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1、,清洁验证,编译自Aventis培训资料及施雄杰培训资料,扫地机 wenku1,内容,简介 范围 验证过程概述 监控物质 取样方法 可接受标准 分析方法学 文件 监控、变更和再验证,简介 - 清洁验证目的,避免污染： Avoid contamination； 避免交叉污染： Avoid cross-contamination； 消除细菌污染： Eliminate bacteria contamination；,简介 -清洁的定义,目测清洁 设备表面无异物 首要条件！ 分析清洁 分析数据支持设备是清洁的 微生物清洁 微生物数据支持设备是清洁的,简介 清洁验证要素,指南：ICH Q7 FDA清洁验
2、证检查指南 1993 批准/受控的清洗程序 验证方案 经过验证的化学/微生物检测方法 批准的验证报告(结论：清洁程序有效，达到可接受标准） 有效的培训/变更控制,清洁验证范围,生产和包装原料药和制剂的相关区域和设备必须做清洁验证。 对于生产临床试验批的多功能车间 不完全适用 允许通过每次检验来确认设备清洁。,清洁验证程序概述-1,检查设备的确认状态 （IQ/OQ/PQ) 列出该设备生产的全部产品清单（多功能） 验证主计划 -明确需做清洁验证的产品或中间体 -矩阵法判断（多功能设备） 列出可能的清洁剂 选择清洁剂 找出设备难清洗部位 设计和发展清洁方法,清洁验证程序概述-2,建立可接受标准，选取
3、两种认可的方式之一： 定量限度或 目测清洁-分析清洁（VCAC) 检测方法的建立和验证 撰写清洁验证方案 方案实施 撰写/批准验证报告 确立清洗方法 培训计划,清洁方法重要信息-1,设备拆卸要求 所用清洁剂的浓度和体积；或者仅用热水 浸泡/搅拌时间 冲洗时间和体积 清洗剂或者水与产品的兼容性,清洁方法重要信息-2,清洗剂/水的温度或设备的清洗温度 是否加压或者使用机械手段 建立并控制时间节点： 在设备使用后到开始清洗的时间间隔 在各个清洗步骤之间的时间间隔 设备干燥的方法 洗液处置,监控物质,3 个基本类型: 化学的*, 微生物的* 和 颗粒物(particulates) 化学的 对于制剂:活
4、性物质*, 辅料, 清洁剂* 对于原料药:活性物质*, 原料, 中间体,副产物和清洁剂*. *为首要关注,仅在目测清洁合格后才可进行取样 直接取样 “首选的技术” 擦拭取样 接触取样：为检测微生物负载（Bioburden) 优选的方法 间接取样 终洗液取样 不易接触部位 拆卸易造成设备损坏的情况，常用于原料药 与“脏锅”的类比 清洗时效性 终洗水的检测不能以常规的水的标准 (如USP纯化水) 潜在误差,取样要点- 取样技术-1,终洗液（淋洗液）样品 已知体积的溶剂淋洗一定的区域，所得到的溶液用于进行分析 擦拭取样 用蘸了溶剂的介质擦拭一定的区域, 然后再将残余物质从介质中提取出来 如可行，是“
5、首选的取样技术”,取样要点- 取样技术-2,均一性 -对验证计划成功很关键 -高效, 可重现, 有文件记录 定向擦拭法（Squeegee）与随机擦拭法 明确的责任 -擦拭人确认合格 -QA部门,擦拭技术,定向擦拭（Squeegee）技术,或者,第一次,第二次,仅对清洁的并且干燥的设备取样 清洁后应及时进行取样 清洁验证过程中应评估时间间隔效应 设备表面残留物经放置后可使清洁方法有效性下降 “结块效应“,取样时机,取样记录内容 取样时期和时间 取样人 取样方法号 取样点 描述 样品送到实验室 签收/日期/时间 特殊储存要求 备注 偏差,取样文件记录,设备制造商建议/其他用户经验 过去/现在的经验
6、 图示和照片有效说明取样点选择 GMP 区域 潜在的污染机会减少,取样点和环境,设备与产品接触部分 充分的代表性，以增强可信度 每个主要设备至少取3点(最好5点) 额外考虑因素： 难清洗部位 设备材质 接触表面的质地 (光滑/粗糙/等） 资源限制,取样点数目,容器类型：保护样品的完整性 容器的标识 方案编号 设备编号 产品名称 批号 样品编号 取样点 样品描述 取样日期和时间 取样人签字 样品有效日期/时间,样品的储存和标识,微生物检测取样结束，去除残余的取样琼脂（agar) 保证设备安全，并按照SOP适当关闭好 设备待检 保持对设备的”控制“ 若已清洗的设备在使用前不经过检验， 须进行风险分
