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1、穿心莲内酯衍生物对花生四烯酸致炎抑制作用的研究 ， （ ） 穿心 内莲酯 衍物生花生四对酸致炎烯抑制 用的作 研一 一 究一 一 一 一 一 一 一 一一 一 一 一一一 一 一一 一一 一一 一一一 一一 一一 一一 一 一 一一 一 一一 一 一 一一一 一 一一 一一 一 一 一一 一 一 一 一一 一 一 一 一 一一 一一 一一 一 一 一陈， 张芳 波 中（人 国解 放军 民 第 医药剂科 院，锦 】 、 ）摘要 目 ：的 研究 穿莲心 酯衍 内生对花物 生四酸烯 炎抑致 作制 。方 法 用：通 花 过生 烯 酸四（ ）致 小耳肿鼠胀 实验 研究穿心 莲 酯衍内 物不 生剂量 （同
2、 ， 和 ）对 耳 肿胀 的 抑制 作用， 在 胞水细 平 研 穿究心 莲 酯衍内 物 生 （ ， 和 ）对环 氧 酶 （ 一 ）和 一 氧酶（脂 一 ） 表 达 和前 列素腺， （ ） 和三白 烯 （ 的产）生 影的 响。 结 果 穿：心 内莲衍 酯生 （ 物 和 能）够抑制花 生 烯酸四 致 小鼠耳肿胀 （ ）、 耳 片中前 列 素腺 ： （ 和 白）烯三 （ ）产 生（的 ） 。在 细胞 水平 穿莲 心内衍 酯生物（ 和 ） 能够抑制 环 氧 一酶 （ 和） 脂氧 酶 （ ）表达（ ） 和 列前 腺素 ： （ ） 白三和烯 （ ） 的产 （生 。）论结： 穿 心 莲内 衍 酯生对花 物
3、生四烯酸 炎有致抑制作 用 。 关 词 键 心穿莲 内 酯衍生 物 ； 花 生四酸烯 前；列 素 腺 ：； 三烯 白； 环氧 酶一 ； 一 氧脂酶 中图类 分号 文献 标志 码 文编章号 （ ） ， （ ， ， ， ） ： ： ， （ ， ） ， （ ， ） 一 一 ： （ ） （ ） （ ） ， （ ） 一 （ ） ， （尸 ） ： ； ； ； ； 一 ； 炎 是机 体对 症刺 激 一 的 防种 御反 应 ， 表现 红为 基 金 项目 国 自家 然 科学基金 （ ）肿 热痛 ，炎在 反症 过应 程 不中 饱脂 肪 酸花 生四 酸烯代 谢 前物列腺 素 （ ） 和 白三烯 （ ） 是 参 与炎
4、 症 反应的 要 重物质 。 环氧 酶 （ 一）和 脂一酶 （ 氧 一 ） 分别 是 和 产 生 的限 速酶 ，抑制 一 和 的表达 ，能 够 减轻 炎症 反应。穿 心莲 酯内衍 生 物 是在 琥穿 宁的分 子 羟 基 者简作介 芳 ， 陈， 女主药师 管 主 要 ， 从事 免 疫理药研 。 联究 系电 话： ， ： 。 一 通作者讯 张波 ， 男 ，管主药师， 博士， 主 从 事 要 瘤肿 药理研 究联系。电 话： ， ： 。 中 新 药国杂 志 年第 卷第 期 ， （ ） 单 位点 连 接 个 对 分相子 量质为 的 乙 二聚，醇 度大纯 于 ， 对 分子相质 量 为 ， 该 化合物经聚乙
5、 醇 修二后 饰极 溶于易 水 ， 化 理 性质稳定 ， 暂名 为 （ 图见 ） 。 以往 研 究 表明 穿 心莲 内 具 有 抗酯 炎“ 、 抗 癌 。 肝 保 护和 作 用。 此类化 合 物 抗炎 作 是用 通过 角叉 菜 胶和 巴豆 油 建立 的 炎 症模 型 进 行 研 究 ，作者 查 找 资料 少有报 道过通花生 四 酸烯诱 导进行抗炎 研 ，究 本研 液、 氨 匹林 赖给药 为 ， 高 、 中、低 给 分别药 为 ， 和 。， 药 物均 解溶 在 溶液中， ， 连 续给药 。 花 生 四 酸烯 致小 鼠 肿耳胀 取小鼠 末 次给 药 后于 小 鼠 右耳 廓 外内侧 匀均涂抹 花 四
6、生烯 酸 （耳 每 ， ， 溶解 在丙 中酮 ） ，同 时 在小 鼠左 耳 内 外两 侧 均 匀涂等抹体 积的溶 ，媒 后处死 鼠延耳 廓基 小线 剪下双耳， 取 左 右 耳 同 部 位一的 耳片 分 ，别称 重以 自 的身究 为 通 过花 生烯四酸 路 研通究 穿 心 内酯 衍莲 生物 抗炎 作用 左右。耳重 量 之差表 示肿 胀 。肿 胀度 度身 自耳右片 重量 自一身左 片耳重 量。 鼠耳 片小 中 和 ：的 量检 测 将含剪下来 的耳 片放 入 液 氮中冷 冻 后加 入 和 研 成磨 浆 匀液 ， 离 心 ，上取 清用 和 酶 联 免 疫 试 剂盒 测其 织匀 浆液组的含 量 。 对
