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1、醇析水提法提取菊花中菊花多糖医药导报2007年5月第26卷第5期?467?醇析水提法提取菊花中菊花多糖马力,陈文,张嵩安,郑妮,张玉,陈东生,陈华庭(华中科技大学同济医学院1.附属协和医院药剂科,武汉430022;2.药学院2002级,武汉430030)摘要目的探讨水提醇沉法从菊花中提取菊花多糖的最佳工艺.方法用正交设计法研究影响菊花多糖提取的因素,用硫酸.苯酚法测定菊花多糖的相对百分含量.结果菊花多糖的最佳提取工艺为水浸提2h,浸提温度100.C,氯仿萃取1次,沉析用乙醇浓度为80%.结论该工艺适合菊花多糖的提取,为深入研究菊花多糖提供了基础.关键宇菊花多糖;正交实验法;提取中图分类号R28
2、6文献标识码A文章编号1004-0781(2007.)05-0467-02OrthogonalTestOptimizingtheMethodofExtractingPolysaccharidefromDendranthemaMrifoliumTzve1.withWaterandEthanolMALi.CHENWen.ZHANGSongan,ZHENGNi,ZHANGYu,CHENDongsheng,CHENHuating(1,DepartmentofPharmacy,UnionHospitalAfficiatedwiththeTongfiMedicalCollege,HuazhongUnive
3、rsityofScienceandTechnology,Wuhan430022,China;2.Grade2002,SchoolofPharmacy,rongiiMedicalCollege.HuazhongUnivers如,ofScienceandTechnology,Wuhan430030,China)ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheoptimalmethodofextractingpolysaccharidefromDendranthemamrioliumTzve1.EtZhaowithWaterandEthano1.MethodsThefactoaff
4、ectingpolysaccharideextrationwerestudiedbyOrthogonaltest,andtherelativepercentagecontentofpolysaccharidewasdeterminedwithsulfuricacid-phenolmethod.ResultsTheoptimalmethodofextractingthepolysaccharidewasasfollow:waterdunkingtime2h,temperatureofwater100.extractingwithchloroformonce,concentrationofalco
5、hol80%.ConclusionThismethodistheoptimalrouteforextractingthepolysaccharide.Thisworkprovidedabasisforitsfurtherstudy.KEYWORDSDendranthemamrifoliumTzve1.polysaeeharide:Orthogonaltest:Extraction菊花(DendranthemamrifoliumTzve1)为菊科菊属植物的干燥头状花序,具有疏风清热,平肝明目,散风降压的功效.多糖在抗肿瘤,抗炎,抗病毒,降血糖,抗衰老,抗凝血,促进免疫等方面都发挥着重要生物活性J
6、.笔者在本实验中以菊花多糖提取产率和含量为指标,对提取过程中影响提取效果的水浸提时间,浸提温度,50mL氯仿萃取次数和乙醇浓度等4个因素3个水平进行深人研究,以确定提取菊花多糖的最佳条件,为菊花多糖的开发利用提供实验依据.1实验材料菊花样品采自湖北荆州菊花种植园,由华中科技大学同济医学院药学院生药教研室张长弓教授鉴定.乙醇(上海振兴化工一厂生产,纯度:95%,分析纯),石油醚(天津市东天正精细化学试剂厂提供,分析纯),氯仿(上海试剂一厂提供,分析纯),乙醚(天津市化学试剂三厂提供),岛津UV2450型分光光度计.2实验方法2.1菊花多糖的提取与含量测定菊花多糖的提取收稿日期2007-01-20
7、修回日期2007-02-11作者简介马力(1967一),男,湖北钟祥人,主管药师,硕士,主要从事医院药学工作.电话:02785726073,Email:mgm12345yahoo.eom.an.采用水提乙醇析出沉淀法J,其原理是根据多糖易溶于水,难溶于乙醇,石油醚,氯仿等溶剂的性质,用水先将粗多糖从菊花中提取出来,用氯仿,石油醚等除去脂溶性杂质,再用Sevag试剂法除去蛋白,最后用乙醇将其从水提物中沉淀析出,从而分离出菊花多糖,经干燥即得到固体多糖.计算其产率和含量.具体的提取方法和步骤见图1.用Sevas剂法除去蛋白二二=I二=二上清液加50吐氯仿萃取乙圆图1溶剂萃取法提取菊花多糖流程图2.
