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1、毛细管电泳安培检测联用技术的方法和应用研究【摘要】：毛细管电泳(CE)和高效液相色谱(HPLC)是二十世纪八十年代以来发展最为迅速的液相分离分析技术。由于二者在对复杂体系极强的分离分析能力,在药物分析、生化分析、食品分析、环境分析等几乎所有的分析化学领域得到广泛应用。与HPLC相比,CE具有高达百万(理论板/m)的分离柱效、纳升级的进样量和快速的分离特点,在分离效率和分析成本上具有明显优势。然而,由于其极小的进样量,当与常规的紫外检测联用时,导致浓度检测灵敏度较低,不能满足有些痕量分析的要求；用激光诱导荧光检测必须进行衍生化,而衍生试剂种类有限,且存在衍生反应不充分和试剂干扰等问题；质谱检测由
2、于存在较大的背景噪音还停留在实验室阶段。电化学检测中的安培检测技术,能对于自然界广泛存在的糖类、氨基酸、肽等物质产生直接的电化学响应；基于柱端检测的毛细管电泳-安培检测具有相对高的灵敏度,且线性范围宽、仪器简单、分析费用低的特点。目前,开发有更高灵敏度的修饰电极、可进行多指标同时测定的复合电极、对毛细管电泳-电化学检测(CZE-AD)的新缓冲体系的研究、接口研究等均是本学科的研究热点。高效液相色谱是目前成熟和稳定的分离分析技术,其中反相色谱-紫外检测由于其对生理活性分析物的普适性在生化分析中广泛应用。但是,紫外检测选择性差且生化样品组成复杂,如何选择适当的前处理技术使HPLC-UV检测干扰最小
3、是令人关注的研究内容。本论文包括六章：第一章为绪论,简要地综述了毛细管电泳的发展历史、基本原理、分离模式、联用检测技术,应用领域研究进展以及本论文研究的目的意义。第二章采用氧化亚铜(Cu2O)、羧基化碳纳米管(MWCNT-COOH)和液体石蜡制备了一种新型的复合电极。该电极通过与羧基化石墨粉组成的复合电极进行对比试验,说明MWCNT-COOH对多酚存在电催化效应；对复合电极填充物进行形貌表征和电化学性质的研究；对Cu2O与MWCNT-COOH组成比例进行了优化。实验表明,Cu2O与MWCNT-COOH组成为3：1(w/w)时,复合电极同时对多酚、糖类表现出电流放大效应。该复合电极被应用于毛细管
4、电泳-电化学检测中对糖和多酚进行测定。在优化分离条件下,绿原酸,芸香苷,蔗糖,葡萄糖,甘露糖和果糖能在100mmolL-1NaOH中于30分钟内完成基线分离。多酚在110-7-110-4molL-1、糖在510-6-110-3molL-1范围内呈现良好的线性,多酚和糖的检测限分别达10-8molL-1、10-6molL-1数量级(S/N=3)。该电极具有良好的抗钝化能力、对分析物的结果重现性较好。用该方法对市售的两个烟草产品中的多酚和糖进行了测定,结果满意。第三章研究了一种在CZE-AD中运用不同的缓冲溶液于分离、检测部分以实现对乌龙茶中糖、氨基酸和表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCg)进行同
5、时测定的方法。该方法为以柱端射壁检测方式作为CZE-AD接口,检测池中用100mmolL-1NaOH溶液使一根直径300m的铜圆盘(工作电极)表面对分析物形成电催化氧化；分离毛细管中,由30mmolL-1硼酸盐和40mmolL-1磷酸盐组成混合运行缓冲液,通过配位作用使分析物荷电后向检测端移动。在优化的电泳条件下,所有分析物能在35min内完成分离；方法有较低的检测限和相对标准偏差,在三个数量级范围内峰面积和分析物浓度间存在着良好的线性关系。最后,对乌龙茶汤实际样品进行了分析,结果满意。第四章针对用不同方法所做的芦笋多糖组成分析结果不同的问题,采用毛细管电泳-安培检测对芦笋多糖中的单糖组成进行
