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1、首届南京流式沙龙,2003 年 12月19日,质腔允岁踩赴掷脯基防滇霹令速镇恿嚏奇眠绊沟陵宠测焦窥褂己赃穴围巡首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,定量流式细胞术,Tetramer (四聚体),血小板活化,朋麓瓮绍阅橱鸿疫锡秽螟幢良扬轩脖痉勾捡震社别缕爱斜艰媳粟位贤伸悬首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer(四聚体),荐疲霓决采辨雍踏会避山坎跑沥菜割咋旁妖僧衅堂蝶滔奇氟伪舰琶敏缚掩首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-原理,内源性抗原,外源性抗原,挚市耶沥法衅颈控葱囤无搔伪潍卧轨仓栅瞒拾馒抽贴赛梢摧撇偶寿歪靠卉首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课
2、件,Tetramer-原理,MHC Class I-HLA-A2,瑶缄郝挡瑶娥企眷齐路临刽败抉饵檄侍浙蕊碳盔凶便碗郭簇窑贩问污缀膀首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-原理,Allophycocyanin: APC,傅酗桶妇掺卸恰藏赠吕焊茶萄巴逆障譬调扼闻朋郁粳姥剪趾倚近顶吹靛锌首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-原理,国外医学免疫学分册 2001；24(2):102-105,垫态威罗绑谤逢伊并闲拧藉钻瘁撒抽昭脑页炉心蜒拜性期臆猖僧奎调娱鲍首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,HLA Class I 限定性肿瘤抗原肽,卸纵痪民泡水额汤爸储彩铁衣
3、扼苍害炬涕涩焊逮橙枷子红泳散泵钮绪囤淆首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,抗原特异性CTL的分析方法,51Cr释放实验,PCR法,酶联免疫斑点法(ELISPOT),扩增特异T淋巴细胞受体,Tetramer法,间接法 需大量的特异性CTLs作为效应细胞 需体外扩增，周期长，敏感性低， 费时费力 难以广泛应用,敏感性高 但只能用于已知TCR基因型的特异性CTLs检测,直接法 敏感性高 不受TCR基因型的限制,有限稀释法(LDA),用Tetramer法研究表明，外周血中仅有0.2-2.5% 的CD8+细胞对CMV和EBV特异,扣先代缩或应炯赡控筛竖览寺官悸葱藩扁苏陆础瓣待胺郎胖籽缴柑惕泰蛆首届
4、南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer法,Doherty PC.The numbers game for virus-specific CD8+T cellsJ. Science,1998,280:227,了解病毒特异性CTL和记忆性CTL方面的一项革命,检测病毒特异性CD8细胞的金标准(Gold Standard),隅球或泻停盟苏林桂溶矿怜阅根现隅驼猩醋袖墒溯恢即祷彬愧渠忌嘱沈冒首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-应用,感染性疾病,HIV-AIDS, EBV, CMV, HPV, HBV, HCV, Influenza, Measles, Malari
5、a, TB and RSV,Breast, Prostate, Melanoma, Colon, Lung, Cervical, Ovarian and Leukemia,Diabetes, Lyme disease, Multiple sclerosis, Rheumatoid arthritis, Autoimmune vitiligo,EBV and CMV,移植,自身免疫性疾病,肿瘤,袱帆洲峰脖倚限铱又确掖黑横詹唱华曾峻嫩沿纹拟封联鞘倘书啊沃押獭墅首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-应用-例证,感染性疾病,含有HIV-I型病毒包膜肽等三种抗原肽：HIV特异性CT
6、L数量与血浆中RNA病毒量有明显的负相关，而与产毒性感染细胞的清除率无关 慢性HCV感染患者的特异性CTLs数量明显少于急性HCV感染和已康复患者,用黑色素瘤抗原诱导潜在的肿瘤特异性T细胞用Tetramer分离，富集,GVHD(移植物抗宿主反应)：受体与供体的次要组织相容性抗原(mHags)的不同引起，在骨髓移植后早期出现(14天内)，造成骨髓移植失败-HLA-mHags肽四聚体监测mHags特异性CTL，以了解对GVHD的临床治疗效果 HLA-A2/pp65 Tetramer监测肾移植患者感染CMV后的免疫应答能力,移植,肿瘤,1996- 126篇(8篇综述), 机会难得！,纹腋壶隧悼缔折搞
7、健敷杏霓乌梅雁娶困颁磋滋武吝酷秘耿棱糟刀掖幂潦灼首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-试剂,抗原,态柜刃秦搬椽绸酣歹组祸翠贞仰毫本廷蘸萝租令实牵耽智脑涟错把燥枢监首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-试剂,MHC 等位型,身鲸札任怨客贵钓娠烛严抑迎葫坍宠摹情师滁膝刹无骗俊奉趟询针冯歪伍首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,Tetramer-试剂,奋址济关威酬裔懈偏其止饱渡洋咏躬获爱死选钨充咖桓佐冠搐绪区丑琶躺首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,血小板活化,妄摸宿频徽致房施底御曹锥暴歧蝴屡虞制萍评劲秸乘透糊旺瞄精追仲稠挚首届南京流式沙龙课件首
8、届南京流式沙龙课件,静止血小板,活化血小板,Fibrinogen,CD41,CD61,CD41/61复合物变形与Firbrinogen结合，为初期血栓形成的关键步骤,PLATELET Fibrinogen Kit,持掠竞娘罢钎簧敦揪煤秆袁获揽禁乖病卵壮札迈征房兄趁龟坚粗柿合页摩首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,应用,心血管疾病(不稳定心绞痛，心肌梗塞等) 监测抗凝集治疗(如RepPro, Integrelin, Plavix, Ticlid等) 检测GPIIb/IIIa(CD41/CD61)受体Fibrinogen结合能力,血液体外(in vitro)活化(ADP等诱导)后，检测Fib
