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1、2015版中国药典纯化水微生物限度检测方法验证方案 1. 审批 起草人签名： 审核人签名： 批准人签名： 2. 目录 1. 审批 . 1 2. 目录 . 2 3. 目的 . 3 4. 范围 . 3 5. 职责 . 3 6. 执行程序 . 4 7. 描述 . 4 8. 方法验证 . 4 8.1. 8.2. 8.3. 8.4. 8.5. 8.6. 8.7. 8.8. 8.9. 8.10. 8.11. 人员培训 .4 文件确认 .5 仪器确认 .5 供试品确认 .6 培养基及缓冲液确认 .6 菌种确认 .7 培养基 .7 菌种：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。 .7 供试品制备 .8 试验结果 .9 验
2、证结果分析与评价 .10 9. 偏差处理 . 10 10. 11. 12. 13. 14. 变更控制 . 10 附件日志 . 11 再验证 . 11 参考书目 . 11 修订历史 . 12 3. 目的 纯化水微生物限度检查采用薄膜过滤法，验证该方法适用于纯化水中需氧菌总数的测定。 4. 范围 本验证方案适用于上海XXXX有限公司QC实验室，对纯化水微生物限度检查方法（薄膜过滤法）适用性的验证。 5. 职责 5.1. 验证小组组成： 5.2. 验证小组组长负责 5.2.1. 组织起草或审核验证方案及变更申请； 5.2.2. 对验证小组成员进行培训； 5.2.3. 验证方案的组织实施； 5.2.4
3、. 对验证过程中的记录审核，保证其真实性、可靠性和完整性； 5.2.5. 组织验证报告的起草、汇总并参与对其进行审核及验证周期的拟定。 5.3. QA参与人员负责 5.3.1. 审核验证方案、报告及报告中出现的偏差、变更； 5.3.2. 参与验证方案的实施及评价； 5.3.3. 对验证方案及报告进行编号并纳入验证文件系统且归档。 5.4. QC参与人员负责 5.4.1. 起草验证方案； 5.4.2. 已经批准的验证方案的具体实施； 5.4.3. 收集测试数据，应评估数据并对测试数据做出评论； 5.4.4. 参与偏差调查、变更申请等； 5.4.5. 起草验证报告。 6. 执行程序 6.1. 6.
4、2. 6.3. 6.4. 一旦方案被批准和发布，组长对本验证小组人员进行本方案的培训； 所有用于测试的仪器/仪表都必须经过校验/验证后才能用于测试； 验证小组负责核查所有完成的测试结果和附件的完整性； 测试完成后，由组长及相关部门做出确认结论。 7. 描述 取三个不同批号的纯化水用薄膜过滤法检测微生物限度，通过比较试验菌的恢复生长结果评价整个检验方法的准确性、有效性，通过计算回收率来判断检查方法是否有影响，通过验证来确认薄膜过滤法适合于纯化水需氧菌总数的测定。三次试验中，稀释剂对照回收率应在50%200%范围内，试验组回收率也应在50%200%范围内。进行微生物限度检查方法（薄膜过滤法）验证时
5、，所有的平皿和稀释剂都应该严格灭菌消毒、灭菌，确保对试验结果没有影响。 8. 方法验证 8.1. 人员培训 文件确认 8.2. 8.3. 仪器确认 8.4. 供试品确认 8.5. 培养基及缓冲液确认 8.6. 菌种确认 8.7. 培养基 8.7.1. 培养基：按IOP-QC-014培养基灵敏度测试规程检查。 8.8. 菌种：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。 8.8.1. 菌液制备：取枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌冻存管0.1ml接种至10mlTSB培养基，3035 培养1824h。 8.8.2. 菌液计数：取枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌液0.1ml接种至TSA培养基，用涂布棒快速地 将其均匀涂布，303
6、5 培养4872h计数。 8.8.3. 菌落计数结果 8.8.3.1. 8.8.3.2. 8.9. 供试品制备 8.9.1. 试验组：取纯化水1ml注入滤器，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲洗，分别在 冲洗液中加入上述2种菌液各1ml，过滤、各平行制备2个平皿。 8.9.2. 供试品对照组：取纯化水1ml注入滤器，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml冲洗， 过滤、测定供试品本底菌数，各平行制备2个平皿。 8.9.3. 稀释剂对照组：取100mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液注入滤器，加入上述2种菌液各 1ml，测定其菌数，各平行制备2个平皿。 8.10. 试验结果
7、 8.10.1. 试验组的菌数回收率（%）=（试验组的平均菌落供试品对照组的平均菌落数）/菌液组的 平均菌落数X100%。 8.10.2. 稀释剂对照组的回收率（%）=（稀释剂对照组的平均菌落/菌液组的平均菌落数）X100%。 8.10.3. 8.10.4. 8.11. 验证结果分析与评价 8.11.1. 以上验证结果表明，纯化水_采用上述方法进行需氧菌总数的测定。 9. 偏差处理 偏差处理：严格按照IOP-QC-015工艺用水微生物限度检查操作规程操作，如方案执行过程中有偏差产生，根据SOP-QA-016偏差管理规程进行处理；并按要求填写偏差列表（表9-1） 10. 变更控制 方案执行过程中如需要变更控制，应按照SOP-QA-017变更控制规程的流程进行处理，并按要求填写变更控制列表（表10-1）和变更申请控制记录（SOP-QA-017-A）。 11. 附件日志 在附件日志中列明所有附件，每个附件都要有自己唯一的附件号，并在“描述”栏标明每一个附件的总页数，如附件涵盖多项内容，应标明每项内容所在的页码。 12. 再验证 微生物限度检查方法变更、试验条件改变等可能影响检查结果时需要对本方法进行再验证。 13. 参考书目 13.1. 中国药典2015版四部 14. 修订历史