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1、类风湿性关节炎实验室进展,前言,1858年 英国 加罗德 1940年 瓦勒 类风湿因子 1941年 美国 类风湿性关节炎 中、英、美 类风湿性关节炎,定义,病因尚未明了 以关节滑膜炎为特征 慢性全身性自身免疫性疾病 慢性.对称性.多滑膜关节炎、关节外病变 好发年龄为3060岁,区别：风湿性关节炎,风湿热（A组溶血性链球菌感染后引起的一种全身性、变态反应性、炎症性疾病） 发病年龄多在515岁 关节炎急性期患者可伴发热、咽痛，心慌、血沉增快及C-反应蛋白增高等表现 病情好转后可恢复至正常，该病在我国关节炎患者中占的比例已显著下降,好发于手.腕.足等小关节,反复发作,呈对称分布 早期有关节红肿热痛和
2、功能障碍 晚期关节僵硬畸形,并伴有骨和骨骼肌的萎缩 主要累及关节滑膜,其次为浆膜、心、肺及眼等结缔组织的广泛性炎症性疾病 晨僵、发热、疲乏无力、心包炎、皮下结节、胸膜炎、动脉炎、周围神经病变等,临床表现,实验室常规 (一),轻度至中度贫血 白细胞数大多正常，在活动期可略有增高，偶见嗜酸性粒细胞和血小板增多 多数病例的红细胞沉降率在活动性病变中常增高 血清铁、铁结合蛋白的水平常减低,实验室常规 (二),血清白蛋白降低，球蛋白增高 免疫蛋白电泳显示IgG、IgA及IgM增多 C反应蛋白活动期可升高,实验室常规 (三),类风湿因子RF：诊断RA的重要辅助方法 目前临床多限于检测IgM-RF，目前国内
3、应用比较广泛的是聚苯乙烯微粒乳胶凝集试验（LAT）和羊红细胞凝集试验（SCAT） 类风湿因子阴性不能排除本病的可能，须结合临床。 RF为自身抗体，可见于多种自身免疫性疾病及一些与免疫有关的慢性感染；故RF阳性，不一定就是类风湿性关节炎,实验室常规 (四),抗核抗体在类风湿性关节炎的阳性率约10%20%。 血清补体C3、C4等水平多数正常或轻度升高，重症者及伴关节外病变者可下降 关节腔穿刺液：不透明草黄色渗出液，其中中性粒细胞可达1万5万/mm3或更高，细菌培养阴性。疾病活动可见白细胞浆中含有类风湿因子和IgG补体复合物形成包涵体吞噬细胞，称类风湿细胞,诊断标准,1晨僵至少1小时(6周)。23个
4、或3个以上关节肿(6周)。3腕、掌指关节或近端指间关节肿(6周)。4对称性关节肿(6周)。5皮下结节。6手X光片改变。7类风湿因子阳性(滴度1:32)。需具备4条或4条以上标准，确诊为类风湿性关节炎,晚期类风湿病人，因多已出现多关节病变及典型畸形，所以诊断多无困难 在早期，仅少数关节受累时，诊断常比较困难。尤以单关节类风湿性关节炎，仅靠病史和临床表现决不能确诊 早期诊断、早期治疗是阻止RA病情 发展和减少致残率的关键。,实验室进展 （一）,自身抗体的检测 类风湿因子（RF） RA相关的自身抗体 RA特异性自身抗体 免疫球蛋白结合蛋白(BiP)为靶分子的抗体,自身抗体联合检测,Saraux：Ig
5、M RF(ELISA)、IgG-AKA、RF(乳胶凝集试验)联合检测是诊断RA的最佳实验室检测方法，敏感性33%，特异性99% Vencovsky：抗CCP、APF、AKA、RF的个别亚型(IgM RF)等自身抗体是早期RA侵蚀性疾病诊断标志 李小峰：APF、AKA、RF 3种抗体联合检测时，1种以上任何抗体出现对RA诊断敏感性69.83%，2种以上抗体同时出现特异性为98.19%，3种抗体同时出现特异性99.86% 李鸿斌：APF、AKA、抗Sa抗体和抗RA33抗体4种联合检测,实验室进展 （二）,血管内皮生长因子(VEGF)在RA滑膜血管翳的形成过程中起关键作用，它直接促进滑膜组织新血管形
