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1、食品中金黄色葡萄球菌检测方法依据12020 年 4 月 19 日文档仅供参考，不当之处，请联系改正。食品中金黄色葡萄球菌的检测方法1. 范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌的检测方法。本标准第一法适用于金黄色葡萄球菌的定性检测；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。2. 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36 1。2.2冰箱： 2 5。2.3恒温水浴箱：37 65。2.4天平：感量 0.1g 。2.5均质器。2.6振荡器。2.7无菌吸管：1m
2、L（具 0.01mL刻度）、 10mL（具 0.1mL刻度）或微量移液器。2.8无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。2.9无菌培养皿：直径90mm。2.10注射器： 0.5mL。2.11 pH 计或 pH比色管或精密pH试纸。22020 年 4 月 19 日文档仅供参考，不当之处，请联系改正。2.12全自动微生物生化鉴定系统。（ BD Crystal或 Phoenix ）。2.13比浊仪。（ BD Phoenix 比浊仪，货号 440910）。2.14比浊仪定标盒。（ BD Phoenix 定标盒，货号440911）。3. 培养基和试剂3.110 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤。3.27.5 %
3、氯化钠肉汤。3.3血琼脂平板。（BD 货号脑心浸液琼脂 241830胰蛋白大豆琼脂236950作为基础加兔血浆）3.4Baird-Parker琼脂平板。（ BD 货号 276840 ）3.5脑心浸出液肉汤 (BHI) 。（ BD 货号 237400 ）3.6稀释液：磷酸盐缓冲液。 (BD 货号 211544)3.7营养琼脂小斜面。（ BD 货号 21 ）3.8革兰氏染色液。（ BD 货号 212539）3.9无菌生理盐水。第一法 金黄色葡萄球菌的定性检验4. 检验程序金黄色葡萄球菌定性检验程序见图 1：检样36 1 18h 24hBaird-Parker平36 1血平板 18h24h3涂片染2
4、020 年 4 月 19 日BHI 肉汤和营养琼脂小观察溶文档仅供参考，不当之处，请联系改正。Baird-Parker平板 18h24h 或 45h48h36 1 18h 24h图 1 金黄色葡萄球菌检验程序5.操作步骤5.1样品的处理称取 25g样品至盛有 225mL7.5%氯化钠肉汤或 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min 10000r/min 均质 1min2min，或放入盛有 225mL7.5%氯化钠肉汤或 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min 2min。若样品为液态，吸取 25mL样品至盛有 225mL7.5%氯化钠肉汤或 10
5、%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶 ( 瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠 )中，振荡混匀。5.2 增菌与分离培养42020 年 4 月 19 日5.3.25.3.1文档仅供参考，不当之处，请联系改正。5.2.1将上述样品匀液于36 1培养18h 24h。金黄色葡萄球菌在 7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。5.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36 1培养 18h24h。Baird-Parker平板 36 1培养 18h24h或45h48h。5.2.3金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直
6、径为2mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。5.3 鉴定染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽孢，无荚膜，直径约为 0.5 m1m。挑取 Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分52020 年 4 月 19 日