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1、2013-2014分子生物学复习资料一、中心法则DNA* RNA ) 卜蛋白质二、DNA 制(一)DNA复制的特点1、半保留复制DNAM制时分别以两条亲代链作为模板链通过酶催化各形成一条子代链，亲代链分开处即子代链合成处成为复制叉。2、半不连续复制DNAS代链5到3方向的复制时，是以小片段的形式从5到3不连续的复 制形成冈崎片段，再经DNA接酶连接形成一条链。3、RNA勺弓I导RNA勺引导保证DNAS制的高忠实性。(二)DNA复制所需要的酶1、原核中：(1) DNAS旋酶：利用ATPZK解的能量解开双链DNA(2) DN顺转酶(II型拓扑异构酶)：引入负超螺旋从而释放正超螺旋。(3) DNAR
2、合酶田：延伸前导链和后随链中的引物。(4) DNAR合酶I :切除引物。(5) DNA1接酶：连接冈崎片段形成DN A子代链。2、真核中：(1) DNAIK合酶a :前导链和后随链的每个片段都是利用其引发酶活性从RNA引物开始。(2 ) DNA合酶6 :在前导链上替代前一种酶继续延伸。(3 ) DNAIK合酶e :在后随链上完成 DNA勺复制。(三)DNA聚合酶1、真核中：真核细胞有5种DNAIK合酶，分别为DNA合酶a (定位于胞核， 参与复制引发具5 3外切酶活性)，B (定位于核内，参与修复，具 5 3外切 酶活性）,Y （定位于线粒体，参与线粒体复制具53和3 5外切活性），6 （定
3、位核，参与复制，具有35和5 3外切活性）， （定位于核，参与损伤修复， 具有3 5和5- 3外切活性）。2、原核中：原核细胞有3种DN咪合酶，都与DNA的延长有关。DN咪合酶I 是单链多肽，可催化单链或双链 DNA的延长；DN咪合酶II则与低分子脱氧核 甘酸链的延长有关；DN咪合酶III在细胞中存在的数目不多，是促进 DNAS延 长的主要酶。功能pol Ipol npol in聚合作用5一3十十十外切酶活性3一 5十十十内切酶活性5一3十一十焦磷酸解和焦磷酸交换作用十一十完整的DNAK链一一一带引物的长单链DNA十一一带缺口的双链DNA十一一双链而有间障的DNA十十十分子量（k d ）109
4、120140（四）DNA勺损伤与修复1、诱变（1）突变1）点突变：一个单一碱基的改变转换：喋吟与喋吟之间或是喀呢与喀呢之间颠换：喋吟与喀噬之间或是喀呢与喋吟之间2）沉默突变：突变发生在DN A的非编码区、非调节区或密码子的第 三个碱基位置，不影响掺进蛋白质中的氨基酸3）错义突变：突变改变了基因产物的一个氨基酸4）移码突变：插入或缺失涉及一个或多个碱基的增加或丢失（2）物理诱变：高能离子化辐射，如X射线、丫射线、紫外线（嚅呢二聚体是 常见的一种产物）(3)化学诱变：碱基类似物(直接诱变)、亚硝酸、烷化剂等2、损伤(1 )氧化性损伤(2)烷基化(如MMS、ENU)(3 )聚化加合物3、修复(1)光
5、复活：在可见光下，DN A光解酶可将环丁烷喀呢二聚体再分解为单体(2 )烷基转移酶(3)切除修复：核甘酸切除修复和碱基切除修复(4)错配修复(5 )遗传性修复(五)DNA的克隆1、 DNA的制备(1 )质粒DNA勺制备碱裂解法：从染色体DNA及大部分其他细胞成分中纯化酚抽提法：采用酚或酚氯仿混合物进行抽提乙醇沉淀：氯化铯梯度法：(2)噬菌体DNA勺制备2、载体( 1)质粒载体1) 插入失活原理： pBR322 及其衍生物包含两个抗生素抗性基因，ampr和 tet r ，当目的基因插入其中一个时，会导致该基因失活。2)蓝白斑筛选：在质粒中含有LacZ基因(编码B -半乳糖甘酶，受Lac 启动子的
6、调控)的a -肽的序列，当无外源DNAt段插入时，质粒表 达a-肽，它与宿主菌的Lac ZM15基因的产物互补，产生有活性的 B-半乳糖甘酶，在含有指示剂X-gal和诱导剂IPTG存在的情况下， 菌落呈蓝色(质粒自身环化) ；外源基因插入后，肽基因阅读框架被破坏，细菌内无半乳糖苷酶活性存在，菌落呈白色(阳性克隆) 。（2）噬菌体载体噬菌体颗粒将其线性DNAtt入细胞，进而DNA1成环状，其后该DN徽复制组装 成噬菌体颗粒，经裂解细胞释放到胞外，造成细胞死亡，或通过特异位点将其 DN爆合到宿主基因组，而获得长期插入。（3）其他载体黏粒载体：利用C噬菌体cos位点YAC酵母人工染色体BAC细菌人工
7、染色体（六）基因文库1、基因组文库（DNAfB自基因组DNAln（1 -p）N 二文库的大小1n（1 f）, p代表给定概率，f是插入片段大小占总基因大小的比例。2、cDNAt库（DN林自群体 mRNA勺拷贝）cDNA二条链的合成：a）自身引物合成法：cDNA/mRN杂合体用碱处理后获得单链 cDNA随即在3 端形成一个短小的发夹结构，次发夹结构可以作为引物合成第二条链。最后 用SI核酸酶处理除去末端发夹结构，但 5端部分序列会因此而失去。b）置换合成法：RNaseHft mRNAL产生缺口（内切作用）残存的RNA可以作 为合成第二条链的引物，最后用T4DNA连接酶连接修复缺口。通过这种 方法
