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1、本科毕业论文(设计)外文翻译学 院 专 业药 学姓 名 学 号 指导老师 职 称 合作老师职 称外文题目（原文）Rapid Analysis Method for Paraquat and Diquat in the Serum Using Ion-Pair High-Performance Liquid Chromatography译文：用离子对高效液相色谱法快速分析血清中的百草枯和敌草快Rapid Analysis Method for Paraquat and Diquat in the Serum Using Ion-Pair High-Performance Liquid Chrom
2、atographyMika ITO *,a, Yasushi HORI a, Manami FUJISAWA a, Akira ODA a, Shinichiro KATSUYAMA a, Yasuo HIROSE b, and Toshiharu YOSHIOKA c.在目前的研究中，利用IPCC-MS3(日本，东京的GL科学公司)做为流动相中的抗衡离子，我们建立了一种简单、快速的分析方法即通过引进脱朊血清样品直接进入HPLC，在ODS柱中分离和量化百草枯和敌草快。百草枯和敌草快的校准曲线检测在紫外线290nm处显示了良好的线性，当注入样品浓度的范围内在0.1-10.0g / ml。检测极限
3、是0.05g / ml，添加1.0g / ml百草枯、敌草快到标准血清的平均回收率(n = 5)分别是87.5%, 89.1%; 而相对标准偏差为4.52%, 3.85%; 这些都是良好效果，一份分析的时间不到30分钟。采用该分析方法分析了四例急性中毒，它可能可以迅速决定所有案例的治疗方法。关键词 百草枯；敌草快；HPLC；急性中毒；血清在除草剂包含百草枯或百草枯和敌草快的急性中毒中，这有可能从血清浓度中推断出的病人是否可以生存，这是很重要的，以此为基础，在紧急情况下决定用什么方法治疗。在日本，主要的急性中毒紧急医疗中心是一个专业的有HPLC-二极管阵列系统安装为目的的毒素分析中心。然而，由于
4、作为初步程序提取血清样品中的百草枯、敌草快是必须的，用传统的高效液相色谱法分析耗费时间，而更快的分析技术的设立是重要的一步。根据作者们的了解，各种各样的方法曾被报告来确定百草枯或敌草快的血清水平，例如，薄层色谱法1，光谱化学分析2-8，高效液相色谱法9-21，液相色谱/质谱11，气相色谱22和气相色谱 /质谱23。1998年，日本健康、劳工及福利部分配HPLC-二极管阵列系统到全国各地的73家急救中心，为了方便药物、毒物急性中毒的诊断。这些高效液相系统的应用是极其实用的一步。然而，由于样本提取的任务是为百草枯的高效液相色谱分析报告而进行的常规方法，更快分析技术的确立对减少延迟百草枯制剂中毒的诊
5、断是有用的。在目前的研究中，脱朊血清样品用离子对试剂为流动相直接引入高效液相色谱柱中，我们用新的方法取得了明显的效果，即在ODS柱中快速分离和量化百草枯和敌草快，我们报告此方法，一些案例在分析上是实际执行的。材料和方法试剂和材料 百草枯二氯化物(1,1-二甲基-4,4-联吡啶二氯化物)从桉木RdH Laborchemikalien有限联合公司（德国），敌草快二溴化物（1,1-二乙烯-2,2-双吡啶二溴水化物）从瓦科纯的化学制品(日本，大阪) 采购 ，乙基紫罗碱二溴化物(1,1-二乙基-4,4-联吡啶二溴化物)是来自奥尔德里奇化学联合公司(密尔沃基，WI, USA). 这些物质溶于蒸馏水，作为标
