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1、维生素 C对心肌缺血-再灌注的保护作用实验目的1 学会建立心肌缺血-再灌注动物模型2 掌握维生素C对心肌缺血-再灌注保护作用的机制3 比较维生素C在心肌缺血-再灌注不同时期时保护作用的效果实验原理与设计原理：1.有时缺血后再灌注，不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。这种在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象称为心肌缺血-再灌注损伤。2自由基的作用是其形成的重要机理之一。如何抑制自由基的作用及生成是研究各防治缺血-再灌注损伤作用药物的重点。缺血-再灌注时氧自由基生成增多，表现为黄嘌呤氧化酶形成增多、中性粒细胞的呼吸爆发、线粒体功能受损
2、、儿茶酚胺自身氧化增加。由于自由基有极为活泼的反应性，所以它们能和各种细胞成分（膜磷脂、蛋白、核酸）发生反应，使多价不饱和脂肪酸的过氧化，损伤生物膜以及引起蛋白质和DNA分子结构的变化。自由基反应既可经自由基中间代谢产物不断向前发展，又可由细胞损伤而终止。自由基反应的扩展可以是无限的，即不断扩展生成新的自由基，形成连锁反应；但又可为各种自由基清除剂所终止。3维生素C是正常机体自由基清除剂，其抗氧化性有直接抗自由基作用，通过还原作用消除有害氧自由基的毒性。设计：建立心肌缺血-再灌注动物模型，分别给予不给药，在缺血前、缺血期、血灌期分别给药的不同处理方法，以探讨维生素C对心肌的保护作用。实验方法与
3、步骤（写明器材及试剂）实验动物：家兔实验器材及试剂：RM-6240B生物信号采集处理系统，哺乳类动物手术器械，压力换能器，针形电极，玻璃分针，注射器，兔手术台，兔绳，丝线，20%乌拉坦溶液，维生素C水溶液，生理盐水方法与步骤：1取家兔4只，随机分为四组，分别标记为不给药组、缺血前给药组、缺血期给药组、血灌期给药组，称重，自耳缘静脉以20%乌拉坦溶液（5ml/kg）麻醉，然后固定于兔台上，颈部术野备皮。2插针形电极于家兔四肢皮下，将电极另一端连接至RM-6240B生物信号采集处理系统。 3在冠状动脉左室支主干根部穿线备用，打结作为局部缺血，松结作为复灌。4各组先稳定5min，再局部缺血20min
4、，复灌30min，其余按下表处理方法进行实验。组别处理方法缺血前给药组于缺血前5min静注维生素C（0.2g/kg）缺血期给药组于缺血10min后静注等量维生素C血灌期给药组于复灌10min后静注等量维生素C不给药组静注等量生理盐水5记录各项处理时左室最大收缩压LVSPmax，左室内压上升及下降最大速度dp/dtmax。分析讨论以得出结论。实验结果左室收缩末压、左室内压上升及下降最大速度（LVSPmax，dp/dtmax）组别时期缺血前给药组缺血期给药组血灌期给药组不给药组正常缺血前5min缺血10min后缺血20min后复灌10min后复灌20min后复灌30min后结论、分析与讨论结论：维
5、生素C对缺血-再灌注有保护作用，且缺血前给药的效果优于其它时间给药。分析与讨论：1. 缺血前给药的效果较优，推测这与药物到达作用部位需一定时间，药物在局部缺血区分布较慢有关。而且在复灌期由于多种损伤因子的累积，单纯的在一定程度上清除自由基对心肌起不到显著保护作用。2. 由于实验例数较少，受个体差异影响较大，不具有确切的统计学意义，欲得到确切的结果还需加大样本容量进一步实验研究。3. 家兔耐受性较其他实验动物要好些，做冠脉结扎相对容易方便，可不用呼吸机，且存活时间也较长。结扎冠脉应为根部的结扎效果较好，结扎后可看到结扎下面的心肌颜色变紫。4. 腺嘌呤氧化酶途径是再灌注时产生氧自由基的主要来源，已证实犬、大鼠心肌内此酶含量高，但人、兔心肌中含量很低甚至测不到，而清除自由基为本试验药物的保护机制，因此选择家兔为模型较为理想。5. dp/dt与LVSP都是用于描述左室收缩功能的指标，当LVSP在较小范围内变动时其微分dp/dt的变化显著，而其特异性却较LVSP低，故在本实验中将二者结合应用，可以更好地表现结果的客观性。