6、测定。对“柱端射壁”检测模式中,铜电极直径变化对与毛细管接口的影响进行了详细对比研究。对实验中缓冲浓度,分离电压、进样时间对分离的影响进行研究。在优化条件下,7个单糖在120mmolL-1NaOH被基线分离。灵敏度低、重现性良好。实验发现,芦笋多糖由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖组成,其摩尔比为17.8：5.5：1.0：14.2：17.2。相对于其他分析方法,采用毛细管电泳-安培检测方法进行芦笋多糖的组成分析具有快速、精确和进样量较低的优点。最后,对实验结果的差异进行了讨论。第五章利用CZE-AD对脑血栓片的四种活性成分阿魏酸、原儿茶醛、咖啡酸和原儿茶酸进行了测定。分别研究了工作电极电
7、位、运行缓冲液的pH值和浓度、分离电压和进样时间等参数对实验结果的影响。最佳实验条件为：20mmolL-1硼酸盐运行缓冲溶液(pH=7.6)；工作电极为直径300m的碳圆盘电极,检测电位为+0.95V(vs.SCE)；分离电压和进样时间分别为18kV、8S。上述条件下,分析物的线性范围超过3个数量级,检测限(S/N=3)为6.010-9g/mL-3.010-8g/mL。将该方法应用于实际样品的分析,获得了良好的结果。第六章运用高效液相色谱-紫外检测法同时对大鼠-胰岛细胞中的磷酸腺苷、NAD(H)进行分离测定；对常用的细胞中磷酸腺苷和辅酶的提取分离方法进行了研究,通过比较不同提取方法的回收率发现
8、,高氯酸提取(PCA)路线是较好的提取工艺。提取物随后被一根VenusilAQC-18反向柱(250mm4.6mm,5m)分离,采用等度洗脱,流动相为90%磷酸二氢钠(50mmolL-1,pH6.5)与10%甲醇混合溶液。检测波长为265nm,检测限为ATP-2Na,ADP-2Na,AMP-2Na为0.0684,0.1208,0.1024g/mL(S/N=3),NAD、NADH分别为0.095、0.044g/mL(S/N=3),所有分析物在0.04-1g/mL范围内保持良好线性。所有分析物的平均回收率高于80%。【关键词】：毛细管电泳安培检测同时测定复合电极多壁碳纳米管缓冲溶液芦笋多糖脑血栓片
9、HPLC-UV前处理【学位授予单位】：华东师范大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2010【分类号】：O657.8【目录】：论文摘要6-9ABSTRACT9-14第一章绪论14-47第一节毛细管电泳概述14-19第二节毛细管电泳分离模式19-24第三节毛细管电泳的检测技术24-27第四节毛细管电泳-安培检测技术联用的发展27-31第五节毛细管电泳-安培检测技术的应用现状31-37第六节CE-AD联用技术的发展趋势及本论文的意义37-40参考文献40-47第二章基于Cu_2O/MWCNT-COOH复合电极的毛细管电泳-安培检测法同时测定烟草中的糖和多酚47-66摘要471引言47-492实验
10、部分49-523结果与讨论52-634结论63参考文献63-66第三章运用不同的检测和分离缓冲于毛细管电泳-安培检测测定乌龙茶汤中生理活性成分66-80摘要661引言66-682实验部分68-693结果与讨论69-774结论77-78参考文献78-80第四章毛细管区带电泳-安培检测分析芦笋多糖中的单糖组成80-91摘要801引言80-822实验部分82-833结果与讨论83-894结论89-90参考文献90-91第五章毛细管电泳-安培检测法测定脑血栓片中的四种有效成分91-101摘要911引言91-922实验部分92-933结果和讨论93-984结论98-99参考文献99-101第六章高效液相色谱-紫外检测法同时测定-胰岛细胞中的磷酸腺苷,NAD(H)101-116摘要1011引言101-1032实验部分103-1063实验结果与讨论106-1144结论114参考文献114-116附录:博士在读期间科研成果116-117致谢117-118 本论文购买请联系页眉网站。