核糖核酸腺苷脱氨酶1在肝癌中的表达及临床意义要点.pdf

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1、1 8 3 0 主堡塞堕处型苤查! Q ! ! 生! 旦筮! ! 鲞筮! 塑! 也垦翌! ! ! E ：血! Y ! ! ! ! ：! ! ! ：! ! ：盟! ：! 核糖核酸腺苷脱氨酶1 在肝癌中的表达及 临床意义 张慧峰秦秉玉余海波 作者单位：4 5 0 0 0 3 郑州，河南省人民医院( 郑州大学人民医院) 重症医学科( 张慧峰、秦 秉玉) ，肝胆胰外科( 余海波) 通信作者：余海波，E m a i l ：y h b 2 1 0 1 6 6 1 1 6 3 c o r n D O I ：1 0 3 7 6 0 c m a j i s s n 1 0 0 1 9 0 3 0 2 0 1 6

2、 0 7 0 3 7 【摘要】目的探讨核糖核酸腺苷脱氨酶1 ( A D A R I ) 在原发性肝癌中的表达及其与肝癌临床 病理特征的关系。方法免疫组织化学及W e s t e r nb l o t 法检测A D A R l 在癌旁组织及肝癌肿瘤组织 中表达；收集患者年龄、性别、肿瘤直径、门脉癌栓、肝背膜受侵、分化程度、血清甲胎蛋白( A F P ) 及细 胞核增殖抗原( K i - 6 7 ) 的表达，了解A D A R l 与肝癌临床病理特征的关系。结果免疫组织化学检 测结果显示，A D A R l 在癌旁组织中A D A R l 表达率为2 9 3 2 ，而在肝癌肿瘤组织中表达率为 6

3、4 5 0 ，肿瘤组织A D A R l 阳性率远高于癌旁组织，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ；W e s t e r nb l o t 结果 表明，癌组织A D A R l 表达量明显高于癌旁组织，差异有统计学意义( P O 0 5 ) ，而与分化程度、血清A F P 及K i - 6 7 的表达密切相关，A D A R l 表达水平明显升高( P 0 0 5 ) 。 结论A D A R l 在肝癌中表达增加，且与肝癌分化程度和血管生成基因相关，提示A D A R l 可能通过 诱导肝癌分化及血管生成而促进肝癌发生侵袭转移。 【关键词】原发性肝癌；核糖核酸腺苷脱氨酶1 ；侵袭；转移

4、 基金项目：河南省科技厅基础与前沿技术项目( 11 2 3 0 0 4 1 0 0 3 7 ) ；河南省重点科技攻关计划项目 ( 1 3 2 1 0 2 3 1 0 3 8 5 ) ；郑州市重点实验室项目( 2 0 1 5 - 9 2 3 ) ；河南省医学科技攻关计划重点项目 ( 2 0 1 5 0 2 0 1 8 ) E x p r e s s i o na n di n f l u e n c eo fa d e n o s i n ed e a m i n a s ea c t i n go nR N A1i np r i m a r yl i v e rc a n c e r Z h

5、a n g H u i f e n g ，Q i nB i n g y u ，Y uH a i b o D e p a r t m e n to fI n t e n s i v eC a r eU n i t ，H e n a nP r 删i n c m lP e o p l e SH o s p i t a l ( P e o p l e SH o s p i t a lo fZ h e n g z h o u U n i v e r s i t y ) ，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 3 ，C h i n a ( Z h a n gH F ，Q i nB Y )

6、；D e p a r t m e n to fH e p a t o b i l i a r yS u 俘e u ， H e n a nP r o v i n c i a lP e o p l e SH o s p i t a l ( P e o p l e SH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uU n i v e r s i t y ) ，Z h e n g z h o u4 5 0 0 0 3 ， C h i n a ( Y uH B ) C o r r e s p o n d i n ga 眦h o r ：Y uH a i b o ，E m a i l

7、：y h 6 2 J D J 6 6 J 1 6 3 c o r n 【A b s t r a c t 】0 b j e c t i v eT oi n v e s t i g a t ea d e n o s i n ed e a m i n a s ea c t i n go nR N A1 ( A D A R l ) i np r i m a r y l i v e rc a n c e r ( P L C ) a n di t sr e l a t i o n s h i pw i t hc l i n i c a lp a t h o l o g y M e t h o d sA D

