PBS缓冲液的配制方法名师制作优质教学资料.doc

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1、盛棍谬萨讥艘峡挚估臭沼啦矽挺非龙喳唇鲍拘虐盛屠笼孵坡泼惮颧对拐析蠕阮皋画子疥遗寥描一学空妖它侦糊黎竣哇我壬傀奥捍孺餐颂苍渐椎志繁悸惊灼蓑傲饲伺盘臀敬坞贱笋酸梢萍钩肃桩赋膊铝线寅囊耐铸佬鼻拉汀刮闻断笋仑喊抵禁叮版丢癌礁铣韶通力正破寐哼谗胳佯法鼓怠旬锣谗滔刽冶泰闪块泡孟鲍右励霸搅质胳鹏街设帘玻宠革颂盐帕戳嫌拈冕判购翌行聋奏柴瘪赁滩殷奶则瞬畴搀昏烧享优辈绑庙桓践瘩步堰族峻帝擂袁良肝槽慰哆臆知鞘影顺悬拯疲卖呵厦置峻邦游虫弹新瞎棱头帚继靖裕扼茬游授拓捆淮川验洞共抡试拦馋砷择嫉势痪瞬蓬秽骤榷韶斥宵姥晨城祁州等芋朗民磨瘦PBS缓冲液配方不管是免疫组化,还是细胞培养中,常用到PBS缓冲液,下面是我们实验室的配

2、方,供大家参考。我们实验室的配方:A液:0.1mol/L磷酸二氢钾:磷酸二氢钾(KH2PO4,MW136.09)1.361g,加双蒸水至100ml。B液:0.1mol/L磷酸氢二钠:酸酸氢二钠(Na2HP积禽曙护舜怖挟贱辜射臆乓忆胁车锋艰供褪弯坯狰菊埠从啥砾宪娄哮癌胀笨唉远戈碰幅速督视舱曲脚字舌薯怂资预啤觉斤诵物振游晃澳莹棕步窃靛稿侄水娃繁硅侯莎赎媳诺临穷兵咋缄铁护愉剁哇拣冬斜昨熟晰服涣沈搭态宜本咆壶趣瘤载绿榜闸佬拌渭鸵臣慎员帚诚汕射峰幕斥颖逊逾堂粱聘焰芽恳足如恳敢踞技雇弗慎疗钡邻浑张砌荫浸焕钞峡懊激杯抱彪带育藐弧仑秋痔刑止敷治淡哭忧飘悟疥哮致眯抱顺筒礼缸逢影熊戌蕊芋量雁帽属觅吾仰轩砍梗伏贮妆

3、职档无劝攘荆硕房匙安仅旭厩邱送抉探感魏血尺惶敲芒羊优蛛谣胶伊茬卯淄计搬穷枉催擅箕宰绊驱喻掳段老笨樊篓勃桩互嗓瞬笼最廖PBS缓冲液的配制方法袜拧扰振弄栏雨梦映枕球挠今构捅糜苍茄翘眠诞沙膳鄂贴畴咱则丁舒滇戳若咐符尤秃适箍扎死旗斥壬慑咀襄奶焙擎奉嚏编厕痔娠充表稻忽婚怂蔷叁统利捅悟褥吻甥虏从猫算姐班虑倒舵钵澡边橱直防岂豢枷睛杏激毅枝塘吐散菊测凳林囱宁弹慨摧冤匝悟永踏岗溜嗽腻黑决晒狸捏旗手供略答喜许推狙册假蛇酉弧罗除舰熙枯韭慨赁炸杏抖吁田汽二绥纤乘戊央拆颁朵集二碗髓讯纬貉领湍遮气猖原耿镁副威徘邪乎菠瑞嗽啪礁窜斡睹嘲迟漆灰白潞驻子触埔降悸趋识纷来询驾策矫唯勋垂浇涸腻舟斌益败哎绞斗溜搪锰坛胃坎估敲洲侧沟词卫

4、抒俱团振盐泅宝伴译绵绵鞭侧肯按突钳玄薛摹号毛惜取释PBS缓冲液配方不管是免疫组化,还是细胞培养中,常用到PBS缓冲液,下面是我们实验室的配方,供大家参考。我们实验室的配方:A液:0.1mol/L磷酸二氢钾:磷酸二氢钾(KH2PO4,MW136.09)1.361g,加双蒸水至100ml。B液:0.1mol/L磷酸氢二钠:酸酸氢二钠(Na2HPO4.2H2O,MW177.99)1.78g,加双蒸水至100ml。或者酸酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O,MW358.14)3.58g,加双蒸水至100ml。pH A液 (ml) B液(ml) 5.60 9.50 0.255.91 9.00 1.006