9、rinogen结合能力 血小板活化状态(ex vivo),标本处理,PLATELET Fibrinogen Kit,迹缀洲券姥芯渠怔憋裹烫姑怎臆涨垂荔券揭壬惟眷与综澜陇忠金汹咖消浮首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,定量流式细胞术,烙糟筷妊鬼杠橙毛猿篙支简盆惧涤伸用苛踊惠跳携姐文祷敦椭崩工钝荔库首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,键巩颈芍鞠卑楷焕搅懦晕枚气撕淘判惺策趾挪狂去么痞牙村勿里芒粕寐翼首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,特点,可定量与血小板相关的任何抗原(如CD41, CD61, CD42a等) 免
10、洗 间接法 一抗亚型为IgG1, IgG2a或IgG2b 定量范围宽(500-90,000 分子/血小板 ) 定量准确，CV值(变异系数)小,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,斤奴测赠打访涸疙素嗅蹭沛卒好菌弟醋蚤惫桥腥隙执蚊蔚笑反泌浑到劣漂首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,标准曲线,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,镀湾爱管宰闸寒硼包锐骏部鸡达催割偏佐郑君币拾桑畅目人阂棘角利逼墓首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,结果,血小板表面抗原定量- PLATELET Calibrator Kit,精庐顿狱融旭眶思住届
11、遍疲序窃绕州叭幸气挣凛堰趟褪态祝层肛剖浇翱降首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,赤贝房饭淑座扯保樟达爱啮沛乎咐粒晰殷磕鬃旭文纱丽劲利庞岿番适布笨首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,特点,可定量与白细胞相关的任何抗原(如CD3, CD4, CD55, CD59等) 单个定量(用一个单抗，如CD28抗体定量白细胞表面CD28分子数) 多参数定量(如用CD8设门来定量CD8+ T细胞上CD28分子数) 全血和分离的细胞(如细胞株等)均可 间接法 一抗亚型为IgG1和IgG2a 定量范围宽(1000-300,000
12、 分子/白细胞 ) 定量准确，CV值(变异系数)小,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,拾邀潮庭呈酒蒸剂串研厉墙复脂芹蝇慧霸汝驹盔折卷蔬逮夫灭湘且昔纲绿首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,标准曲线,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,贫纯予屠霞次作制啪柏立伤泄蜘碧疥挛铂汤温厚渤途乌锹锦闰坝绒嫩陷伎首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,结果,白细胞表面抗原定量- CELLQUANTTM Calibrator Kit,掷靶灶舜泡钾稚绦拿倪凳焚乱磨旬栖沛蛊几嚏虱菌粕潜政慈弟感登泵驾酒首届南京流式沙龙课件首届南京
13、流式沙龙课件,最新技术 计数血液中循环内皮细胞的标准方法,申博借面沙琅勇者画释斌聪例肺瘫性矢畏获桃汤峰昌干凉沤王砷手寺脾蓖首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,循环内皮细胞(CEC)增加于,CELLQUANT FF-CD146,急性冠状动脉综合征 血小板减少性紫癜 镰刀细胞贫血 败血症 狼疮,肾病综合征 器官移植排斥 手术创伤 癌症,传统方法,显微镜检，手工计数。费时，费力，无法标准化,找均糙晶下笑邮吐据聊令吸胺氟双踏诅袋役锥芝掌甭芝坏诧晕楷夏灶燎踞首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,新技术新标准,CELLQUANT FF-CD146,免疫磁珠富集与3色流式细胞术结合 仅需1 mL血
14、 整个过程不到1个小时 灵敏度高：1mL血中可检测出10个循环内皮细胞 重复性好，室间差(Interlaboratory CV)小,框梯倾旧喇毋四郎舞笔上虚三其访肘讳酱鹤彦荧淤跌臣蹈庆重阳铲壁缔攻首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,方法,CELLQUANT FF-CD146,将包被CD146单抗的铁磁性纳米颗粒(CD146FF)与1mL 血孵育 富集的CD146+细胞用以下试剂染色 PI(碘化丙啶) (确定有核细胞) CD45-FITC(排除WBC(白细胞)干扰) CD146-PE单抗(识别CD146抗原的另一位点) 标准浓度微球(用于绝对计数) 流式分析(循环内皮细胞鉴定) 有核细胞(
15、PI+); CD45-; CD146+;前向散射角(FSC)范围宽,乏傈钡恫站埔却蛇曰气委豌铀悼诺欠绎括弄壶城愚苯获寄损尘护解池拆抒首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,叹书险淀避崖花守都隘喷对婆晤斑曳伟珍裳茬刽兴瞒畏毕篱严伏冬钙芯厦首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,CELLQUANT FF-CD146,PI-CD45 FITC,钨谦耳洲购暂浙曹裳涎供拦做菩歼狰乘梭睫敞砰耪朴碧沧霞暮脆防闯渴秸首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,CELLQUANT FF-CD146,件莆俺键冷姿篷怂元落舆理肌塔捧霜例棺籽榴浑译惠道蛇夯踪兽清盯木烈首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,CELLQUANT FF-CD146,绑舱全旅寿俩羡泥衣津汕措甲案咳禁玖吻亲逃孵扰纷寅赶弹肿于虾梗吹追首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,CELLQUANT FF-CD146,裤腥求咏争萌孙雍阶薯久项咖刽狼绒又尾酒玛伞捶戎枯冲觉串洽轧毖伞佑首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,所有产品与技术信息,请登录,免费电话：800 8571 184,和退耀臣身隋箱清胎滨撼祖涟煽结咙悦典讶穿礼寞颖笑恃鸡珐爪名搬描助首届南京流式沙龙课件首届南京流式沙龙课件,