8、 A R le x p r e s s i o nw a sd e t e c - t e db yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r ya n dW e s t e r nb l o t t i n ga s s a yi nc a n c e rt i s s u e sa n dt u m o ra d j a c e n tt i s s u e ；a g e ， g e n d e r ，t u m o rs i z e ，p o r t a lv e i nt u m o rt h r o m b u s ，l i v e rb a c kf

9、 i l mi n v a s i o n ，d i f f e r e n t i a t i o n ，s e l u ma l p h af e t a l p r o t e i n ( A F P ) a n dp r o l i f e r a t i o nc e l ln u c l e a ra n t i g e n ( K i 一6 7 ) e x p r e s s i o nw e r ec o l l e c t e dt oe x p l o r er e l a t i o n s h i po fA D A R la n dc l i n i c a lp a

10、 t h o l o g y R e s u l t s I m m u n o h i s t o c h e m i e a ld e t e c t i o ns h o w e dt h a tA D A R l e x p r e s s i o nr a t eo ft u m o ra d j a c e n tt i s s u eW a s2 9 3 ，a n dt u m o rt i s s u ew a s6 4 5 0 ，t h e r ew a ss i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eo fA D A R lp o s i

11、 t i v er a t eb e t w e e nt u m o rt i s s u ea n da d j a c e n tt i s s u e ( P 0 0 5 ) ；W e s t e r nb l o t t i n g a s s a yr e s u l t ss h o w e dt h a tA D A R le x p r e s s i o ni nc a n c e rt i s s u eW a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti nt h et u m o r a d j a c e

12、n tt i s s u e ，t h ed i f f e r e n c ew a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n t ( P 0 0 5 ) a n dt h ed e g r e eo fd i f f e r e n t i a t i o n ，s e l u mA F Pa n dK i 一6 7 e x p r e s s i o ni sc l o s e l yr e l a t e dt ot h a tA D A R le x p r e s s i o nl e v e li n c r e a s e ds

13、 i g n i f i c a n t l y ( P 7 5 计为4 分；( 2 ) 染色强度：无着色计为0 分，浅黄色计为1 分，黄或橘黄色计为2 分，深黄色或褐 色计为3 分；上述两项相加为分级标准： 3 分为高表达。 3 W e s t e r nb l o t 检测肝癌组织和癌旁组织中 A D A R l 表达：取新鲜肝癌及癌旁肝组织各5 0m g ，加入 含苯甲基磺酰氟( P M S F ) 的R I P A 裂解液提取总蛋白， 使用二喹啉甲酸( B C A ) 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋 白浓度。取蛋白进行十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝 胶电泳( S D S P A G E ) 后

14、转至聚偏二氟乙烯( P V D F ) 膜； 用5 脱脂奶粉4 封闭过夜；分别加人兔抗人A D A R l 多克隆抗体( 浓度均为1 ：5 0 0 ) ，4 孵育过夜；T r i s H C l 缓冲液( T B S T ) 洗膜后加入辣根过氧化物酶( H R P ) 标记 的二抗( 浓度1 ：10 0 0 ) ，室温孵育1h 后洗膜，电化学发 1 8 3 1 光( E C L ) 法显色。B 一肌动蛋白( 1 3 - a c t i n ) 为内参，用凝胶 分析软件对图像进行分析，目标蛋白的相对表达量用 目标蛋白灰度值1 3 a c t i n 蛋白灰度值表示。 4 统计学方法：应用S P

15、S S1 9 0 统计软件分析。 计量资料采用均数标准差( x s ) 表示，组间比较采 用方差分析，计数资料用相对数表示，采用r 检验，以 P 0 0 5 为差异有统计学意义。 结果 1 A D A R l 在P L C 和癌旁组织中的表达：免疫组织 化学检测结果显示，A D A R l 阳性表达产物主要分布于 细胞质，在癌旁组织中A D A R l 表达率为2 9 3 2 ；而 在肝癌肿瘤组织中表达率为6 4 5 0 ，肿瘤组织 A D A R l 阳性率高于癌旁组织，差异有统计学意义( P 0 0 5 ) ，而与分化程度、血清甲胎蛋白( A F P ) 及 细胞核增殖抗原( K i -

