《丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的有效作用.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的有效作用.docx（3页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、丙酮酸钠液腹腔复苏对失血性休克大鼠肠黏膜屏障的有效作用失血性休克（hemorrhagic shock，HS）是临床常见的急危重症之一，全身有效循环血量锐减、组织灌注不足是其主要病理生理改变。目前，经静脉补液是HS复苏的主要方法，但肠道血流并未被及时恢复，肠黏膜屏障功能仍处于破坏状态，导致炎性介质大量释放，加重多器官微循环障碍；而且不能通过大量静脉液体复苏所逆转。腹腔复苏（intraperitoneal resuscitation，IR）是美国Zakaria等 提出的一种治疗HS的新型方法。路小光等【6】在大鼠实验研究发现较单纯静脉复苏，静脉复苏加2.5%腹膜透析液（Delflex液，PD-2）
2、IR可显著降低实验动物血浆二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）含量、血浆D-乳酸（D-lactic acid，D-LA）及内毒素含量，证明PD-2液IR可以降低肠黏膜通透性、减轻内毒素血症的发生，在维持肠黏膜完整性方面具有显著优势；但PD-2液以乳酸钠为主要成分，酸中毒调节能力及全身碱化作用较弱，可能不利于休克患者的病情恢复。丙酮酸是糖酵解的关键中间产物，是糖类、蛋白质和脂类的代谢枢纽。Zhou 【6】研究表明丙酮酸钠液具有改善休克细胞的糖代谢、增强机体全身碱化和抗氧化的特性。将丙酮酸钠应用于腹腔复苏，能否更好的恢复肠道血运，纠正酸中毒，保护肠黏膜屏障功能，降低HS病死率？1
3、材料与方法1.1 实验动物及分组健康清洁级雄性SD大鼠40只，68周龄，体质量250300 g，大连医科大学动物实验中心提供，适应性喂养1周，实验前禁食12 h，禁水4 h。随机（随机数字法）分为4组：假手术组（组）、HS模型组（组），复方氯化钠静脉复苏+PD-2液腹腔复苏组（组），复方氯化钠静脉复苏+丙酮酸钠腹腔复苏组（组），每组10只。1.2 实验方法1.2.1 主要试剂2.5%的PD-2腹膜透析液：购自广州百特医疗用品有限公司。2.5%丙酮酸钠液：丙酮酸钠（Sigma公司）4.48 g、氯化钙0.183 g、氯化镁0.05 g、氯化钠5.38 g溶于750 mL重蒸水中，最后加入10%葡
4、萄糖液250 mL。用稀HCl下调pH值为4.5，过滤消毒后分装（大连大学附属中山医院药剂科），4保存。使用前恒温水浴锅加热至37，配置后测定渗透压为395 mOsmol/L。D-LA乳酸试剂盒购自美国sigma公司。戊巴比妥钠购自国药集团化学试剂有限公司。1.2.2 动物模型制备 采用Wiggers改良法制备HS大鼠模型。腹腔注射3% 的戊巴比妥钠进行腹腔麻醉（40 mg/kg）。麻醉后将大鼠固定在手术台，依次行右颈总动脉、右股静脉、左股动脉插管及全身肝素化（800 U/kg）。右颈总动脉接16道多功能生理记录仪，监测平均动脉压。经左股动脉放血造模：放血速度约为11.2 mL/min，使MA
5、P降至3540 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa），此时暂停放血，随血压代偿回升。再分次间歇放血，直至MAP稳定在40 mm Hg，维持1 h即成功建立大鼠HS模型。、组在造模后经右股静脉回输放出的血量及2倍量林格氏液行静脉复苏，同时组组分别向腹腔注射2.5%丙酮酸钠液20 mL和2.5% PD-2液20 mL。液体复苏速度为11.2 mL/（min-kg）。1.2.3 检测指标和方法动脉血pH、PaO2、PaCO2：自股动脉抽取血液标本，离心处理后全自动血液生化分析仪检测、血浆D-LA含量（分光光度法）小肠光镜下形态学观察：小肠10%福尔马林液固定，梯度酒精予以脱水，常规石蜡包
6、埋，4 μm切片，HE染色后，采用盲法在光镜下阅片，观察小肠组织病理学变化。根据Chiu等方法通过计算小肠上皮细胞损伤指数的方法来评定小肠黏膜损伤程度，具体小肠上皮细胞损伤指数分级标准参见表1。1.3 统计学方法所有数据经SPSS 13.0 for Windows统计软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间样本比较采用成组t检验，多样本均数比较采用单因素方差分析，以P0.05）；组、组较组pH水平及PaO2含量明显升高，差异有统计学意义（P0.05）；与组比较，组pH水平及PO2水平升高更为明显，差异具有统计学意义（P0.05），见表2。2.
7、2 小肠HE染色组织病理学变化2.2.1 光镜下小肠病理组织学变化 组大鼠小肠黏膜绒毛排列整齐，无水肿，黏膜下血管充盈。组大鼠小肠黏膜层绒毛高度水肿，黏膜下血管塌陷，固有层内腺体灶性坏死，并有大片黏膜绒毛坏死、脱落，缺损；组和组小肠黏膜变化较组明显减轻，见小肠黏膜层绒毛轻度水肿、少量片状坏死、脱落，黏膜下血管轻度塌陷；组小肠黏膜绒毛水肿、倒伏及坏死程度好于组，黏膜下血管较充盈。见图。2.2.2 各组小肠上皮损伤指数比较 组与组比较，差异具有统计学意义（P 0.01 ）；组及组与组比较，差异具有统计学意义（P 0.01）；组与组比较，差异具有统计学意义（P 0.05）。见表3。3 讨论3.1 失
8、血性休克与腹腔复苏近年来，HS的治疗方法及手段取得较大进展，复苏的液体种类及血管活性药物的使用已明显降低了HS的病死率。然而，研究显示HS临床病死率仍较高。Garrison和Zakaria在电视显微镜下观察离体大鼠肠管血运，发现在静脉复苏早期，肠系膜微血管较休克时短暂舒张，随后即出现持续性收缩，肠黏膜血供进行性减少，水肿进一步加重。究其原因可能是肠道缺血后，肠道出现微循环异常及细胞缺氧下发生的能量代谢异常，并由此产生乳酸盐堆积、代谢性酸中毒、细胞膜通透性增加，以及各种细胞膜完整性的损害，导致各种通道障碍，如水离子通道、钙离子通道等，释放大量炎性因子，如TNF-α、白三烯、IL-1及
9、IL-8等；同时大量炎性因子引起细胞氧化磷酸化障碍，加重能量合成障碍，其中细胞凋亡、氧化应激、炎症反应这些致损伤机制相互交错影响。因此，肠黏膜屏障功能破坏、肠道细菌移位和肠源性脓毒血症的发生，是HS静脉复苏后期死亡的主要原因。Zakaria等提出腹腔复苏（intraperitoneal resuscitation，IR）治疗HS的方法。IR即直接往腹腔内注射液体，以改善肠道及内脏器官的血液循环，防止器官功能衰竭的方法。笔者前期实验研究发现腹腔复苏具有保护肠黏膜功能，减轻内毒素血症的作用【6】。D-乳酸（D-LA）是胃肠道多种细菌的代谢产物，在危重症和应激情况下，肠道D-LA生成和吸收明显增加，
10、且哺乳动物不具备将D-LA快速降解的酶系统，导致血浆中D-LA水平明显升高。因此，血中D-LA水平能作为反映肠道缺血性损伤、肠道屏障功能损伤的标志物。Elliottt极力推荐血乳酸作为监测休克复苏的最佳和终末指标，它能准确评估休克的严重程度，预测病死率和观察复苏的效果。本次实验通过测定大鼠血D-LA含量证明静脉复苏联合IR可以保护肠黏膜膜屏障功能，减少血浆D-LA产生及入血量，而且丙酮酸钠IR保护肠黏膜膜屏障功能效果优于PD-2液。3.2 丙酮酸钠液在腹腔复苏中的优势丙酮酸广泛参与全身各组织和器官的代谢，是三羧酸循环的重要底物。Sharma和Mongan实验证明丙酮酸钠对HS和缺血-再灌注的器
11、官如脑、肠等均起到保护作用，特别是能抑制肺、脑细胞的凋亡和保护肠黏膜屏障功能。De Root等证明外源地供给丙酮酸，可增强丙酮酸脱氢酶复合体的活性，加快乙酰COA的合成，使三羧酸循环得以不断地进行，释放大量的能量。Zhou 【7】研究表明丙酮酸钠液具有改善休克细胞的糖代谢，增强机体全身碱化和抗氧化的特性。丙酮酸钠腹腔复苏能否对肠上皮细胞起到抗氧化和清除自由基作用，目前国内外尚未见相关研究。本次实验应用与2.5%PD-2液相同渗透浓度的丙酮酸钠液进行对比实验，结果发现在同等条件下，光镜下组大鼠小肠黏膜绒毛水肿、倒伏及坏死程度轻于组，黏膜下血管充盈程度强于组，差异具有统计学意义（P 0.05）。而
12、动脉血气分析、血D-LA比较，组pH、PO2高于组，差异具有统计学意义（P 0.05）。说明丙酮酸钠在腹腔注射后，在发挥抗氧化和抗炎作用的同时，可以释放更多能量，改善肠黏膜代谢，有利于肠上皮细胞及紧密连接功能的恢复，而且这种作用优于PD-2液。但目前IR治疗HS的研究大多停留在动物实验，其治疗的分子机制也未阐明，有许多问题需要进一步探讨。笔者相信，随着不断的深入和研究，腹腔复苏可能成为HS救治的主要方法之一。参考文献【1】Rao XP， Zhu LQ， Lian HH.Protective effects of glutamine on the intestinal mucosal barri
13、er in young rabbits under hemorrhagic shock.Chin J Contemp Ped，2006，8（1）：66-70.【2】Lange M， Enkhbaatar P， Nakano Y，et al. Role of nitric oxide in shock： the large animal perspective.Front Biosci， 2009，14（1）：1979-1989.【3】Garrison RN，Zakaria ER.Peritoneal resuscitation.Am J Surg，2005，190 （2）：l81-185.【4
14、】Zakaria ER，Garrison RN，Spain DA，et al.Intraperitoneal resuscitation improves intestinal blood flow following hemorrhagic shock.Ann Surg， 2003，237：704-713.【5】Zakaria Er，Hun RT，Matheson PJ，et al.A novel method of peritoneal resuscitation improves organ perfusion after hemorrhagic shock.Am J Surg，2003，186 （5）：443-448.