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1、羟基磷灰石在心脏外科应用的初步实验研究背景 : 风湿性心脏瓣膜病是一种患病率和死亡率都很高的疾病。目前我们所使用的人工合成材料或生物材料替代瓣膜还存在着许多缺陷如血栓的形成, 材料的寿命短甚至需要再次手术。目的 : 探讨 HA的生物相容性 , 为人工心脏瓣膜的构建提供理想的支架薄膜材料。方法 : 将传代的人脐静脉内皮细胞, 制成细胞悬液接种在羟基磷灰石(Hydroxyapatite,HA)材料上。置含 5%(V/V)CO2、37的恒温培养箱内静态培养3 周。分别在培养 3 天、 7天、14 天和 21 天后取出部分材料 , 用 2.5 %戊二醛固定 , 乙醇梯度脱水 , 临界点干燥 , 喷金
2、, 于扫描电子显微镜 (Scanning Electron Microscope, SEM)下观察细胞在材料上的附着情况。用四氮唑盐比色 (MTT)法测定 HUVEC与材料复合培养的增殖能力。 结果 : 扫描电镜观察复合培养后见HA材料的表面有细胞附着且数目逐渐增多, 到第 21 天时可见细胞融合成片 , 并将材料表面覆盖 , 部分区域有细胞外基质形成。四唑盐 (MTT)比色方法评价材料对HUVEC的细胞毒性见细胞增殖未受到明显影响 , 生长良好。结论 :HA 对 HUVEC的增殖和分化功能无明显影响, 对细胞无明显毒性 , 具有良好的生物相容性 , 可以作为心脏瓣膜材料安全应用。目的 : 用
3、四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测羟基磷灰石 (Hydroxyapatite,HA)对人脐带内皮细胞可能存在的细胞毒性。方法 : 用 MTT比色方法评价材料的细胞毒性。设常温浸提液组 ; 高温浸提液组。两组均设置各自对应的阳性和阴性对照组。将加入浸提液和材料并培养72h 后各组样品分别在倒置相差显微镜下观察细胞在浸提液中及在材料边缘的形态变化及生长状况, 以细胞毒性试验来评价生物材料生物相容性。参照国际标准化组织(ISO) 制定的细胞毒性试验的标准, 即ISO10993-5:1992 医疗器械生物学评价细胞毒性试验体外法之评价标准和要求。结果 : 材料浸提液与细胞共培养组24h 时观察常温浸提液、高温浸提液及阴性对照组的 HUVEC细胞形态、数量 , 各实验组与阴性对照组无明显差异。结论:通过细胞毒性试验与评价, 结果表明 HA材料对人脐带内皮细胞生长抑制反应级别为 1 级或 0 级 , 属于无明显毒性作用 , 有良好的细胞相容性。