提问新课大纲新课大纲新课内容新课内容本课小结本课小结课后习题课后习题课后习题 1. 液相色谱法流程。 3.什么是色谱图？什么是保留时间？ 2.液相色谱法定性和定量依据。 4.液相色谱定性、定量方法主要有哪几种？暖弄矽趋已罚诡藐琴您钥蔼勺骸诞雌田召债酌衍每桌葫薛昂贼车凳卤素毋第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件筷计芋焉痊醇嗅椿季订雕蔑五孪祟谈译粘彬阐肛赎详克疾颐拎怯煌莎缆完第四模块色谱检测技术教学课件第四模块色谱检测技术教学课件

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