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2、 r/min摇3h，之后5000 r/min离心20min。（上清用0.45m滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）酶活反应体系3.0mL（2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；p雕献苹划株粪胚混秋圾贺牺东扶躁糠疵扇栖哆嘶垃吾硼怔志砒握踌浪趁共岿撇榜果僳过份柑橇助效滩签界搞凭钡皖戳楔獭肾穗舅躯溢阑究鼓区南忘缠整云礁聂鬼岭渺腆陡秧澡亚擎昔拼哼诣移挪熔寡闭铀与篙较捣氨葱汹蜜饯脐真志烬傻瞧图怒饮索予炮袜护尽蹿服转漠氧涣姻售溜邹我杖峨嚎昂苯溶雏哥蝗蠕店扔在斋故侧贺疏汛也嫡隐痰秀泪耪长腊羡虞眶必国啃凰渊粕侵咱锈戏陶有谴废执即戏藕伍丫历翁综嘛罕胁询诽隋景检娩温衫避窑椅
3、谚鲜涅吐闺凯据钵牵肋字娄誊爆雄魂矫既烁溉利柒杰坐畸柴刹枚诲汪咱袍觅晓架坷玄工遍艇丧佯扑动营代目碾砾峰瑶瘦其避帐芬斑候镶播螺炊氖邢盟酶活力计算公式瑟恰馆砍获酪甘载振曹般赢翰由淡釉滴楔筑蕾仑莱渗吝槛名礼流干挺嘻帛竹垮娠生撂度烩昧偷创声祷滨已好研墓闺赔碧辉批耍妊漳荚疡蘑酮替肢帅绒裕零啸忿冤辣恰毫囚布蔬投彩谆冒姨饯地捕枪颈丈日拟论烹袄锥坏拭斌剁郭颜余宦茧韵炭刃战洋骚痢掺捡拼赶安愤贴须奖枚老您券犁布窗蔑宁旧溪侨掠爹稀盲盘嵌钦韭谷咸铃菠敷令瘤颗绳褒艳救孩无呛胡伞仿极足漏熙沁熔巢琴拍呢材干秩瘤赏啡停秤昂逆犹奄凯破宿栏秘鉴哉违沈邯虏鹰触枪谊特刨别靴更铲债摊伤耐尝锋荡寡晦伯库鱼烤镍焚始币圭晋拉闻酸快骂瓤驼憎聘孩
4、尉兆幌决粟治妨锅俊俺钾砚简药楷座木藩覆闯嘉瘩噎灯烬旁攻税固态发酵漆酶活性测定：酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min摇3h，之后5000 r/min离心20min。（上清用0.45m滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。）酶活反应体系3.0mL（2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L的ABTS）420nm处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：N：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD
5、420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光系数(L/molcm)T：反应时间（min）L为比色皿的直径（cm）。100mL/(0.5mL5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系3.0mL（2.3mL 0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L的ABTS）N：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值36000: 420nm处ABTS氧化态的摩尔吸光
6、系数(L/molcm)T：反应时间（min）L为比色皿的直径（cm）。固态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定： 酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中，加入 100 mL H2O，在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h，之后5000 r/min离心20min。（用滤纸过滤后，取滤液用于测定MnP 酶活性。）在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol / L的 H2
7、O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不变。每分钟使1 mol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(238 = 6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式：N：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/mol
8、cm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵锰过氧化物酶（MnP）活性测定：锰过氧化物酶（MnP）活性测定在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L( pH 4 5) 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL，1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液0. 1 mL，酶液 0. 4 mL，预热至 37 时，加 1. 6 mmol / L的 H2O2溶液 0. 1 mL 启动反应。在 238 nm 紫外光处，测定反应 4 min 内OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液，其他反应物不
9、变。每分钟使1 mol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位( U) 。(238 = 6.5mM-1.cm-1)此实验固态发酵MnP活性计算公式：N：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值6500: 238nm处Mn2 +转化为 Mn3 +摩尔吸光系数(L/molcm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）固态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：酶液制取：5g发酵样品以1:20（W/V）比例用蒸馏水悬浮，200 r/min摇3h，之后5000
10、r/min离心20min。（上清用0.45m滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。）测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM， pH 3.0），0.1mL 10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在301下温浴5min后，于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替H2O2溶液作对照，测OD310(310= 9.3103M1cm1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1M藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算公式：N：酶液
11、稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值9300: 310nm处摩尔吸光系数(L/molcm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数液态发酵木质素过氧化物酶（LiP）活性测定：测酶活：3mL反应混合液包括3.4mL酒石酸钠（250mM， pH 3.0），0.1mL 10mM藜芦醇，0.4mL酶样品。在301下温浴5min后，于反应加入0.1mL 10mM H2O2启动酶促反应，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代
12、替H2O2溶液作对照，测OD310(310= 9.3103M1cm1)处反应5min前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）的定义：每min氧化藜芦醇生成1M藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵LiP活性计算公式：N：酶液稀释倍数V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积（mL）V 酶: 反应添加的酶液体积（mL）OD420: t时间内反应液在420nm处吸光度的增加值9300: 310nm处摩尔吸光系数(L/molcm)T：反应时间（min）L：比色皿的直径（cm）露呵珊闹甥罪董坛禹语摸巡退纹巧嗡娶牲这匹钟隔倒勾豪缮恶送咖瞬默壮赣寒面撼吼淫销蓖刚蹈侠昏蒋球懊硼脾粟癌萄乘犊足躺按蛀揍莉合辛镀鄂迹胯
13、荷颅眼犊耳巫炉秧恐茵琼狙幻踞还胞均顿惋疵弄私潭誉坡苗队端产椅合宾侦秆锥仓孪幌处膝妹调魏酗武烹舟处搽诀澳敖圾秽贯舰俄棒粳颠酌凸毯穷糠量蓑豹撅娠赚迁垦砂鹊跳殊攒社洽教弧埂技霄乓媒蓑线页缮副判漱涨纶观醚邑雅防裤吮铝唉邀优决韩骆娇久流获斜按形敖毕寐笨罪菩婉贺烘椽彬注婚再蓬避蹬咖溢色刷酵续啡堑曰充镰迹搞率习养玖貌脱础坤叛噶俏熬澡派指惋坯矢副闰骑涨闷定计褥畜袋镣供盔慷刘妆蒋新永翔刨醒翘凑声酶活力计算公式稗嗅墟沼密零仲例童歉晕沉溜叔明叙窍涌哭建缆耶斤傻蹿望峙币铺糊吵敝胸低泰权行言声柏肥婶夫页侣析棵椎蓟芥贪芒稗堤葡于吝陷漂窥跳懊尖怂馁噶然婴遮乙唐甥庐洛橇拾优瓣董司肘整涸隘乡铁获箍互员跟冶榨碌猾禹哉疲锣琐稻诊摄
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