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1、棕色棉论文：棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析【中文摘要】本研究以RT-白絮(白)、棕絮1号(棕)及棕1-61(深棕)为试验材料,利用化学显色法及紫外分光光度法对3种材料不同发育时期纤维色素物质及相对含量变化趋势进行了研究;利用基因工程方法构建CHS及F35H基因的ihpRNA及amiRNA干扰载体并通过花粉管通道法转化棕色棉以进行基因功能验证;以RT-白絮、棕1-61为试验材料,通过实时荧光定量PCR结果分析类黄酮合成途径转录因子基因CPC、TT8及TTG1基因在不同纤维发育时期的表达量差异,试图从分子水平解释彩色棉纤维品质及色素物质形成的关系。本研究主要结论如下:1.通过RT-
2、白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段纤维及叶、花、蕾甲醇提取液的NaOH、盐酸-镁粉显色反应和紫外光谱扫描,综合分析以上结果得出结论认为RT-白絮、棕絮1号及棕1-61不同发育阶段未成熟纤维中均含有黄酮醇或二氢黄酮醇,成熟纤维中则不含有;纤维发育各阶段相关色素物质含量比较结果:棕1-61棕絮1号RT-白絮,其中+28DPA后白色棉与棕色棉色素相关物质含量基本一致,棕1-61+60DPA棉纤维色素相关物质含量高于棕絮1号及RT-白絮;白色棉各时期色素相关物质含量差异较小,棕.【英文摘要】Taking RT-white(white),Brown 1(brown) and Brown 1-61(d
3、ark brown) as test materials, chemical chromogenic reaction and ultraviolet spectrophotometry were conducted to study the pigment components and the variation trends of relative pigment contents at different fiber developmental stages of natural colored cotton. The ihpRNA interference vectors and am
4、iRNA interference vectors target to CHS gene and F35H were constructed and transformed to brown cotton respectively through pollen-tube pathway to identify .【关键词】棕色棉 色素物质 ihpRNA amiRNA 基因表达【英文关键词】Brown cotton pigment ihpRNA amiRNA gene expression【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务
5、.保过包发【目录】棕色棉色素相关基因RNA干扰载体构建及表达分析摘要6-7Abstract7-8第一章 引言15-271.1 植物类黄酮物质及其合成途径研究进展15-191.1.1 植物色素物质及类黄酮类物质分类151.1.2 类黄酮合成途径15-171.1.3 类黄酮合成途径结构基因及转录因子17-191.2 天然彩色棉研究进展及应用前景19-211.2.1 天然彩色棉色素物质生化研究19-201.2.2 天然彩色棉色素合成相关基因研究20-211.2.3 天然彩色棉存在问题及应用前景211.3 RNA 干涉的原理及应用21-231.3.1 RNA 干涉技术的作用机制21-221.3.1.1
6、 转录水平基因沉默（TGS）221.3.1.2 转录后水平基因沉默（PTGS）221.3.1.3 翻译水平基因沉默221.3.2 RNA 干涉技术的特点22-231.3.3 RNA 干涉技术在植物中的应用现状231.4 Aritificial microRNA 技术的原理及应用23-261.4.1 AmiRNA 技术的作用机制241.4.2 AmiRNA 技术的特点24-251.4.3 AmiRNA 技术在植物中的应用现状25-261.4.3.1 AmiRNA 技术在模式植物中的应用251.4.3.2 AmiRNA 技术在其他植物中的研究25-261.5 本研究的目的意义26-27第二章 棕色
