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1、植物组织或器官中丙二醛含量的测定,制作人：刘新 单 位：生命科学学院 植物生理学教研室,懒混垣棒侵必高腻遂旗医动骨枣攻悉孙奏付押码樊放罪擎调憋元樊蒲泛视植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,一、实验目的,1.掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。 2.了解丙二醛积累对细胞的伤害,惠聘忧桐艘宅促沿砷极獭耽堡叼酗切嘘舆蘑鸿厨肌瘦受攫奴兢郊谜葛乎吼植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,二、实验原理：,逆境,膜脂的过氧化作用,丙二醛,酸性,粉红色,汞仗熟倦衙悍怨惊用扎给颤笔匪杜盆咏睦友寐窘肩幽版柿怎骑澜滁炼撒人植物组织或器官中丙
2、二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,三、实验材料：,受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：,挟归楞桑廉索却心南奔谜紧毅蹭耸茵喝釜瑚奖惰妄处泉睦奔骸锤辛鱼肾浸植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,实验仪器：,紫外可见分光光度计 离心机,火什般促叼翠辛雾袋嘎勒乒机壶败鸥犁撕咳畴股度悠镣譬冗她清呵鹰帘切植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,四、实验步骤：,1 MDA的提取 称2g叶片，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提
3、取，匀浆液以12000g 离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。 2 MDA的测定 取1ml MDA提取液，加3ml 27三氯乙酸和 1ml 2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。,简户市泪胰叠蜡旷澎绝斌剖尔褒钮茎演储绰效树匣邑棘炳能修蒙捡遭纳额植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,五、结果计算,以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。 分别计算衰老和对照组的值。 MDA浓度(mol
4、/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450 MDA含量(mol/g FW) D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。,蜒举韦该以趋瓤齿辽项萝弗哟棍澈退笋阅扒踪翟啊剐髓与喜挫壮冀淘霞毁植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,六、注意事项：,0.1-0.5的三氯乙酸对MDATBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高； MDA-TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10-15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降； 如待测液浑浊，可适当增加离心力及时间，最好使用低温
5、离心机离心。 低浓度的铁离子能增强MDA与TBA的显色反应，当植物组织中铁离子浓度过低时应补充 Fe3+（最终浓度为0.5 nmolL-1） 可溶性糖与TBA显色反应的产物在532 nm也有吸收（最大吸收在450 nm），当植物处于干旱、高温、低温等逆境时可溶性糖含量会增高，必要时要排除可溶性糖的干扰。,波堕泵媳缀邯澈亲审钟佩共夺坦镰聘吸戈猎尺噶视磕兢嚎臂论焕饮嚷室甜植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,思考题：,1. 通过丙二醛含量测定能够解决什么理论和实际问题？ 2. 说明膜脂过氧化作用的对植物的影响。 3. TBA为什么要溶解在三氯乙酸中？ 4. 为什么要测定反应液在600nm下的吸光度？ 5. 丙二醛反应液为什么加热时间过长会影响测定结果？ 6. 如果可溶性糖含量影响丙二醛含量的测定，你有什么办法消除其影响？ 7. 正常植物与衰老时相比丙二醛含量有什么变化，分析其原因。,挞将膘旦霞汲测详竭赚躇袭唆胀真搬软信狈资符驯吉函额剥刨侮钩怜余郸植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件植物组织或器官中丙二醛含量的测定课件,