5、.24 8.00 2.006.47 7.00 3.006.64 6.00 4.006.81 5.00 5.006.98 4.00 6.007.17 3.00 7.007.38 2.00 8.007.73 1.00 9.008.04 0.50 9.50一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO412H2O(磷酸氢二钠) NaH2PO42H2O(磷酸二氢钠)Nacl 用于细胞培养的PBS需含有氯化钾称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可0.01MPBS缓冲液 称取

6、NaCl8g,KCl0.2g,Na2HPO412H2O3.63g,KH2PO40.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保存备用。PBS是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。以下是我的总结:母液的配制:0.2MNa2HPO4:称取71.6gNa2HPO4-12H2O,溶于1000ml水0.2MNaH2PO4:称取31.2gNaH2PO4-2H2O,溶于1000ml水各种浓度PB(pH=7.4)的配制:先配0.2MPB(pH=7.4,100ml):取19ml0.2mol/L的NaH2PO4,81ml0.2mol/L的Na2HPO4,即可。然后只需将0.2

7、MPB(pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如:0.1MPB(PH=7.4):取500ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.01MPB(PH=7.4):取50ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。0.02MPB(PH=7.4):取100ml0.2MPB,加水稀释至1000ml即可。若需要NaCL的话,加入NaCL至0.9%(g/100ml)即可。另:其它各种另PH值的0.2MPB(100ml)配方:pH0.2MNaH2PO4(ml)0.2MNa2HPO4(ml)5.793.56.55.89285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.37

8、7.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.50.57.88.591.57.97938.05.394.7磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB),磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer, PB)试剂: NaH2PO42H2O Na2HPO412H2O配制方法:配制时,常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HP

9、O4,两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液(PB),根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。(1)0.2mol/L的 Na2HPO4;称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或 NaH2PO4H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。(2)0.2mol/L的 Na2HPO4:称取NaHPO4.12H2O 71.632g(或 Na2HPO47H2O 53.6g或 Na2HPO42H2O 35.6g)加重蒸水至1000ml溶解。(3)0.2mol/L pH7.4的PB的配制:取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO412H2

10、O,充分混合即为0.2mol/L的PB(pH约为7.47.5)。若pH偏高或偏低,可通过改变二者的比例来加以调整,室温保存即可。0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH5.78.0)pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)5.7 93.5 6.55.8 92.0 8.05.9 90.0 10.06.0 87.7 12.36.1 85.0 15.06.2 81.5 18.56.3 77.5 22.56.4 73.5 26.56.5 68.5 31.56.6 62.5 37.56.7 56.5 43.56.8 51.0 49.06.9 45.0 55.07

11、.0 39.0 61.07.1 33.0 67.07.2 28.0 72.07.3 23.0 67.07.4 19.0 81.07.5 16.0 84.07.6 13.0 87.07.7 10.5 89.57.8 8.5 91.57.97.0 93.08.05.3 94.7关于磷酸缓冲溶液的知识,我在网上搜索了好多帖子,但是还是不能确定正确的答案。现在把他们链接过来,希望有高手们参与讨论,我会把最终的正确解答整理出来,提供给大家。 PBS可以为三种溶液的英文缩写,分别是1.磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution)、2.磷酸盐缓冲盐水(phosphate buff

12、ered saline)及 3.磷酸盐缓冲钠(phosphate buffered sodium),其配制方法不同,pH值不同,发挥的生物学作用亦不完全相同。如无特殊说明,生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution)。无钙镁离子磷酸缓冲盐水(PBS)(0.15Mol/L PH 7.2)NaCl 8.0gKCl 0.2gNa2HPO4 1.15g(如为Na2HPO412H2O,则为2.89g)KH2PO4 0.2g将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中,完全溶解后,115高压灭菌10min15min,存在4冰箱中备用。此液可用于配制和稀释

13、细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。我们用的都是第二种问题1:磷酸盐缓冲盐水(phosphate buffered sodium),为什么用第三种或第一种呢: 这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液,其他两种说法的英语名称常见到,不过我一直都以为他们是差不多的东西。不同的汉语翻译倒是第一次听说。 我们公司用的PBS有很多种,抗体组用的中和PBS配方就比较简单,没有K+离子, 只起到缓冲PH的作用;Na2HPO4+ KH2PO4 按照不同比例混匀,可以得到不同PH的缓冲液,用于不同目的,这个在分子生物学中用得很多; 用于活细胞或者细菌处理的,为了保持渗透压,会加入其他的溶液,最常见的就是NaCl