7、析。 设备在使用前一定要保证进行了合适的清洗,取样完成,培训及记录，对于微生物：包括消毒方法 成功应用擦拭法及微生物（如适用）接触法取样的文件记录,取样人和清洗人不应为同一人，避免利益冲突,取样人资格确认,微小偏差 样品洒掉但可以重新得到 报告中记录 重大偏差 用不合适的清洁剂对已清洁表面取样 报告中记录或加附录 取样失败 要求全面调查 可能直至或包括重新验证 与相应的现场负责人讨论,取样偏差与失败,原料药 目测清洁 “分析”清洁 两种认可的方式 - 可定量限度 - 目测清洁 分析清洁 (VCAC),清洁的可接受标准-1,连续三次实施清洁方案均达到以上要求，方可认为清洁方法验证完成,适用于所有
8、已清洁且干燥的设备 设备表面需要尽可能程度地检查, 确认是清洁的,目测清洁,经典方式 需要考虑: 设备总表面积 产品批次大小 剂量：单一剂量/日剂量 安全因子 100-100,000 毒性考虑 - LDs 基质效应（Matrix effects） 最差情况,分析清洁- 可定量限度方式-1,可定量限度方式-2,典型的可接受标准: 最小日剂量的1/1000 LD50 基于毒性 最小治疗剂量的百分比 对信息的保存和变更控制监控要求高,保证在下一个产品最大日剂量中含有的待检目标物质最高不超过其自身最小日剂量的0.1%； 同时限定该目标物质在下一个产品中的最高含量水平（比如10ppm)。,可定量限度方式
9、-3,可定量限度方式-4,例如, A代表上一种产品， B代表待生产的品种， 限度L1 计算方法: (0.001) (产品A中活性物质最小日剂量) (产品B最大日剂量) L1可以设定为以上计算值或者人为指定的更小值,L1 =,可定量限度方式-5,一旦确定了L1,可通过计算确定单位表面允许的目标物质残留限度L2: (L1) (下一种产品的最小批量) (设备接触表面积) L2 的单位是重量/表面积. 不能够直接进行分析测量,L2 =,可定量限度方式-6,对于一定的设备表面区域进行擦拭取样，然后将目标物质从擦拭签上解吸附到已知体积的溶剂中。对得到的溶液进行分析，限定目标物质残留限度L3. (L2)(擦
10、拭的表面积) (提取用溶剂体积) 分析方法测量的是L3,L3 =,潜在局限性 同一场地，多重标准 不同的标准要求再验证，占用资源多 变更控制 不同产品线 - 设备变化 表面积不同 允许用计算出的代表设备目测不清洁的沾染量作为判定标准。,可定量限度方式-7,VCAC方式（目测清洁-分析清洁）,分析清洁： 药物活性物质分为两个类别 低治疗剂量药物活性物（高活性）: 大鼠口服 LD50 小于 100 mg/Kg 以及 剂量小于 1 mg 标准治疗剂量药物活性物: 在以上1类以外的都算,分析清洁要求适用于任何已清洁、干燥设备的所有表面 每个主要设备至少需要3个取样点 (储罐, 压片机, 制粒机, 自清
11、洁系统),每个主要设备的活性药物残留所有检测结果的平均值必须达到以下标准： 且每一个药物活性物质残留检测结果均不得超过以下标准：,分析清洁标准,标准治疗剂量药物活性物质不超过100微克/100cm2,低治疗剂量药物活性物质不超过10微克/100cm2,标准治疗剂量药物活性物质不超过200微克/100cm2,低治疗剂量药物活性物质不超过20微克/100cm2,清洁剂 目测清洁 (通常是最难达到的标准) 分析清洁 连续三次实施清洁方案均达到以上要求，方可认为清洁方法验证完成 如果清洁剂不留残余可以不要求分析检测 (例如水，异丙醇) (限度/计算略),清洁的可接受标准-2,微生物可接受标准,微生物清
12、洁 目测清洁、干燥 根据历史数据建立警戒限和行动限 未建立专属(specific)的可接受标准,分析方法-1,清洁验证使用的分析方法是整个验证的关键因素! 方法应对检测低含量足够灵敏 考虑稀释体积 与可接受标准相关联 技术上分为两类: 专属性方法 非专属性方法,分析方法-2,专属性方法 HPLC (优选) TLC,非专属性方法 UV/VIS 电导率,GC 专属离子电极,pH TOC（总有机碳）,分析方法-3,非专属性方法 UV 稀释样品使之与已验证的浓度范围一致；样品应以空白签对照溶液读数！ TOC (Total Organic Carbon，总有机碳) 高活性物质与无活性物质没有区分 须谨慎
13、 应小心选择擦拭法 作为常规监测,分析方法-4,专属性方法 HPLC: 首选方法 使用空白样品 没有重大的干扰,研究和产品接触的设备表面相同的表面类型 金属表面 非金属表面 如有可能，设备最好“专用” 特氟龙垫片，丁腈橡胶隔膜 - 潜在可被提取物质,分析方法验证-1,限度检查法： 专属性 回收率 检测限（LOD） 样品溶液的稳定性 系统适应性,定量检查法 专属性 精密度 线性/范围 回收率 定量限（LOQ） 样品溶液的稳定性 系统适应性,分析方法验证-2,方法必须经过验证 通常需要验证的参数：,清洗溶剂的选择 润湿擦拭物 溶解目标化合物 擦拭物材质的选择 与溶剂兼容? 萃取溶剂的选择 体积很重
