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1、树莓叶果黄酮类化合物含量及抗氧化性分析-农学论文树莓叶果黄酮类化合物含量及抗氧化性分析 杨国慧，张 岩，于 洋，韩德果 （东北农业大学园艺学院农业部东北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，哈尔滨 ） 摘要：以树莓（ ）品种美国、欧洲红、金秋、黑树莓为试材，于年月采集结果枝和根蘖苗中部叶片、青果、熟果，利用超声波法和 （）比色法测定黄酮类化合物含量。结果表明，个品种叶片的黄酮类化合物含量均在月末最高，欧洲红和美国结果枝叶片的高于根蘖苗叶片；青果高于熟果，品种间的含量高低为金秋、美国、欧洲红、黑树莓，同一品种叶片的黄酮类化合物含量高于果实。叶片的黄酮类化合物对种自由基（、）的清除能力均在月末最
2、强，青果高于熟果和叶片，青果中金秋的清除能力最强。 关键词：树莓（ ）；叶片；果实；黄酮类化合物；抗氧化性 中图分类号：； 文献标识码： 文章编号：（） ： ， ， ， （ ， （ ）， ， ） ： ， （ ） ， ， ， （） ， ， ， ， ， ， ； ， ， ， ， ， ， ： （ ）； ； ； ； 收稿日期： 基金项目：黑龙江省应用技术研究与开发计划项目（）；公益性行业（农业）科研专项（） 作者简介：杨国慧（），女，黑龙江伊春人，教授，博士，硕士研究生导师，主要从事小浆果果树种质资源与生物技术、育种方面的研究，（电话）（电子信箱）；通信作者，韩德果（），男，河南南阳人，讲师，博士，从事
3、果树逆境生理与分子生物学研究，（电话）（电子信箱）。 树莓（ ）为适合在寒地栽培的一种特色小浆果类果树，据报道，树莓的叶片与果实中均富含黄酮类化合物。目前关于树莓黄酮类化合物的研究所采用的试验材料其果实主要以红树莓为主，而叶片则采用成熟叶片。树莓果实除红色果之外，还有紫、黄、黑色果等类型；而叶片颜色在一年的生长期里会呈现出季节性的动态变化。树莓不同颜色的果实、不同季节的叶片、叶片和果实之间黄酮类化合物的含量与抗氧化性是否存在着差异，目前尚未见研究报道。试验通过对树莓不同品种、不同发育时期的叶片和果实中黄酮类化合物的含量与抗氧化性进行分析，旨在进一步丰富其生理活性物质的研究内容，拓宽树莓的开发利
4、用渠道。 材料与方法 材料 以果实颜色紫色为的树莓品种美国（ ）、红色的欧洲红（ ）、黄色的金秋（ ）、黑色的黑树莓（ ）为试验材料，其中美国、欧洲红、金秋个品种采自东北农业大学香坊试验农场，黑树莓采自黑龙江省农业科学院绥棱浆果所试验基地。美国和欧洲红越冬埋土，金秋和黑树莓于春季萌芽前进行平茬处理。分别于年月底采集 个品种结果枝和根蘖苗中部位置的叶片，以及各自的青果和成熟的果实，采后冷藏于冰箱内备用。 试剂主要有乙醇、乙酸乙酯、石油醚、水杨酸、缓冲液、邻苯三酚、过硫酸钾等，都为分析纯，总抗氧化能力检测试剂，联氮二（乙基苯并噻唑磺酸）二铵盐（）和，二苯基三硝基苯肼（）为化学纯，芦丁为参照标准品（
5、大连博迈科技发展有限公司）。 仪器主要有新悦型紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）、 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）以及电子天平、微型真空泵、旋转蒸发仪等。 方法 树莓黄酮类化合物的提取与测定 分别称取叶片组织 、果实组织 ，按和（）的比例加入乙醇，采用超声波仪在 下各提取 次，每次 ，真空泵减压过滤。将滤液旋转蒸发后，用乙酸乙酯萃取至下层水相无色透明，其中叶片再用石油醚萃取（去脂、去叶绿素）。取萃取液再次进行旋转蒸发，之后用乙醇定容得到黄酮类化合物提取物。以芦丁为参照标准品（大连博迈科技发展有限公司），采用 -（）比色法来测定黄酮类化合物的含量，测定波长为 。 树莓黄酮类