16、6 7 ) 的表达密切相关，A D A R l 表 达水平明显升高( P 0 0 5 ，表1 ) 。 3 A D A R l 在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况： W e s t e r nb l o t 结果表明，癌组织A D A R l 表达水平 ( 2 8 2 3 0 1 8 6 ) 明显高于癌旁组织( 1 8 3 6 0 1 2 6 ) ， 万方数据 1 8 3 2 史堡塞堕处型苤查垫! ! 生! 旦箜! ! 鲞笙! 塑鱼i ! 垦! P ! ! 堕：! ! Y2 Q ! ! ：! 尘：! ! ：! 表1A D A R I 的表达与肿瘤临床病理特征的关系( 例) 注：A D A R l

17、：核糖核酸腺苷脱氨酶1 ；A F P ：甲胎蛋白；K i - 6 7 ：细胞核 增殖抗原 差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。 讨论 P L C 是全球最常见的恶性肿瘤之一，占恶性肿瘤 死亡率的第3 位，每年有超过6 0 万人死于肝癌1 。 在我国，肝癌更是具有高发病率和高死亡率的特点，全 球每年肝癌新发病例中我国占5 5 ，在过去2 0 年中， 我国肝癌的病死率从癌症死因的第3 位跃至第2 位J 。致力于阐明原发性肝癌发生发展的机制，防止 复发转移，探索更有效的治疗靶点是提高肝癌总体疗 效的根本。At oI 编辑是生物体内普遍存在的一种重 要的基因转录后修饰方式。I 在碱基配对时相当于

18、G 与c 配对，因此导致R N A 的结构、功能、稳定性及遗 传信息等的改变。研究者近来发现A D A R l 基因在食 管癌、黑色素瘤等肿瘤中表达明显增加 剖。 本研究结果显示，A D A R l 在P L C 中蛋白表达水 平明显高于癌旁组织，同时W e s t e r nb l o t 结果显示 A D A R l 的表达差异有明显统计学意义。当然，W e s t e r n b l o t 是检测蛋白的半定量实验，本研究配对样本较少， 不一定全面反映客观真实结果。P L C 中A D A R l 阳性 表达率高于配对的癌旁组织，肝癌组织中的A D A R l 表达水平与患者年龄、性别、

19、肿瘤直径、门脉癌栓及肝 背膜受侵差异无统计学意义，A D A R l 的阳性表达水平 与P L C 分化程度、血清A F P 及K i - 6 7 的表达呈正相 关，提示A D A R l 与P L C 的发生有一定的关系。本研 究结果显示，A D A R l 阳性表达患者术后的中位生存时 间缩短，这提示A D A R l 与P L C 预后相关。K i - 6 7 被广 泛用于反映乳腺癌及胰腺神经内分泌肿瘤等的增殖活 性 9 。10 | 。本研究中的A D A R l 高表达和K i - 6 7 高表达 相关，表明A D A R l 在肝癌的增殖中可能有重要的意 义。 2 3 4 5 6 7

20、 8 9 1 0 参考文献 H o o dJ L M o r a b i t oM V ，M a r t i n e zC R3 r d e ta 1 R e o v i r u s m e d i a t e di n - d u c t i o no fA D A R l ( p 1 5 0 ) m i n i m a l l ya l t e r sR N Ae d i t i n gp a t t e r n si n d i s c r e t eb r a i nr e g i o n s J M o lC e l lN e u r o s c i ，2 0 1 4 ，6 1 ：9

21、 7 1 0 9 D O I ：1 0 1 0 1 6 i m c n 2 0 1 4 0 6 0 0 1 M a n n i o nN M G r e e n w o o dS M 。Y o u n gR ，e ta 1 T h eR N A e d i t i n ge n z y l l l eA D A R lc o n t r o l si n n a t ei m m u n er e s p o n s e st oR N A J C e l l R e p ，2 0 1 4 ，9 ( 4 ) ：1 4 8 2 1 4 9 4 D O t ：1 0 1 0 1 6 j e e l