7、棉不同发育时期色素物质分析27-352.1 实验材料及设备27-282.1.1 实验材料272.1.2 主要试剂272.1.3 试验主要仪器27-282.2 试验方法282.2.1 棕色棉显色反应282.2.1.1 NaOH 反应282.2.1.2 盐酸-镁粉反应282.2.2 棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析282.3 结果与分析28-322.3.1 棕色棉纤维色素提取液显色反应分析28-302.3.2 棕色棉纤维色素甲醇提取液光谱分析30-322.4 小结与讨论32-352.4.1 小结32-332.4.2 讨论33-35第三章 棕色棉CHS、F35H 基因的克隆及其RNAi 载体构建35
8、-543.1 试验材料35-363.1.1 试验材料353.1.2 菌株、载体及质粒353.1.3 试验主要试剂353.1.4 试验主要仪器35-363.2 试验方法36-443.2.1 试验材料的准备363.2.2 改良CTAB 法提取总 RNA36-383.2.2.1 RNA 提取步骤36-373.2.2.2 RNA 提取试剂的配制37-383.2.3 RT-PCR 得到第一链cDNA383.2.4 CHS、F35H 基因的克隆38-413.2.4.1 CHS 基因全长序列的获得38-393.2.4.2 F35H 的基因全长的获得393.2.4.3 DNA 片段的凝胶回收393.2.4.4
9、 PCR 产物的TA 克隆39-403.2.4.5 热激法转化大肠杆菌及阳性克隆的筛选403.2.4.6 转化子的筛选及鉴定40-413.2.4.7 PCR 产物的测序及序列比对413.2.5 CHS、F35H 基因的RNAi 载体构建41-433.2.5.1 RNA 干扰载体构建流程41-423.2.5.2 正反义片段的扩增423.2.5.3 正反义片段的凝胶回收423.2.5.4 双酶切体系及方法42-433.2.5.5 连接反应体系及方法433.2.5.6 连接产物转化大肠杆菌433.2.5.7 RNA 干扰载体的验证433.2.6 RNA 干扰质粒的遗传转化43-443.2.6.1 质
10、粒DNA 的大量提取43-443.2.6.2 花粉管通道法导入目的基因443.3 结果与分析44-523.3.1 目的基因序列的克隆及PCR 检测44-453.3.2 目的基因序列的同源性分析45-503.3.3 RNA 干扰载体的验证分析50-523.4 小结与讨论52-543.4.1 小结523.4.2 讨论52-54第四章 棕色棉CHS、F35H 基因的AmiRNA 载体构建54-624.1 试验材料544.2 试验方法54-584.2.1 CHS 基因及F35H 基因的AmiRNA 载体的构建54-584.2.1.1 靶向CHS 及F35H 的AmiRNA 序列的设计54-574.2.
11、1.2 CHS 及F35H 的AmiRNA DNA 序列合成及亚克隆574.2.1.3 AmiCHS 及AmiF35H 测序质粒的提取574.2.1.4 CHS 及F35H AmiRNA 表达载体的构建574.2.1.5 CHS 及F35H AmiRNA 表达载体的检测57-584.2.2 CHS 及F35H AmiRNA 表达载体的遗传转化584.3 结果与分析58-614.3.1 AmiRNACHS 及AmiRNAF35H 二级结构预测584.3.2 CHS 及F35H 的AmiRNA 相应的DNA 序列合成及亚克隆584.3.3 pBI-AmiCHS 及pBI-AmiF35H 载体的结果
12、验证58-614.4 小结与讨论61-624.4.1 小结614.4.2 讨论61-62第五章 棕色棉纤维类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析62-705.1 试验材料625.2 试验方法62-655.2.1 棉花纤维RNA 提取与检测62-635.2.2 第一链cDNA 合成635.2.3 基因的选择与引物合成635.2.4 实时荧光定量PCR 程序63-645.2.5 实时荧光定量PCR 数据的处理64-655.3 结果与分析65-685.3.1 RNA 提取质量检测65-665.3.2 内参基因的筛选665.3.3 棕色棉类黄酮合成途径转录因子基因的表达分析66-685.4 小结与讨论68-705.4.1 小结685.4.2 讨论68-70第六章 全文结论70-71参考文献71-76致谢76-77作者简介77 （注：文档可能无法思考全面，请浏览后下载，供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）