6、成，增强血管通透性，不同病期RA患者血清及关节滑液中VEGF水平可直接反映疾病的活动程度。 淋巴细胞活性及其信息传递异常与RA发生密切相关。RA患者淋巴细胞协同刺激分子异常表达，淋巴细胞的CD25，HLA-DR表达明显增多。,实验室进展 （三）,免疫球蛋白糖基化的改变 血清中IgG分子分为IgG2、IgG1和IgG0三种糖形。Watson等对风湿病患者血清中IgG分子糖链结构进行分析，发现不同类型患者糖链结构不同。RA患者具有显著的去半乳糖结构，即IgG0型。,实验室进展 （四）,基质金属蛋白酶的检测 基质金属蛋白酶(MMPs):可导致软骨降解，其水平与RA患者受累关节数目、X线分期严重程度及
7、ESR呈正相关，而且 MMP-3不仅可反映病情活动，其在血清中浓度的增高常提示已有关节软骨破坏。,实验室进展 （五）,尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及其受体： 在RA滑膜组织中的表达水平明显高于骨关节炎OA，其中RA滑膜衬里细胞呈明显的强阳性表达；滑膜组织中uPA与其受体的表达具有良好的协同性，其可增强滑膜细胞对软骨的破坏。RA滑液和血浆中uPA及其受体的表达水平可作为反映患者病情活动的有效指标。,相关问题及进展,类风湿性关节炎是一类异质性疾病，疾病的不同亚型以及患者的病程、治疗情况、脏器受累范围和程度等均可影响检测结果 分子诊断学技术、功能基因组学和蛋白组学研究的深入，免疫学技术水平的成熟
8、和完善，计算机网络技术的广泛应用以及实验室质量保证系统的全面实施,谢谢,RA相关的自身抗体,抗型胶原抗体 抗钙蛋白酶抑素(calpastain)抗体 抗葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗体 抗磷脂抗体,RA特异性自身抗体,抗Sa抗体 抗RA33 （异质性胞核核糖核蛋白）抗体 抗核周因子抗体(APF) 抗角蛋白抗体(AKA) 抗聚丝蛋白抗体(AFA) 抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体),抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体),国内外均有报道抗CCP抗体在早期RA时即可出现，它将成为诊断RA的标记抗体。 其敏感性为46.6%，特异性为96.6%；已建立了以人工合成CCP为抗原的ELISA检测方法，检测RA
9、患者血清中抗CCP抗体。,异质性胞核核糖核蛋白（RA3336）,RA33/36可以出现在疾病的起病阶段，所以有早期诊断价值。RA33/36抗原的制备及其抗体的检测：用Ehrlich腹水癌细胞提取的抗原检测抗RA33/36抗体。,抗核周因子（APF）,APF是1964年Nienhuis在RA血清中发现的一种抗人颊黏膜细胞浆内角质蛋白颗粒的抗体，荧光显微镜下在胞浆内呈一个或多个大小不等的圆形或椭圆形颗粒，其对RA的特异性随血清稀释倍数的增加而增加。,抗Sa抗体,从人胎盘提取Sa抗原，用免疫印迹或ELISA法检测抗Sa抗体。抗Sa抗体对RA的敏感性为43%，特异性为98%。由于该抗体在RA的早期可以测出，且其滴度随疾病活动性消长。因此，除作为早期诊断外，还可以作为RA活动的监测指标。,抗角质蛋白抗体（AKA）,以Wistar大鼠的食管中段角质层为底物，用间接免疫荧光法检测，角质层有板层状或线状荧光沉积为阳性。AKA对早期RA的诊断特异性为90%，敏感性为32%。,抗聚丝蛋白抗体(AFA),近来发现AKA 与APF的真正靶抗原是聚角蛋白微丝蛋白（filaggrin）。现可用基因技术合成抗原聚角蛋白微丝蛋白，并通过免疫印迹或酶联免疫吸附法检测AFA。证明AFA对RA诊断的敏感性为36.3%，特异性为93.4%。,