8、可以获得近乎全长的dscDNAc）引导合成法：NaoH降解杂交链中的mRNA然后用末端转移酶在cDNA3/端 加聚C尾巴，以Oligo （d0为引物合成第二条链，这种方法可获得全长的 dscDNA（七）DNA测序1、双脱氧链终止法测序的原理DNAIK合酶能利用单链DNA为模板，离体合成其互补链，当反应液中2 /, 3 /双脱氧核甘三磷酸（ddNTP）,它可以像2 / 脱氧核甘三磷酸（dNT P）那样直接掺入新合成的DNA链中，但因d dNTP 3/端不具OH,所以寡核甘酸链不再继续延长，即DNA链合成终止。在4个反应管中同时加入同 一种合成DNA的被标记的引物和待测序的DNA模板、DNA聚合酶
9、1、 4种脱氧核甘三磷酸（dATP、dGTP、dTTP、dCTP） ,并在这4个管 中分别加入4种不同的2 / , 3/双脱氧核甘三磷酸。反应将产生不同长度的 DNAt段混合物，他们都带有ddNTP的3末端。将这些混合物进行变性凝胶电 泳分离，就可以获得一系列不同长度的 DNAt带。再通过放射自显影术，检测单 链DNAt段的放射性带。最后可以在放射性X光底片上，直接读出DNA序列。2、Maxam Gi Ibcrt 化学降解法：首先放射性标记待测序DNA的一端， 并将其分为4份，分别用不同的化，学试 剂进行4种裂解反应，每种反应之断裂某一种或某一类碱基， 结果可产生4种起 始于放射性标记末端的不
10、同长度的标记分子， 经变性P A G E凝胶电泳分离各组 不同大小长的D N A片段，并进行放射自显影，可根据X光片上所显现的相应普 带，读出DNA的核甘酸序列。3、DNA的自动测序：基于双脱氧链终止法测序原理,也是通过4个酶学反应利用d dNTP s产生一 系列一端固定、另一端终止于不同A、T、C、G碱基位点的DNAt段。三、RNA专录乳糖操纵子1、乳糖操纵子的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z、 Y、 A 三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、 透酶和半乳糖苷乙酰转移酶， 此外还有一个操纵序列O，一个启动子P 和一个调节基因I 。2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I 基因编码的阻遏蛋白结合于操
11、纵序列。处，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有 乳糖存在时， 乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构， 不能结合于操纵序列， 乳 糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。 所以， 乳糖操纵子的这种调控 机制为可诱导的负调控。3、CAP（ c AMP受体蛋白）的正Tt调节：在启动子上游有CA图合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时， cAMP 浓度升高，与CAP吉合，使CAP生变构，CAP吉合于乳糖操纵子启动序列 附近的CA图合位点，激活RNAR合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白 结合于操纵子后促进结构基因的转录， 对乳糖操纵子实行正调控， 加速合成 分解
12、乳糖的三种酶。4、协调调节：乳糖操纵子中的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与 CAP的正 调控两种机制，互相协调、互相制约。四、蛋白质翻译顺式调控元件与反式作用因子关系：顺式作用元件：真核生物中没有操纵子，调节基因中调控序列有许多能结合动中调控蛋白的元件叫顺式作用元件， 它们往往与结构基因保持一定的距离。反式作用因子：指和顺式作用元件结合的可扩散性蛋白，包括基础因子，上游因子，诱导因子。摆动假说解释遗传密码简并性的假说，克里克( F.H.C.Crick )于 1966年提出。对氨基酸专一的密码子的头两个碱基与相应转移RNAh反密码子的第2个和第3个碱基互补配对，而密码子的第 3 个碱基( 3 端)