7、和 产生 的 影 响 细 胞 接种于 孔板 中 ， 接种 密度为 。 个 ， 与 和 共 孵 ，育 给 终浓药度 别分 为 ， 和 一， 给图 分 结子构式 材料 与 方 法 药 与品试 剂穿心 莲酯 衍内 生 （物纯 大度于 ，批 ：号 ， ， 军 事 医 科学学 院） ； 生花 四烯酸 （ 美药 终浓度 为 ， 孵育 后取 清 上， 其测细 胞上 清 液 ， 含的 量 ， 刮 取 孔 板中 全 细 胞 部测其细胞 蛋 白含总 量， 用 上 清液 ：含 的 量与 细 胞 蛋总白 含量 相的 比 。小 鼠原代 核单 巨噬细 胞种接于 孑 板与中 和花生 烯四酸 共孵 育， 给药终 浓度 别分
8、为 ， 和 一，花生 四 酸烯 给 药浓终度 为 孵，育 后 取上清 ， 测 胞上细清 液 的含 量 。取孔 板 刮中全部 细胞国 公）司； 脂 多 （ 糖国 美 公 司） ；列前腺素 ， 和白 三烯 酶 联 免 疫试 剂 盒 （美 国 ， 公 ）司 环；氧 酶一 和 脂 氧 酶抗 （一 英 国 公司 ；）二 抗和 中 （国中 杉 金 桥 公 司） ； 胞细培 液 （ 养 公 司）； 小 牛 血 清（ 公 司 ）。 实 动物验与 细胞测 其胞 细蛋总白含 ， 用上量清液 的含 量与细 胞总 蛋的白含 相 比量 。 对 和 表达 的响影 细 接 胞种于 的平 皿 ，中接种 密 为 度 个 ， 与
9、 和 共 孵 育 ， 药终给浓度 别 分 为 ， 和 一 ， 给 药 浓终度 为 ， 孵 育 后 刮去 平皿细 胞裂 细解 提胞 蛋白 检测 一 的 表达 情况 。小 鼠 原代单 核 巨 噬 细胞 接种于 的 平 小 ，鼠 周龄 ， 体重 ， 广东 医省学实验动 物 心提中 供 实， 动物许验可 证 号： （ ） 粤 饲 。 养 环 为 境 级， 度温为 湿， 度 ，： ： 光照 每 。笼 小 鼠只 养 。群巨 噬 细 胞 细胞 购 买协 于 医科和 大学 胞细 。库 鼠原小代 单核巨 细胞本噬实 验分室离所 得 。 实 验 分 组皿中与 和 生 花烯 四酸 共 孵 ，育 给药终度 分别浓 为
10、 ， 和 ， 花生 四烯 酸 给 药终浓 度 为 ， 孵育 后 刮去平皿 胞细 裂 细解胞提 白蛋测 检 一 的 达情表 况 鼠随机 小分 成 组 ，每组 只 ， 分别 模 为型 、 组 赖 氨 匹林 阳 性 物 药 、 组 高 、 、中低 剂量 ， 小组 腹 腔鼠注 射 药 给 ， 模型 给等组 体积 的 溶 国中 药新杂 志 年 卷 第第 期 ， （） 数 据 理处影 与响 模型组 比没 较有显著性 差 。 异 实数验据均 以 元 表示 ， 用 进 统行计检学 验，组 间 较 比 视差异为统计有学意 。义 结果 曲 对小 鼠 耳 肿胀 的 影 响 花生四 烯酸致 小鼠肿耳 胀试验 中， 赖
11、氨 匹 林 腹注腔给药后射小鼠耳肿 度为 （ 胀 ） （ ） ； 鼠腹腔 小注 给药 射 高、 中、低 个剂量 （ ， 和 ）后 小 懈毯 鼠耳 肿 胀 度 分 别 （为 ） ， （ ） （ ）和 （ ） （ ）； 正常组型模组塑！ 氨 赖匹林 。 剂低 量 （ 组 ） 对 其 肿胀 没 有 抑制 作 用 见 图（） 。 与正 组相常 ， 比 ： ； 与模型 组相 比 ， ： ： ： 图 对小 鼠耳 片前列腺 素 的抑 制 作 用 （ ， ） 廿 拦 舞廿型组模 赖氨匹林 ， 。 模与组相型比 ， ： ， ： 图 对 花 生四 烯致酸小 鼠耳 肿 胀的 正组常 型模组 ！ 赖匹林氨 。 抑制