6、化合物抗氧化性分析 羟自由基清除能力的测定。在试管中加入 黄酮类化合物提取液、 （ /）溶液、 水杨酸乙醇（ /），最后加 （），振荡混合， 水浴下保温 ，于 波长下测定吸光度。加入黄酮类化合物提取液，不加，测定其对比吸光度。以蒸馏水 代替黄酮类化合物提取液，测定空白吸光度。超氧自由基清除能力的测定。采用法。向 、 的 （ /）缓冲液中加入黄酮类化合物提取液 ， 下保温 ，然后加入 下预温的邻苯三酚（ /），摇匀，于 处测吸光度 。以 （ ）溶液代替邻苯三酚（ ），此吸光度记为，以蒸馏水为空白对照，测定空白吸光度0。自由基清除能力的测定。精密称取 ，加入 蒸馏水，加入 /的过硫酸钾 L，黑暗下
7、放置 ，之后将其转移到容量瓶中，加蒸馏水 ，用无水乙醇定容至 ，放置 测定。加 黄酮类化合物提取液，然后加入 乙醇补至 ，再加入 的 溶液混合，静置 ， 下测吸光度 。以 水代替溶液，测吸光度。以乙醇代替黄酮类化合物提取液，测定空白吸光度值。自由基清除能力的测定。加入黄酮类化合物提取液 ，加入乙醇溶液（ ） ，于 处测定吸光度，直到读数稳定。以 乙醇溶液代替乙醇溶液，测定吸光度。以 乙醇代替黄酮类化合物提取液，测定空白吸光度。 树莓黄酮类化合物提取液对上述种自由基的清除能力（）可表示为： （）（）/）， 式中，为空白吸光度；为加入黄酮类化合物溶液反应的吸光度；为加入黄酮类化合物溶液未反应的本底
8、吸光度。 所有数据采用 与 软件进行处理。 结果与分析 树莓叶片、果实中黄酮类化合物在不同生长期含量的比较 个树莓品种欧洲红、美国、金秋、黑树莓结果枝叶片黄酮类化合物含量在不同生长期的测定结果见图。从图可见，个树莓品种结果枝叶片黄酮类化合物含量在不同生长时期均表现出一致的变化趋势，即月月月月（黑树莓平茬后从月末采摘）；而不同树莓品种叶片在同一生长期内的含量亦有差异，其中月末是欧洲红的含量最高，其结果枝叶片的黄酮类化合物含量达到 。 个夏果型树莓品种（欧洲红、美国）根蘖苗叶片黄酮类化合物含量在不同生长期的测定结果见图。从图可见，欧洲红和美国的根蘖苗叶片黄酮类化合物含量亦是在月末最高，但个品种根蘖
9、苗叶片的黄酮类化合物含量均低于其结果枝叶片的含量。 个树莓品种的青果和熟果果实中黄酮类化合物含量的测定结果见图。从图可见，个树莓品种的青果果实中黄酮类化合物含量均明显大于熟果。且不论青果还是熟果，其黄酮类化合物含量均是金秋美国欧洲红黑树莓。 选取个树莓品种黄酮类化合物含量最高时期（月末）的结果枝叶片、根蘖苗叶片、青果和熟果果实进行比较，结果见图。从图可见，个树莓品种在月末的叶片黄酮类化合物含量均大大高于果实的黄酮类化合物含量。 树莓叶片、果实中黄酮类化合物的抗氧化性比较 个树莓品种欧洲红、美国、金秋、黑树莓叶片中黄酮类化合物对、种自由基的清除情况分别见图、图、图、图。从图中可见，个树莓品种叶片
10、中黄酮类化合物对、的清除能力均表现为月末最强；品种中以欧洲红最高，其对种自由基：、的清除率分别为、和。 个树莓品种果实中黄酮类化合物对、种自由基的清除情况分别见图、图、图、图。从图中可见，个树莓品种果实中黄酮类化合物对、的清除能力均表现为青果远大于熟果；品种中以金秋最高，其对种自由基的清除能力最强，金秋对上述种自由基的清除率分别为、。 选取个树莓品种在月末采集的叶片（此阶段黄酮类化合物含量最高），与其青果对种自由基的清除能力进行比较，结果见图。从图可见，除了欧洲红对的清除能力表现为叶片大于青果（图）外，其余个品种对种自由基（图、图、图）、欧洲红对其他种自由基的清除能力（图）均表现为青果强于叶片