6、准试剂而使用。离子对试剂IPCC-MS3是从冰川科学公司(日本，东京)采购。瓦科纯的化学制品(日本，大阪)制备蒸馏水，用于高效液相色谱法，丙酮用于特级梯度，由同一公司制造，乙腈由Nacalai Tesque, 公司（日本，京都）生产的，是用于高效液相色谱法的特别准备的试剂。生物标本采集 回收率试验的标准人血清从Sigma化学公司(St.Louis, MO, USA)购买，被储存在-40c直到需要分析。血清样本被来自血液样本，这些血液样本是来自于四个吸收除草剂包含百草枯中毒病人，其目的在于自杀，他们在作者工作的紧急和危急护理中心中接受治疗。血清样本立即购买得到分析。样本和预处理每1000g /
7、ml水溶液中有10微升紫罗碱二溴化物，按内部标准，添加到1.0ml血清中，随后增加1.0ml丙酮。混合溶液在旋涡混合器彻底混合，在2500转离心分离机分离5 min。得到上清液后，把上清液通过孔径0.45m的过滤器(日本，东京, Ekicrodisc , Galman科学)滤过,取 10微升滤液注入HPLC中。高效液相色谱法条件样品注入到一个高效液相色谱仪器（SCL10A VP; 岛津；日本，京都）中，调整流动相流速为1.0ml/min, 流动相为0.1%(变量/变量)IPCC-MS3 /乙腈水溶液，比率为92/8, 在恒温40C的ODS柱(4.6mm150mm, 5m粒径；冰川科学公司，日本
8、，东京)下分离，使用二极管阵列检测器(SPD-M10A VP; 岛津；京都，日本)在UV290nm检测波下进行定量检测。用分析软件使用内标法实现定量 (Class VP; 岛津，京都，日本)。回收试验:血清溶液 (每1ml)含百草枯和敌草快，两者在10.0或1.0g/ml下取10l标准溶液稀释到980l人标准血清中。加入内标溶液，脱蛋白完成之后，血清混合物引入到高效液相色谱法柱中，用内标法测量百草枯和敌草快的含量。回收率是由通过减去“噪声”值得到人标准血清作为“空白”，即其中没有添加百草枯或敌草快，从病人血清样品中得到数值。然后通过计算这些之间差异的比率，为混合标准溶液的准备确定各自价值，这样
9、以致达到百草枯浓度为10.0g / ml, 敌草快浓度为1.0g / ml (每个浓度的n=5).结果与讨论高效液相色谱法条件图1代表一个色谱，显示在ODS-3色谱柱中引入10l的标准混合水溶液，因此百草枯，敌草快的浓度为1.0g/ ml, 而且以乙基紫罗碱二溴化物作为内标，浓度为10.0g/ ml. 图2展现了介绍了高效液相色谱法所产生的色谱图，(a) 注入10l的脱朊样品标准血浆上清和 (b) 脱朊标准血清样品中含1.0g/ ml的百草枯和敌草快，添加乙基紫罗碱二溴化物使浓缩到10.0g/ ml. 图1 标准混合溶液的高效液相色谱图，溶液中含1.0g/ ml的百草枯，敌草快和10.0g/
10、ml的乙基紫罗碱二溴化物（内标）图2 （a）为标准血清的高效液相色谱图，（b）为血清中添加1.0g/ ml的百草枯和敌草快，含10.0g/ ml的乙基紫罗碱二溴化物（内标）的高效液相色谱图在过去,钠庚烷磺酸盐9,16,21和辛烷磺酸盐9,10,12,13,15,18-20已经作为离子对试剂，用于高效液相色谱法测定血清中百草枯含量，但预处理是需申请这些方法。Fuke等其他人19通过蒸馏水稀释血清后直接到高效液相色谱法系统ODS柱中来分离和评估百草枯，敌草快，敌草快的代谢物，其流动相由5 %乙腈组成，包含磷酸(0.2m), 乙胺(0.1m), 钠辛烷磺酸盐(7.5m), 但在一个之后的文献中13，