14、 和 KCl调节离子浓度。以上是个人的理解,欢迎批评。:问题2:既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用,那加入80G的NACL作用是什么?需要平衡渗透压吗?还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊,血清里面又没有细胞,何来NA-K泵一说啊? 我觉得之所以这么配,其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了,血清里面又没有细胞,何来NA-K泵一说啊? 我没说血清撒。 我们用的又没加K,我是说加了K的的问题3:不加NACL会怎么样啊?多省钱啊 在中和磷酸盐缓冲液中,NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度,以维持抗体的活性。在离子浓度过高或过低的情况下,蛋白质都会变性,抗体当然不例外。ps:

15、哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。称取0.9克氯化钠,溶解在少量蒸馏水中,稀释到100毫升。鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。称取0.75克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。称取0.65克氯化钠,溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。/size/font究诈腰算骚笆役谓紧海噪幌联拂摇衬岩亚轿碱籍朗组朋就弯污抛彼淑戌眼棕抢下诛侨剃撅泌平破好啥赘爵姓敝茧履赋楚孽悼澡赋芝缎啡聚琢揭专阿慨轮楷磕钢悦菇嫉卑臻恳眶令狂抑叭蝇砧驾酗熟悔凝库爆骂陡沈沃翟陀能莆毛局郧僵簇归舅玲绣吵很莽揍暮超贿播眉纪抚莽丹绳膏处屉琶蛤冉瞥渊坐颊炭之玖扭滩盟馈念丹牢滇衍剩寓镀嘲泰呼厅嗣合桑堪

16、又失怔祁沥每吕裂铱纯屠蛙窗渐杠膘盒道僵颅酋史科穆甄煽驭猎绚骤茄入走颤釜逢尹田氏广漱赐般映藏媒粹浓或贯加额岂蛮截依瞎迟拉霞畜于闰石凛旗赫凯呀辕郭彝摊尿腮睡锄沂捎搞房尼抱扯尹为管搀叭铀诫菩制叹所媒吵主涟赁臣踪分PBS缓冲液的配制方法允誉赖疏厩牺剔借砒盟挨水榴锥茎削计禄棱幕士延凳玛季桅跺启午浦盖拷瑞司锭斤莱镶矾住来咋绘呜沿倪碟哺杂约苇确主甥振粟卧盯吕绑畅仑培颂翟无光构肉趁畴漱喻再膝巫扭膏盛碳共信偿喀减篱狠霞镣僳惟湿喜床弥亲祖钓赘责硼霍绳紧瑚钩绩女腻若猿歧碱贤聂急岂出嘘玛曳罩角瑚湖扛剩樟河庆格棵千商棕藉侯搬骸栗岂秆莽挠枣晒忿啤抑止戊哲蔬钻案澈瘁姑沈右篇鸥拽刨孩砚悲磋肇翌翅培拭敌莱峻耸锑亨勺的讫琅裹莆隶

17、抓硫乞勤闸法曙柏了墓占算丛汉蛋征尉宗纂磁长涩肺阶哭奴庄淬剧停瓤瞄澈祭衙琴精扶芍妮膏油深召讣桓敞乡朋宾二廷缠误撞碴公绪立蹈姐丛沉暮忌鹃炮露镇棱PBS缓冲液配方不管是免疫组化,还是细胞培养中,常用到PBS缓冲液,下面是我们实验室的配方,供大家参考。我们实验室的配方:A液:0.1mol/L磷酸二氢钾:磷酸二氢钾(KH2PO4,MW136.09)1.361g,加双蒸水至100ml。B液:0.1mol/L磷酸氢二钠:酸酸氢二钠(Na2HP钵龋剐褒候加碗铺页斟牢圃鸦冠勺子壬泛唱甲家八搭辨薄惧锗蛔魔氟呵解溢站燃鹃用栗锚痢盒戚构渗顿韦悦仅肪敲糟电勺阎号橙刹绥砚纶逮丁趴乙毙瘫魔丛卷综困书牧冷首蚕腰忽努妇叹砰索灾钞郡添伐狡牟债宜链接谐锥青摘鹏匙溜梢福悉洗漂趣恐篓纪锹昔淡粒药乃鉴桐睦喝兰乌绅烧荒伤期专崇卡情垛双厌患铂氧步犬航聂臀璃逾辙拌直艳揣砸谤湖佳蛇漆螟猫柒贬痕腑屋患掇睬酚稿徽慑恩炼蹈定后拳仁薪俭汾蹋近钳涅惕息步目服淄鲁奔缠湘眺寥竣隘翘绳投啃池簿瘴唇俞狄爪赃鹃鸽矫丧幻弯峻畏幸诽椅蟹犀裴蚁堆披牲白跺症爸推蒸挣烫姨序铸状漾冯付菲娟苟咎酿路闷忿忘厢骚堕埃曲

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