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1、多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS) 的病理特征,中枢神经系统脱髓鞘病变 多发性病灶，反复发作，慢性进行性过程 病变常侵犯脑室周围白质、视神经、脊髓传导束、脑干、小脑 临床表型复杂：良性型、亚临床无症状型、复发缓解型、慢性进展型,MS免疫学异常的基本特征,病变神经组织T细胞及单核巨噬细胞等炎性细胞浸润 神经胶质细胞增生 外周血及CNS中存在MBP(髓磷脂碱性蛋白)特异性T细胞的活化 外周血淋巴细胞中Th1/Th2比例异常，显示Th1优势 可分离出自身反应性致病性T细胞，即MBP特异性T细胞，体外培养可形成克隆化，并能转移致病性(动物实验)，属Th1细胞 用MBP免疫动物可复
2、制疾病模型 IL-2、IFN-、TNF、IL-12等Th1型细胞因子可加重病情，而 IL-4、IL-10等Th2型细胞因子能缓解病情 缓解的病人及模型动物体内能分离出Th2型的抑制性T细胞克隆,MS发病的微生物感染引起 交叉免疫和分子模拟假说,MS病人血清、脑脊液中存在高频率、高滴度的HHV-6抗体 MS脑组织中能通过PCR法扩增到HHV-6基因组DNA MS发病与HHV-6有关 HHV-6病毒蛋白可通过分子模拟机制激活MBP特异性自身反应性T细胞？ 80%MS患者脑组织MS斑中的少突神经胶质细胞或斑周围神经白质处含有HHV-6病毒蛋白101K或p41，而非MS者无一例阳性,美国贝勒医学院中国
3、学者 秦莹、藏敬伍教授夫妇,重组HHV-6B101K蛋白及其29KD免疫优势片段：具有触发复发缓解型MS(RR-MS)患者T细胞对HHV-6应答的免疫原性。MS病人识别HHV-6的T细胞以较高的前质频率出，HHV-6对T细胞 的致敏作用可能与RR-MS的临床发作有关 对从MS患者体内获得的HHV-6特异性T细胞株和从健康对照建株的T细胞进行比较，发现二者对HHV-6优势片段的反应性不同,MS患者 HHV-6 特异性T细胞的反应频率,MS与趋化因子的异常表达,CNS组织病灶中大量浸润CD4+T细胞 异常的T细胞迁徙是MS发病的重要因素 CD4+T细胞如何进入CNS？ 焦点：趋化因子及其受体的作用
4、,1、RANTES(C-C趋化因子家庭成员),具有很强的趋化T细胞和单核巨噬细胞的能力 优势趋化的T细胞主要是分泌IFN-的T细胞，而对其趋化作用不敏感的T细胞主要分泌IL-10(RANTES主要促进Th1/Th0细胞迁徙？) MS患者对外周T细胞表现较高的自发迁移能力，在RANTES或MIP-1刺激下呈剂量依赖性增高，所需浓度0.11ng/ml，与MS患者血浆和脑脊液中测得的浓度一致 免疫组化法证实RANTES在CNS主要由星形胶质细胞表达，活动性患者的表达水平高于正常人2倍，也高于稳定期患者 Th1型细胞因子及IL-1、TNF-在体外均可刺激星形胶质细胞RANTES表达增强 Glatira
5、mer acetate:抑制IL-1诱导RANTES表达，对MS起治疗作用 RANTESTh1之间的正反馈相互调节：互为促进，参与MS发病,2、CCR5(RANTES的主要受体),CCR5在外周血T细胞上主要表达于Th1细胞 免疫组化发现： CCR5主要表达于MS炎症损伤灶的T细胞、巨噬细胞、小胶质细胞 MS中枢病灶中T细胞CCR5表达水平显著高于外周血T细胞复发期 炎性病灶中含量明显升高，缓解期则降低 用抗CCR5单抗封闭，可部分抑制RANTES引起的T细胞迁移 有些MS患者CCR5基因两端缺失，只能编码中间一段的CCR5(无功能)，此类患者表现出较长的疾病缓解期，病灶中炎症细胞浸润减少 R
6、ANTESCCR5参与MS发病中的T细胞迁移，但还有其他趋化因子及其受体参与，如RANTES还可以通过CCR1、 CCR3迁移 CCR5高表达是病因，还是继发因素、炎症刺激的结果？ HHV-6的U12基因的ORF可编码RANTES的功能性受体 HHV-6感染或再活化使CCR5高表达，或病毒基因产物模拟CCR5功能？,3、MIP-1,MS患者CNS中MIP-1/-1含量明显高于正常对照，尤以MIP-1显著 主要分布于血管周围、脑实质的巨噬细胞和髓鞘降解产物 在动物模型EAE，用MIP-1基因与一段重复的免疫刺激序列重组后对EAE小鼠作基因免疫接种，使小鼠体内产生抗MIP-1抗体，可抑制MIP-1
7、的趋化作用，使模型小鼠发病变缓、症状变轻、对EAE的抵抗力增强 其他：MCP、MIG、IP-10、MMP、CXCR3、CCR1、CCR2等 趋化因子的级联放大反应？,粘附分子与MS：VCAM-1,慢性活动性MS病灶中VCAM-1/VLA-4水平升高，急性期则升高不明显 RR-MS、SP(二次发作)的外周血中，单核细胞和T细胞上VLA-4高于正常1.5倍，脑脊液中高出3倍 脑脊液中sVCAM-1浓度明显升高，复发期升高，缓解期回落，但血清浓度与对照一致，不随病情变化 VCAM-1/VLA-4在MS复发时表达增高，尤其在CNS 脑脊液中sVCAM-1可作为反映MS病情活动的指标,TNF-与sVCA
8、M-1,抗TNF-抗体治疗：加速疾病的活化 矛 TNF-基因缺失小鼠，EAE模型病情更严重 盾？ TNF-刺激人脑皮质内皮细胞(HCEC)： 可使其显著高表达VCAM-1,72小时达高峰 144小时，培养上清sVCAM-1显著增多，膜表面VCAM-1显著减少 sVCAM-1来源于膜表面的VCAM-1的脱落 sVCAM-1达100ng/ml可阻断VCAM-1的作用，阻止PBMCs与HCEC的粘附 炎症因素： TNF-分泌VCAM-1表达增高病情恶化 IFN- sVCAM-1大量形成病情缓解,IFN-对MS的治疗作用,与TNF-协调作用HCEC：sVCAM-1大量增加 IFN-单独刺激无效 sVC
9、AM-1直接注射MS病人：缓解病情，治疗作用,ICAM-1与MS,T细胞分泌的IFN-、TNF-可促使脑内皮质细胞、小胶质细胞、星形胶质细胞、巨噬细胞的ICAM-1的表达呈增高 在MS患者的脑脊液中，sICAM-1也升高，且也有抑制白细胞游走的功能,Fas-FasL介导的细胞凋亡与MS,在MS中，Fas-FasL系统在三方面起作用 1、外周T细胞凋亡 2、CNS T细胞凋亡 3、其它非T细胞凋亡,MS中Fas-FasL介导的T细胞凋亡,在MS动物模型EAE中： MBP特异的自身反应性T细胞转移给gld小鼠(FasL缺陷)：产生EAE迁徙型临床症状 在Fas和FasL都缺乏的小鼠：急性期较少看到
10、T细胞凋亡 急性期80%CD4+T细胞和50%巨噬细胞表达Fas和FasL，同时有20%的CD4+T细胞凋亡；一些星形胶质细胞和神经元也表达Fas、FasL，但不凋亡 Fas缺乏的EAE易感小鼠，经抗原诱导EAE后，CNS中有大量CD4+T细胞浸润，但不凋亡，出现严重的神经麻痹症状，死亡率高。 EAE的临床类型与转归与Fas-FasL介导的T细胞凋亡有关：缺乏Fas系统的作用，自身反应性T细胞凋亡不良，可导致CNS损伤,在MS病人体内,将病人脑脊液中大量的MBP特异的T细胞分离出来，体外培养，用FasL抗体阻断MBP-T的凋亡，发现MBP-T明显增多，提示MS病人体内的MBP-T对FasL介导
11、的凋亡非常敏感，然而病人体内凋亡不良 不凋亡的MBP-T能选择性识别MBP的特定肽段，并呈现Th2细胞因子分泌格局，提示MBP-T细胞发生了由Th1Th2的转变 MS病人外周血中多克隆T细胞凋亡不足，sFAS水平增高，抑制了多克隆T细胞的凋亡,Fas-FasL介导非T细胞的凋亡,MS病人脑损伤部位Fas、FasL表达量比正常部位高 Fas-FasL介导了脑实质细胞的损伤？ 小胶质细胞和T细胞表达FasL，少突胶质细胞高表达Fas 小胶质细胞和T细胞可引起MS中少突胶质细胞损伤 体外实验证实：少突胶质细胞对FasL诱导的凋亡敏感 巨噬细胞死亡，也表达Fas 巨噬细胞的死亡也是由Fas-FasL介
12、导,Dowling P et al. 1997. J Neurol sci,免疫组化定位MS Fas-FasL表达细胞及MS损伤部分凋亡，发现： MS病人脑白质损伤部位多种细胞(主要是小胶质细胞，也包括巨噬细胞)表达FasL，同时这些细胞也高表达Fas 形态学和DNA梯度电泳证实： MS损伤部位的细胞凋亡是导致少突胶质细胞 死亡的主要原因,Fas-FasL介导的细胞凋亡对MS的意义,A double-edged sword: 介导了CNS局部病灶中的组织损伤 参与局部与外周淋巴细胞的清除及极化格局的转换 治疗原则： 促进自身反应性T细胞凋亡，诱导向Th2转换 保护CNS中局部组织细胞，免受Fa
13、s-FasL介导的凋亡,树突状细胞(DCs)在MS中的作用, DCs在MS中的致病作用： 促进T细胞活化、增殖和分化为Th1细胞 释放促炎症因子，是致炎症性细胞因子的重要来源 激活自身反应性T细胞 DCs在MS中的促进恢复和病情缓解的作用 诱导活化的致病性自身反应性T细胞凋亡、清除 诱导自身反应性T细胞耐受性形成,外周DCs在MS中的致病作用,MS患者外周血中分泌IFN-、TNF-和IL-6的循环性DCs含量增加，提示DCs是致炎症性细胞因子的重要来源，在MS发病中起到促进作用 病毒、细菌感染非特异性免疫途径：激活DCs俘获交叉反应性和/或隐蔽自身抗原迁移到淋巴组织激活自身反应性T细胞此T细胞
14、获得穿越血脑屏障的能力进入CNS：攻击宿主细胞，引起炎症，造成组织损伤,中枢DCs在MS中的作用,CNS中有可表达高水平炎症因子IFN-、TNF-、IL-12的DCs脑胶质细胞可在GM-CSF培养系统中产生DCs样细胞 DCs不但在外周起作用，还可以在CNS中募集并成熟，在局部起到刺激和维持自身免疫的作用，从而参与致病过程 CNS中DCs的来源？起源于脑胶质细胞 ？外周迁移到CNS？,DCs促进MS和EAE恢复的作用,EAE恢复期的DCs：产生高水平NO，NO诱导DCs本身和自身反应性T细胞凋亡 由DCs驱动、NO介导的负反馈环路促进了EAE的缓解 MS病灶组织中CD8+DCs表达FasL，诱
15、导表达Fas的CD4+T细胞、巨噬细胞、小胶质细胞凋亡，消除或限制T细胞对其递呈的抗原反应 MS恢复期常常伴有炎性浸润细胞的缺失和凋亡,多发性硬化中补体的作用,MS：机体对自身CNS内髓鞘脂成分及其产生的细胞少突胶质细胞发生免疫应答 靶细胞：少突胶质细胞 靶抗原：MBP、MOG、PLP、CNP和MAG及少突胶质细胞的特异性蛋白 病人脑脊液中可检出补体攻膜复合物C56789：除T细胞、细胞因子之外，Ig和补体也参与其免疫病理 髓鞘特异性蛋白MOG：能结合C1q，其结合位点在IgG位点附近 MOG是CNS内活化补体的特异蛋白？ 病人少突胶质细胞上表达的CD59减少，但星形胶质细胞仍能表达大量CD5
16、9 这是少突胶质细胞易于受损而星形胶质细胞不易受损的原因？,MS的免疫干预防治,1、IFN-的应用： IFN-1b或IFN-1a，皮下注射 用于复发-缓解型病人，早期应用效果较好 明显降低疾病恶化率，减慢病残进展，阻止疾病复发 机理： 协同TNF-促进sVCAM-1大量增加，抑制炎性T细胞浸润 直接抑制DCs分泌IL-12及T细胞分泌IFN-、IL-2，促进单核细胞产生IL-10，诱导DC2Th2分化过程，抑制Th1,2、T细胞疫苗/TCR疫苗/VTCR疫苗的应用 以致病性T细胞或其TCR的V独特型决定簇刺激抗独 特型T细胞克隆的活化，从而抑制致病性T细胞的活化、 增殖和致病 已用于临床试验
17、可激发Th2细胞活化,3、抗炎治疗和免疫抑制治疗 皮质类固醇激素：抗炎 诱导Th1凋亡、Th2增殖活化 沙丁胺醇：抑制DCs产生IL-12 免疫抑制剂：氨甲喋呤，硫唑嘌呤，环孢素A,4、口服MBP人工肽段诱导免疫耐受 髓磷脂抗原的口服诱导耐受处于前期临床研究阶段 Ishigami T et al. 1998. Eur J Immunol MBP+佛氏完全佐剂 EAE模型 可溶性MBP 腹腔注射 CNS： V8.2+T细胞高表达Fas、FasL T细胞凋亡率增高，症状大大减轻,5、发展对Fas-FasL系统的药物 Liedtke W, et al. 1998. Ann Neurol 基质金属蛋白酶能抑制FasL转换酶，用来治疗EAE，发现脱髓鞘和胶质细胞凋亡都减轻，细胞因子的分泌格局也由Th1向Th2转换 Wendling U,et al. 2000. J Neuroimmunol Bisindolylmaleimide治疗EAE疗效显著 对MS病人自身反应性T细胞体外试验：增强caspase活性,谢谢你的阅读,知识就是财富 丰富你的人生,