11、他们重新评估他们的研究结果，说明固定相萃取仍有必要进行血液和组织的分析。我们用的流动相是IPCC-MS3, 其分子量为214.04, 沸点为120c, 它作为离子对试剂同阳离子-释放性能24,25而使用。在目前的研究中，用0.1%(v / v) IPCC-MS3水溶液和乙腈溶剂为流动相，我们可以在无萃取程序中，使血清成分中百草枯，敌草快取得良好分离。流动相的准备工作也非常简单，这是在临床场合的一个最大优势。百草枯、敌草快在UV290nm下测出校准曲线, 得到回归线 (y = 0.63x + 0.0053和y = 0.42x + 0.0067), 各物质注入量在1-100ng范围(相当于浓度为0
12、.1-10.0g / ml), 相关系数都为0.999. 当信噪比为5, 检出限为500pg（两者浓度都是0.05g /ml）.根据Proudfoot等 26和Hart等 27 的研究结果，为了评估病人在除草剂含百草枯中毒后是否能存活下来，百草枯血糖浓度的最低检出限浓度为0.1g / ml或更少。在目前的方法，由于样品通过预处理稀释大约50%, 上述情况是令人满意的。而且，再生性价值确定混合标准溶液包含百草枯，敌草快各1.0g /ml时，每个浓度分析如下：RSD分别为1.58%和0.60%(n = 5). 日间精密度重复性RSD分别为 3.40%和1.12% (n = 5). 因此,新开发的方
13、法不仅简单,但也表现出好的重现性。回收率 表1显示回收率结果是从加入百草枯、敌草快到人类标准血清后测得值计算出浓度分别为10.0g /ml和1.0g / ml.表1 血清标本中百草枯和敌草快的回收率在这程序，百草枯和敌草快的各自平均回收率在1.0g /ml时达到 87.5%和89.1%, 各自相对标准偏差是4.52%和3.85%. Kudo等9报道，添加百草枯，敌草快到血清使各自的浓度为1.0g /ml, 得到回收率为60%, P. Paixao等12也报告说，添加百草枯到血清，使浓度为1.0g / ml, 从而实现100.70%的回收率和4.36%的相对标准偏差。然而Fuke等13报道说，添
14、加百草枯，敌草快到血液中使各自浓度为1.0g /ml, 得到各自回收率为83.74.8%, 83.84.2%. 许多传统方法产生良好的回收率, 但目前技术, 展示回收率超过87%, RDS的重复性为4.52%, 一份分析需要不到30分钟就能完成的，按执行的速度来看明显优于传统方法，即使用固相萃取，因此这是一个很有用的方法的分析，尤其在临床紧急场合的情况下。应用：中毒案例的血清分析我们申请这个新方法分析服用除草剂含百草枯病人的血清。图3描述用高效液相色谱图分析血清，血清是吸入未知量的除草剂Priglox L, 其中包括5.0%的百草枯和7.0%的敌草快后经过4h收集的。用这种方法就可能实现百草枯
15、和敌草快的良好分离。图3 高效液相色谱分析血清，血清采自吸入除草剂Priglox L 4h后的病人，除草剂含5.0%的百草枯和7.0%的敌草快。在2003年之后，由于吸入含百草枯的除草剂而中毒的四个受害者，他们在我们的毒药单位接受治疗。他们的数据列在表2.表2 除草剂含百草枯中毒患者的百草枯血浆浓度观察血清百草枯浓度，符合Hart等27的生存概率曲线，预测病人1，,2和4的生存概率在50%和10%之间，而病人3的生存概率小于10%. 最终，没有一个病人存活。然而，案例2和3，毒物的特性没有明确，但快速分析显示，病患是因除草剂含百草枯而中毒的。案例3和4患者的,其摄入的毒药的量不清楚，但由于每个患者血清中百草枯的浓度可以快速确定，它是可以评估情况的严重程度。新的研究结果显示，有效的救生措施可以目前为依据简单、快速的分析方法发现针对百草枯中毒，诊断，严重性评估，该方法会成为保护生命与病人的生存的主要因素。参考文献略原文: