《细胞活体染色技术.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞活体染色技术.pptx（10页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、实验三、细胞活体染色技术 一、实验目的 学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的 形态、数量与分布。 二、实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂， 在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构 造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和 体外活体染色。 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体 的染色并且呈现染成蓝色。它可以和线粒体中的细 胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。线粒体中 细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态) 呈蓝绿色,而在周围的细胞质中染料被还原,成为无 色状态。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素 C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，
2、从而使它显出颜 色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活 性。通常，需要把生物材料置于的冰水 浴低温中，并且操作要迅速。 中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可 将不同发育时期的液泡染成不同深度的红 色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不 被染色，该染料对液泡系具有一定专一 性。 盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料 ，可溶于水，它可以通过死亡细胞的质膜 而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜 ，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。它 还常用于检测细胞膜的完整性。 三、实验用品 (一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 (二)器械：显微镜、镊子、刀片、剪刀、解 剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、
3、吸管、 水纸等。 (三)试剂： l、Ringer氏液 2、13000中性红溶液 3、15000詹纳斯绿B 4、台盼蓝染色液 5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等 四、实验方法 (一)液泡系的中性红活体染色 l、用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l一2cm2) 处小 心纵切断面，一定要薄且均匀。 2、在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在 其中染色5一10分钟。 3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、 镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形 态、大小如何、分布位置。 (二)线料体的活体染色 l、用植物细胞观察线粒体的活体染色 (1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在 载玻片上用1/5000詹
4、纳斯绿B染色约30分钟。 (2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意 观察线粒体分布及所呈形状。 2、用动物细胞观察线粒体的活体染色。 (1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有 Ringer氏液的表面皿中洗去血液。 (2)将肝组织洗净后吸去血液，加入15000詹纳斯 绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹 没。 (3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一 些细胞或细胞群。 (4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液 中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜 检。 (5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断 地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢 慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的 染色才显得非常清楚。 3、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观 察 (1)取清洁载玻片放在37恒温水浴锅的金属 板上，滴2滴15000詹纳斯绿B溶液。 (2)用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状 物放入载玻片的染液滴中，染色10一15分 钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的 溶液，即可镜检。 (三)台盼蓝染色鏊别死活细胞。 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上 ，滴加l台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显微镜 下观察。 THANK YOU!THANK YOU!