8、2菊花多糖的含量测定2.2.1标准曲线的绘制精密称取干燥至恒重的葡萄糖对照品10mg,置于100mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得葡萄糖对照品贮备液.准确量取上述对照品贮备液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL,分别置于10mL容量瓶中,再分别各取0.5mL加浓硫酸?468?HeraldofMedicineVo1.26No.5May20077.5mL和5%苯酚1.5mL,于40保温30min,在490nm波长处测定吸光度(A),得回归方程C=119.37A一18.56(r=0.9992).结果表明,在1050?mL.的浓度范围内具有良好的线性关系.2.2.2测定方法精密称取所
9、提取的菊花多糖50mg置于100mL容量瓶中,用水溶解并定容,按”标准瞳线的绘制”项下操作,测定吸光度值,按标准瞳线计算所得多糖含量,结果见表1.表1正交试验设计与结果2.3正交实验设计按照上述试验的提取工艺,经过多次单因素对比试验,正交试验设计的因素为:水浸提时间(A),浸提温度(B),沉淀乙醇浓度(C)等3个因素,每因素3水平(见表2),以菊花多糖的产率和含量为考察指标,用L.(3)正交表安排试验时其他条件完全相同.表2正交试验因素与水平考察表3结果3.1最佳提取条件的确定由表1中产率的尺值可以看出,影响提取产率的因素排序为B>A>C,B的影响最大,C的影响最小.经过运算可得出
10、每个因素各水平之和,.综合各因素值和直观比较,得出理论上最佳提取产率的工艺条件为A:BC:.故确定其最佳提取产率工艺条件为:浸提2h,浸提温度100oC,沉析用的乙醇浓度为80%.此外,由表1中含量的尺值来分析,影响其含量的因素排序为A>B>C.A的影响较显着.说明提取过程中,浸提时间对菊花多糖的含量影响最大,延长时间有利于提高菊花多糖的含量;乙醇浓度,浸提温度对菊花多糖含量的影响也较大,由表1中可看出乙醇浓度为80%,浸提温度为100oC时含量较高.从其含量的,看到,所得菊花多糖含量最佳的工艺为ABC:.综上述提取菊花多糖的最佳提取工艺条件为:浸提时间为3h,浸提温度为100oC
11、,沉析用乙醇浓度为80%.实验时其他条件完全相同.3.2验证实验为验证最佳工艺,称取菊花50g,按照优化后所得最佳提取工艺,PJJu人30倍量水提取3次,浸提时间为3h,浸提温度为100oC,沉析用乙醇浓度为80%进行提取,对所得多糖称重并进行测定.结果表明,多糖得率为6.25%,菊花多糖相对百分含量为78.30%,可知与正交表中的最优水平一致,说明本研究所确定的工艺合理.4讨论从表1的结果可以看出:水浸提的时间有3个,分别为1,2和3h,这3个时间条件对产率的影响结果表明:浸提时间越长,产率越高,因此提取时间选3h;浸提温度对产率和含量的影响也较大,温度升高,产率和含量也升高,因此适当提高浸
12、提温度很有必要,在此笔者选择100oC作为最佳浸提温度;笔者考察了3个水平的沉析用乙醇浓度,分别为70%,80%和90%.其对产率的影响虽不是很大,但乙醇浓度越高,产率越高,故从产率与产品的质量来考虑,选用乙醇浓度为80%最好,不但可以降低乙醇的使用量,还可以减少乙醇回收带来的成本.综上所述,考虑菊花多糖的提取产率,纯度,成本等因素,对醇析水提法提取菊花多糖的条件再次优化,笔者选择另一种工艺条件:水浸提为3h,浸提温度为100oC,沉析用乙醇浓度为80%.当然,在实际操作中还需结合生产的实际条件及因素来试验调节,本实验研究为此提供了试验基础.参考文献】1彭少平,芦金清.金菊花的化学成分研究J.中草药,2006,37(1):3841.2丁宝金,金丽琴,吕建新.多糖的生物活性研究进展J.中国药学杂志,2004,39(8):561563.3许旋,骆晓枫,陈兆jI.正交实验法优化茶多糖提取工艺J1.中药材,2005,28(4):327330.