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1、XXX医院检验科微生物实验室深部真菌药物敏感试验标准操作规程编号：MYCH/ 版本：第1版 第1次修改页数：第 4 页 共 4 页深部真菌药物敏感试验标准操作规程1目的规范深部真菌药物敏感试验操作规程，确保药敏结果的准确。2适用范围本操作规程适用于念珠菌属和新型隐球菌。3选药原则根据CLSI M27A2的建议选择以下受试药物：5氟胞嘧啶（5- FC）、两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCA)、伊曲康唑(ITR)、伏立康唑(VRC)。5试验材料和仪器ATB FUNGUS 3无菌生理盐水ATB电子移液器。ATB F2培养基。6操作步骤6.1 打开一个0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液），采
2、集不超过4日的菌落，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液。用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT，此菌悬液必须在准备后立即使用。6.2 使用移液管转移20ul此悬浮液到一ATB F2培养基的安瓿中。6.3 用ATB电子移液管混匀ATB F2培养基，避免产生气泡，使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入135ul的ATB F2培养基，盖好试条盖子。6.4 把试条放人一个密封容器或是一个装有吸潮纸的GENbox型广口容器里，在有氧条件下35(+2)的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2小时），新型隐球菌要培养48小时(+6小时)。6.5 通过ATB仪
3、器自动判读结果或手工判读。7判断标准见ATB FUNGUS 3说明书。8注意事项8.1 在自动读取数据前，应擦拭试条的中间部分，去除可能存在的小滴液体，以便仪器辨认试条代码。 8.2 一个或两个生长对照杯状凹中的生长缺失时，测试无效，必须重复进行。8.3 在培养后，带有脱水的杯状凹的试条可能给予错误结果，必须重复测试。8.4 对于两性霉素B（AMB），在自动判读时，建议肉眼检查在杯状凹外围是否有个别菌落或生长。8.5 不同的操作环节之间间隔时间过长（从接种液的配制到试条的培养）可能会影响结果。8.6 只能使用纯培养物，混合的或是污染的培养物可能会影响结果。8.7 由于希木龙念珠菌（Candid
4、a haemulonii）的生长不稳定干扰MIC的判断，故不能使用ATB FUNGUS 3条对其做检测。8.8 在检测白色念珠菌，都柏林念珠菌和热带念珠菌时，氟康唑，伊曲康唑和伏立康唑可出现拖尾现象，导致MIC偏高，尤其在使用仪器判断结果的时候。针对这三个药建议肉眼判读其MIC值，特别是当伏立康唑结果耐药时（因为对伏立康唑耐药的非常少见）。9结果解释9.1 由于克柔念珠菌对氟康唑天然耐药，试验结果应被系统地解释为耐药(R)。9.2 由于两性霉素B,MIC2mgL，建议判断为耐药，（新型隐球菌通常的MIC为0.5和1 mg/L) 9.3 针对光滑念珠菌的检测，建议将其对氟康唑和（或）伊曲康唑敏感的结果改为中介(I),因为该菌对这两个药存在固有的敏感性低的现象。参考文献1 Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts. NCCLS M27 - A2, 20022 叶应妩，王毓三，申子瑜主编全国临床检验操作规程第三版，南京：东南大学出版社，2006 编写人签名复审人签名审批人签名生效日期姓 名：XXX编写日期:2011-05姓 名：XXX复审日期：2011-06姓 名：XXX批准日期：2011-062011-07