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柱层析法的原理和方法,一、原理,柱层析是化合物在液相和固相之间的分配，属于固-液吸附层析。 利用固定相对液体相中的各组分吸附能力不同，从而以不同速度向下迁移，形成若干色带，分别收集。,二、操作,1.装柱,干法 1. 管上端放一漏斗 2.将硅胶装入 3.轻敲管壁使之填装均匀,湿法 1.将溶剂装入管内， 2.将吸附剂和溶剂 调成浆状，倒入管 中， 3.使溶剂流出，吸附剂下沉,吸附剂,种类：氧化铝、硅胶，氧化镁、碳酸钙和活性炭等。 氧化铝有酸、碱、中性。适用于不同类型化合物的分离。 硅胶没有酸碱性之分，可适用于各类有机物的分离。,吸附剂的选择,a.与被吸附物及展开剂均无化学作用（首要） b.吸附能力的大小（颗粒大小） c.吸附剂的活性（含水量） d.分子极性,上样,2.,3.淋洗,洗脱剂的选择：根据点板的比移值（简称Rf值）。,洗脱剂极性比较： 己烷、石油醚环己烷四氯化碳三氟乙烯二硫化碳甲苯苯二氯甲烷三氯甲烷乙醚乙酸乙酯丙酮丙醇乙醇甲醇水吡啶乙酸,4.分类,5.收集,根据样品中各组分的吸附能力判断流出的各组分 若为有色物质，观看色带，若无色，点板观察。 收集含目标物的淋洗剂。 确定纯度。 选择无杂质的进行回收。,谢谢观赏！,