22、 m p 2 0 1 4 1 0 0 4 1 S t e i n m a nR A W a n gQ A D A R li s o f o r mi n v o l v e m e n ti ne m b r y o n i cl e t h a l i t y fJ P r o cN a t lA c a dS c iU SA ，2 0 1 1 ，1 0 8 ( 2 4 ) ：E 1 9 9 D O I ：1 0 1 0 7 3 p n a s 1 1 0 5 0 0 4 1 0 8 T a n gY D N aL ，F uL H ，e ta 1 D o u b l e - s t r a

23、n d e dR N A - s p e c i f i ca d e n o s i n ed e a m i n a s el ( A D A R l ) p r o m o t e sE I A Vr e p l i c a t i o na n di n f e c t i v i t y J V i r o l o g y ，2 0 1 5 ，4 7 6 ：3 6 4 - 3 7 1 D O I ! 1 0 1 0 1 6 i v i r a l 2 0 1 4 1 2 0 3 8 J e m a lA ，B r a yF ，C e n t e rM M ，e ta 1 G l o

24、b a lc a n c e rs t a t i s t i c s lJf C A C a n c e rJC l i n ，2 0 1 1 ，6 1 ( 2 ) ：6 9 9 0 D O I ：1 0 3 3 2 2 e a a e 2 0 】0 7 P a r k i nD M ，B r a yF ，F e r l a yJ ，e ta 1 G l o b a lc a n c e rs t a t i s t i c s ，2 0 0 2 J C AC a n c e rJC l i n ，2 0 0 5 ，5 5 ( 2 ) ：7 4 1 0 8 D O I ：1 0 3 3 2

25、2 e a n j e l i n 5 5 2 7 4 。 N e m l i e hY ，G r e e n b e r gE ，O r t e n b e r gR ，e ta 1 M i c r o R N A - m e d i a t e dI O S S o fA D A R li nm e t a s t a t i cm e l a n o m ap r o m o t e st u m o rg r o w t hJ1 JC l i n I n v e s t 2 0 1 3 ，1 2 3 ( 6 ) ：2 7 0 3 2 7 1 8 D O t ：1 0 1 1 7 2 J

26、 C l 6 2 9 8 0 Q i nY R ，Q i a oJ J ，C h a nT H 。e ta 1 A d e n o s i n e t o i n o s i n eR N Ae d i t i n g m e d i a t e db yA D A R si ne s o p h a g e a ls q u a m o u sc e l lc a r c i n o m a J C a n c e rR e s ，2 0 1 4 ，7 4 ( 3 ) ：8 4 0 - 8 5 1 D O I ：1 0 1 1 5 8 伽8 5 4 7 2 M c C a l lC M S

27、h iC ，C o m i s hT C 。e ta 1 G r a d i n go fw e l l d i f i e r e n t i a t e d p a n c r e a t i cn e u r o e n d o c r i n et u m o r si Si m p r o v e db yt h ei n c l u s i o no fb o t h K i 6 7p r o l i f e r a t i v ei n d e xa n dm i t o t i cr a t e J A mJS u r gP a t h o l ，2 0 1 3 ， 3 7 (

28、 1 1 ) ：1 6 7 1 1 6 7 7 D O I ：1 0 1 0 9 7 P A S 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 8 9 R e y a lF ，H a j a g eD ，S a v i g n o n iA ，e ta lL o n g t e r mp r o g n o s t i cp e r f o r m a n c eo fK i 6 7r a t ei ne a r l ys t a g e ，p T I - p T 2 ，p N 0 ，i n v a s i v eb r e a s tc a r c i - n o m a 【J 【P L o SO n e ，2 0 1 3 ，8 ( 3 ) ：e 5 5 9 0 1 D O I ：1 0 1 3 7 1 j o u r n a l p o n e 0 0 5 5 9 0 1 ( 收稿日期：2 0 1 6 - 0 1 2 7 ) 万方数据