11、。 小结与讨论 试验测定了个果实颜色不同的树莓品种欧洲红、美国、金秋、黑树莓的结果枝、根蘖枝叶片和青果、熟果中黄酮类化合物在不同生长期含量的变化，结果表明，个品种叶片黄酮类化合物含量均在月末出现最大值，此阶段和月相比，叶片发育成熟，颜色较深，为具有旺盛光合作用的功能叶片。而在月末，夏果型树莓欧洲红和美国已进入果实成熟期，结果枝生长开始衰弱（夏果型树莓的生长特点），叶片中的黄酮类化合物含量也表现为降低；但美国一直到月末降低的幅度都不大，可能是由于美国是一个生长势极强的品种，其结果枝上的叶片绿色期保持时间很长的缘故。欧洲红和美国结果枝叶片的黄酮类化合物含量均高于根蘖苗，这可能是由于个品种的结果枝为
12、二年生枝条，含有较多的贮藏营养，因而叶片发育的成熟度更高一些。金秋和黑树莓在萌芽前进行了平茬处理，因此其结果枝皆为一年生枝条，其黄酮类化合物含量低于欧洲红和美国结果枝的含量，而和欧洲红和美国根蘖苗的含量相当。试验结果表明，树莓叶片中的黄酮类化合物含量及抗氧化性与品种、植株的生长特性、枝条类型和叶片的发育时期有着很大的关系，因此在实际应用中，若想获得高含量黄酮类化合物的树莓材料，则应选择黄酮类化合物含量高的品种，并在含量高的枝条上于适宜的生长期采摘。 树莓叶片、果实中黄酮类化合物提取物对种自由基（、）均表现出一定的清除能力，且其清除能力和黄酮类化合物的含量有关，黄酮类化合物含量越高，清除能力则越
13、强。在种自由基中，树莓材料对清除能力最强，如欧洲红在月份采集的叶片对的清除能力可达到，说明树莓中的黄酮类化合物具有极强的抗氧化能力。而对叶片、果实中的黄酮类化合物清除自由基能力的分析结果表明，虽然果实中的黄酮类化合物含量低于叶片中的含量，但其抗氧化能力却强于叶片，这可能是由于叶片与果实中的黄酮类化合物种类不同，因此表现出的生理活性也不同造成的。 参考文献： 朱小霞树莓叶黄酮类物质的提取、纯化及抗氧化性的研究新疆石河子：石河子大学， 塔 娜，李蜀眉，田维平，等橘皮中黄酮类化合物抗氧化活性的研究内蒙古农业大学学报（自然科学版），（）： 张志昆黑穗醋栗叶片中黄酮类化合物的提取、分离纯化及生物活性的研
14、究哈尔滨：东北农业大学， 白立敏红树莓总黄酮的提取、纯化及抗氧化性的研究兰州：甘肃农业大学， 杨保求红枣核仁黄酮类化合物的提取纯化工艺及其体外抗氧化性的研究乌鲁木齐：新疆农业大学， 李蜀眉，宋 刚，田维平，等橘皮中黄酮化合物清除自由基的研究内蒙古农业大学学报（自然科学版），（）： 叶陈丽，林 敏，郑超宾，等超声波提取鸡矢藤总黄酮优化工艺研究化学工程与装备，（）： 田 瑶蓝莓中黄酮类物质的提取、分离纯化及生物活性研究哈尔滨：东北农业大学， 王基云宁夏沙枣花黄酮成分及其抗氧化活性的研究银川：宁夏医科大学， 叶长龙，牛志强，吴燕荣可溶性大豆多糖超声波提取工艺及其抗氧化性研究农业科技与装备，（）： 杨 芳贯叶连翘中黄酮类化合物的提取、分离及结构鉴定西安：陕西科技大学， 李彩霞，李复兴，李 鹏，等国槐叶黄酮的抗氧化活性研究天然产物研究与开发，（）： 黄富远，高 明，楼云雁黄酮类化合物的研究概况中华中医药学刊，（）： 王 丽，王振宇，樊梓鸾，等树莓总多酚及其抗氧化功能研究中国林副特产，（）： 王恩福蓝靛果中黄酮类化合物的提取、纯化及功能研究哈尔滨：东北林业大学， 张青峰，张琴琴，冯丽娟超声波法提取蓝树莓叶黄酮类物质的工艺条件优化贵州农业科学，（）：