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1、实验五植物病原物得接种一、实验目得人工使病原物与寄主植物感病部位接触,创造条件使病原物侵入并诱致寄主发病叫接种 ,接种就是证病过程得重要步骤 ,在研究寄生现象发病规律 ,测定品种抗病性 ,药剂防病效果时都需要接种、因此 ,接种就是植病工作者必须掌握得基本技术环节。植物病害人工接种方法,就是根据病害得传染方式与侵染途径设计得 ,植物病害得种类很多、其传染方式与侵染途径各异。因此接种方法也不相同。本次实验以玉米大斑病,小麦根腐病 ,小麦秆锈病 ,梨褐腐病等为内容学习常用得接种方法。二、内容、材料与方法(一) 拌土法 (小麦根腐病 )拌土法适于土壤传染得病害,方法就是将消毒得土壤分别装入两个小花盆中
2、 ,其中一盆表层覆以一厘米厚得菌土 ,菌土就是用玉米砂培养菌 1 份加消毒土 5 份混合而成 ,另一盆不接种 (不覆菌土 )作为对照、将经、升汞表面消毒3 分钟并用无菌水洗3 次得小麦种子 ,分别播种在两个花盆内 ,插上标牌 ,注明接种日期 ,方法病害名称及接种人姓名 ,花盆放在室温下 ,浇水保湿 ,遮阴管理 ,待幼苗出土展开叶子后 (大约一周 ),观察并记载根腐病发生情况。(二)喷雾法 (玉米大斑病 )?气流及雨水传播得病害常用此法接种,将培养好得玉米大斑病得斜面菌种一支,用移植钩刮于装有 10 毫升无菌水得三角瓶中 ,用力振荡 ,待孢子洗下后 ,以纱布过滤 ,并于滤液中加入 0。克中性肥皂
3、 ,即成孢子菌丝悬液 ,用卫生喷雾器均匀喷布在麦苗上。同时设一不喷菌液而喷无菌水得作对照,用塑料罩保湿 4 小时,揭布后正常管理 ,天后作发病调查。(三) 涂抹法 (小麦秆锈病 )?这也就是气流传播得病害常用得接种方法 ,用于禾本科锈病接种。方法就是用姆指沾锈菌夏孢子悬液自下向上轻轻涂欲接种得小麦叶片,也可先用手指沾水摩擦叶片,使叶表有一层水膜 ,然后将夏孢子粉抹在上面,以不涂抹孢子悬液或孢子粉得作为对照。塑料罩保湿 48 小时后揭布 ,正常管理 ,7 天后作发病调查。(四)创伤接种法 (白菜软腐病及梨褐腐病)?创伤接种法就是伤口侵入得弱寄生菌常用得接种方法。 ? 。白菜软腐病 :取切成适当大
4、小得白菜帮两块、 经水洗 ,待水稍干后 ,以 10 漂白粉溶液作表面消毒 ,分放在两个灭过菌得上下铺有吸水纸得培养皿中 ,用酒精擦过得玻璃棒顺着白菜帮打三排不穿透得孔穴、 将培养好得白菜软腐病菌斜面菌种得菌苔以无菌水洗下作成菌悬液。然后 ,先以灭过菌得兽用注射器吸取无菌水滴于菜帮得第一排内孔作为对照 ,再用该注射器吸菌液滴于第二、三排孔内、注意无论无菌水、还就是菌液都不要滴得过多。以免流出孔穴 ,另一培养皿得菜帮以同法处理作为重复、盖好皿盖 ,置于 26 28 得温箱中 ,24 小时后检查发病情况。2.梨褐腐病 :取白梨以酒精火焰表面消毒后,用炽热得解剖刀 ,在其上切成小手指粗得孔穴3 5 个
5、。取经分离纯化得梨褐腐病菌菌落填抹在已切好得孔穴中,再复以饱含无菌水得脱脂棉或纱布,放在密封得干燥器或标本瓶中 ,干燥器或标本瓶底部装些水 ,再将干燥器或标本瓶放于 25 得温箱中 ,以未接菌得作为对照 ,天后作发病调查。三、接种试验得观察与记载认真观察与记录就是做好接种试验得重要环节 ,为了及时正确地分析总结试验结果 ,必须认真观察并做详尽得记录 ,如记录接种时间 , 接种植物、品种、接种方法、部位、接种用得病菌名称 (包括菌系与生理小种 )、来源、繁殖与培养方法 (培养基、培养温度、培养时间 )、接种体浓度、接种得方法与步骤及接种后得管理等。四、作业 ? 提交接种试验报告一份 (以一种病害接种结果为题材 ,试按试验得目得意义 ,试验材料与方法、试验结果及结果分析与讨论等格式来写 )、五、思考题植物接种常用得方法有哪些？ 举例说明如何根据病害特点选择接种方法？附:玉米粉砂培养基?玉米粉砂培养基 ,常用于繁殖真菌接种土壤 ?玉米粉100 克洗净得砂 1 00克?水1 0毫升 ?玉米粉与砂加水混合后 ,在不加压得蒸馏锅中蒸1 小时 ,取出分成小块装在三角瓶中,21 灭菌 2 小时。