14、要 注意空白样的使用!,不能对待验物质产生干扰！,专属性,回收率 = 从已加样表面的回收率 + 从擦拭签上的回收率 淋洗液取样回收率也作要求 加样/回收率研究参考要求： 加样范围:平均限度的50- 250% (VCAC个例：2倍平均值) 每个加样水平至少做三块板 不同天的检测回收率须可重现 回收率: 加样板结果的中间值 (75%). 计算时必须考虑回收率！,准确度,加样擦拭签的回收率 表明溶剂用于擦拭的有效性 加样板的回收率 准确预测通常的回收率情况 回收率矫正因子 对低于100%的回收率给予补偿,回收率,表面延迟时间 在设备清洁后到擦拭取样之间的时间段 擦拭签延迟时间 在擦拭签取样后到溶剂提
15、取前的时间段 溶液稳定性 标准品稳定性和擦拭签提取溶液的稳定性,清洗检验方法的稳定性,单位面积的残留量 允许对工艺流程中所有设备或某一指定的设备做补偿 Below LOQ 如果结果小于LOQ,则结果表达为 “小于定 量限（LOQ）” 应尽量避免用“未检出”或结果为“0” 表达。,结果报告,微生物方法验证-1,方法的可接受标准: 定量 回收微生物计数 定性 回收微生物鉴别 方法验证：回收率须符合加样浓度和回收方法的预期 考虑正常取样和接种的误差范围 建议加样范围：可回收菌落10-100 CFU /取样区域 建议取样区域：25 cm2 金属和非金属表面方法相同,稀释剂的选择 用于湿润擦拭签，以从待
16、检测表面获取微生物 方法选择 擦拭到标准培养皿vs.与琼脂接触培养皿直接接触（RODAC=Replicate Organism Detection and Counting） 培养基选择 适合的专属培养基 可中和残余清洁剂和消毒剂的基质 生长支持；消毒条件；储存条件和失效期,微生物方法验证-2,培养条件 温度 时间 氧气需求 稳定性问题 基于清洁干燥的设备不支持微生物繁殖的前提，表面的取样延迟不是关键的问题 样品待检 - 最好在取样两小时内检测,微生物方法验证-3,结果报告以单位面积CFU (菌落数) 表示 建议限度 产品接触的设备表面：5cfu/25cm2 洁净室墙壁、天花板： 10cfu/
17、25cm2 洁净室地面：20cfu/25cm2,微生物方法验证-4,基本要求 责任明确: 负责人和部门 验证方案: 清洁之前起草和批准 验证报告: 对结论的支持,文件,产品信息 方案目的 范围 职责分配 设备或系统描述(流程图) 取样 (和原理) 可接受标准 原理 取样点 原理,方案内容,清洗方法 检测方法 数据报告及评估 失败预案 附件 图片/图谱/SOP等. 批准,方案内容,其他文件,清洗方法/程序 清洁剂的准备和储存 擦拭物的准备，流程和储存 样品标签和容器的准备 清洗液取样 目测检测程序 清洗后 分析控制方法/程序 分析方法验证,在方案基础上表达，并关注： 取样记录 检测方法 偏差,验
18、证报告,失败调查 OOS 调查 增加的实验 结论 批准 质保部,培训记录应包括: 培训内容 培训者；资质 日期/时间/时长 批准 关键人员 清洗人员 取样人员 分析人员,培训信息,“再验证”程序 设备变更/改进 人员变更 产品剂型改变 工艺变更 清洁剂变更 程序的周期性回顾,变更控制,监控和再验证,监控 周期性评估，找出微小变化：流程有效性是否比原来验证时差一些了？ 实际反映出缺乏有效的变更控制程序 日常检查 (目测/非专属及专属方法） 支持变更控制和再验证的需求,再验证,如果变更影响到先前的验证，则可能需要再验证。 生产部门和QA必须周期性评估再验证需求，与验证主计划或国际认可标准一体化。,再验证变更控制,清洁验证是一项系统性工作 是否可接受最终由有关当局检察官评估 严密的逻辑推理是成功的关键,结论,2007年上海国有老企业华联制药厂生产的甲氨蝶呤注射剂中混有长春新碱，引起100多名白血病患者下肢瘫痪，赔偿2亿多元，导致工厂倒闭。 主要原因就是在同一条生产线生产两种产品，换产时设备的清洗与清场不彻底，但甲氨喋呤注射液中是检查不出含有长春新碱杂质的，这样就进入了市场。,上海华联制药厂的污染,术语对照,清洁：Cleaning 净化：Decontamination 消毒：Disinfection/Sanitization 灭菌：Sterilization,