12、作 用（ ， 元 ）与正 组常相 比 ， ： ； 与 型模组 相 ：比 ： ， 小对 耳鼠 片 中 和 含量 的响影 ： 次末 给药后 取耳 片 组织 匀 浆 ， 其测匀 浆 中 的液 和 含 量 ， 实验 结 果 提示， 氨赖 林 匹 腹腔注 射给 药小 鼠耳 片 后中 的 含量为（ ） （ ） ， 的 量含为（ ） （ ）；小 鼠 腹图 对小 耳 鼠 片 抑的 作 用 制 （ ，面 ） 对细 胞：和 生产 影的 响 在 细 胞上 ， 刺 后 激 ，含的量为（ ） 与 常组正 较比有 显著性 差 （异 ） 。 给 不 同 浓予 度 腔 注射给 药 高、 中、 低个 剂 （ 量 ， 和 ） 后
13、 小鼠耳 片 中 别分 为（ ） ， （ 土 ） （ ） 和 （ ） （ ） 见（图 ） ， 的含 （量 ， 和 。 ） 后 的， 量 分含 为别（ ） ， （ ）（ ） 和（ ） （ ） ， 剂低 组量（ ） 模与 型 组较比没分另 为 （ ） ， （ ） （ ） ，（ ） （ ）（ 图见 ） ； 有著 显差 异 （ 性见图 ）。在 小鼠 原代 细胞的上， 花生 四烯酸刺 激 后 的 含量 为 （ ） 剂量 低 组 （ ） 对 和 的 中 国新 药杂 志 年 第 卷第 期 ， （ ） 与正 组 常较比有 显 性 著差 异 （ ） 。 给予不 同 浓度 （ ， 和 ） 后 山 口 后 一 的表
14、 达 量 正与 组 比较常有 显 著性 差 异 口 【 （ 。 与） 不同 浓度 （ ， 和 的 含量分别 （ 为 ） ， （ ） ） 刺 激共 后 的表 达量 与 激刺 瑚 瑚 娜 鲫 （ ）和（ ） 。 （ 组 比 中较高剂量组 有 显 著差 异 性 （ ） ，低 剂 量 没 差有 。异 果结提 示 在 小 原鼠 细代胞 上 能 抑够 制 刺激 下的 的表达 见，图 。 一 一 一 ，） 低 量剂 组（ ） 与 模型比组较 没有 著显性 异 差 （见图 ） 。 嘲 豳幽 勰越正组常对照 组！ ：！ ！ 趔 趟正与组相常 比 ， ： ； 模与型相 比组 ， ： 图 对 细 胞 ： 一 。 ，
15、 一 产生抑 制用作（ ， 元 ） 一一 一 与正常组相 ， 比： ； 与型组模 比相， ： 图 细 胞 对 表达的 影响 （ 面， ） 一一 一 正常组对组照 。 与常正组相比， ： ； 与模型相组比， ： 图 小 鼠原代对 细胞 产 生抑 制作用 （ ， ） 喜 翌 对细 胞培 养 和 表达的 影响 在 细胞上 ， 刺后激 一的表 达与量 常正组 较比 显有性著差 异（ ）。 与不 同 度浓 （ ， 和 共）刺 激后 的表 量 达与 刺激 组 比较中 高 剂量罨 基 一 一一 十 组 有 显性著 差异 （ ） ，低 剂量 有 没 异 差结。果提 示 能抑够 制 刺激下 的 一的 表， 见达
16、 图 。在小鼠 原的代细 胞上 ，花 生四 烯酸 激刺与正 常组 相 比 ，： ； 与模 型 相组比 ， ： 图小 鼠原 细胞 代上 对 表达 的影 响 （， 面 ） 厂中国新药杂 志 年 第 第卷 期 ， （ ） 讨论 ， ， 花生四烯 酸 是 环 氧 酶（ ） 脂氧和酶 （ ） 的重 底物要， 是 产 生前列 腺 素 ：和 白 三烯 前的 ， ， （） ： ， 体物 质。 花生 四烯 酸 的 代谢产 物 能 够使 血管舒 张 、 血管 通透性 加增、 组 织水 肿 而， 且可以 加 强单 核细 胞 和 性中 细胞 粒的趋 作化用 、激刺 淋巴细 增 胞 殖和细 胞 因子 的放 。释花生 烯四 是参 与酸炎 症反应 的重 要 质物 ， 和 是生花四 烯 酸谢 的 代速限 酶 ，抑制 环 氧 酶和脂 氧 酶 的表 达 ，时 也 抑同 制了 和 ， ， （ ）： ， ， ， ， ， ， （ ） ： ， ， ， 一 产的生 ， 进 而 制抑 症反 炎 应。穿 莲心 酯内 生衍 物 是 以 穿 宁琥为 核母 经 位单 点修 饰而得 ，成合 的化后物 合水溶 大 性增加大， 以往 研究 表 明这 化合 类抗 物炎 作很用少通 花过生 烯四酸 通路研究 其抗 作 用炎， 花 生 四 酸烯致 小鼠 耳 肿 是胀研究 生花四 烯酸 谢代物 致 通炎路 经的 动物典 模型 。