13、与反密码子5 端碱基的配对专一性相对较差，被称为摆动配对( wobble pairing ) 。在反密码子的 5 位置上常发现次黄喋吟(I )或与之相似，仅能形成2个氢键的喀呢。GU-AGt 则多数细胞核mRNAtff体中内含子的5 边界序列为GU 3边界序列为AG 因此，GU表示供体衔接点的5 端，AG表示接纳体衔接点的3端。把这种保守 序列模式称为GU-AGt则，又称为Chambonfe则。ORF开放阅读框open reading frame ， ORF 是结构基因的正常核苷酸序列，从起始密码子到终止密码子的阅读框可编码完整的多肽链， 其间不存在使翻译中断 的终止密码子。B 型 DNA(1
14、) DN做螺旋两条反向平行的互补双螺旋链，一条方向为5 -3,另一条方向为3-5,围绕同一中心纵轴，从右向上盘旋。双螺旋磷酸-脱氧核糖主链在外，位于内的碱基平面与中心轴垂直。每个碱基相聚0.34nm， 同条链相邻碱基夹角36度， 每 10个碱基形成螺旋 1 周，螺距3.4nm。露于螺旋外的磷原子离中心轴1.0nm,易与阳离子接近。两条链相互碱基互补配对，即 AT/GC分别以2个和3个氢键相连。两条单链之间由小沟，两个双链之间有大沟，他们在 DNW螺旋外交替 出现。(2) B型 DNA被认为是最稳定的结构，有特殊的螺旋重复(每砸1 0 b p) ,几乎与螺旋轴垂直，有一条主沟和一条小沟。(3)其
15、他类型的DN AA型DNA和B型一样为右旋，但较宽，结构更加紧密，碱基对倾斜于螺旋轴线，且偏离细线，重复每砸为1 1 b p。Z型是左旋，有一个Z字形的外观，每砸1 2 b p碱基对。poly(A) tail 的作用有助于稳定整个分子；和poly(A)结合起抵抗3 / 外切核甘酸酶攻击的作用；有助于细胞质中成熟m RNA的翻译氨酰tRNA合成酶a)氨酰-TRNA合成酶使氨基酸2合到特定的t RNAk:每一个氨酰-TRNA 合成酶可识别一个特定的氨基酸和与此氨基酸对应的TRNA勺特定部位。b)氨酰-TRNA合成酶的辨认位点：大肠力f菌TRNAALAt基酸臂是酶的辨认位点。Tm 值DNA勺解链温度
16、(Tm)是引物的一个重要参数，它是当50%的引物和互补序 列表现为双链DNA子时的温度，一种DN的子的Tm值大小与其所含碱基中的G+ C比例相关，G+ C比例越高，Tm值越高。Tm=4（G+C +2 （A+T）tRNA的结构a） tRNA的一级结构：四种常见的修饰碱基，分别是胸腺喀呢核糖核甘（T）、 假尿喀噬核甘（山）、二氢尿昔（D）、肌昔（I ）。b） tRNA的二级结构：来自不同生物的tRNA,尽管一级序列不同，但都具有 三叶草样的二级结构。H 3 o -Arc-可变区氨基酸寓I - 又一个经过 修饰的核音酸-JTT7 反密码子tRNA i叶草式的：级结构是tRNA分子的5/端和3/端附近
17、的碱基配对形成的臂。一个成熟的tRNA分子的3 /端的核甘酸序列总是 CCA（3 ）, 一个特异的氨基酸通过它的竣基与tRNA的3 /端的腺甘酸残基的2 /或3 /羟基形成的共价键连接在 tRNA分子上。另外所有tRNA分子5 /端的核甘酸都是磷酸化的，而且大多 数tRNA分子5 /端的核甘酸残基为鸟甘酸残基（pG）。反密码环：位于氨基酸臂对面的单链环（anticodon loop ），该环含有由三个核甘酸残基组成的反密码子（anticodon ）,反密码子与mRN那的互补密码结合。反金码臂（anticodon arm ）:含有反金码子的臂。T巾 CW：含有胸腺喀噬核甘酸（T）（在RNA中很少
18、见到）、假尿喀噬核甘酸（山） 和胞喀呢核甘酸（C）残基的臂。D 臂（D arm）:含有二氢尿喀噬核甘酸残基的臂，不同 tRNA的D臂稍有不同。可变臂（variable arm ）:在反密码臂和T巾C臂之间，大约由3到21个 核甘酸组成。c） tRNA的三级结构：IKN的倒I即:赖站图在三维空间（tRNA的三级结构）， tRNA分子折叠成倒L型（右图），氨 基酸臂位于L型分子的一端，反密码 环则处于相反的一端。这样的结构更 为紧凑、稳定，这与DX T巾C和可变臂中的核甘酸之间的氢键有关。tRNA分子中的大多数核甘酸都处于两个成 直角的、堆积的螺旋中。碱基之间堆 积的相互作用就象稳定 DNA螺旋那
19、 样对tRNA的稳定性具有重要的贡献。蛋白质的三步合成起始：核糖体在mRNAh子上的组装 延伸：氨基酸廷加的重复循环终止：新生蛋白（多肽）链的释放 具体如下:1.起始蛋白质合成起始涉及到起始复合体在 mRNA勺阅读框架处的组装。起始复合 体由核糖体亚基、模板 mRNA起始tRNA和一些起始因子组成。1)起始密码子：在几乎所有的mRNAK翻译的起始密码都是 AUG少 数情形下起始密码为GUG。2) 30S亚基与SD序列的相互作用：在原核生物中，起始密码的选择不 仅取决于tRNA的反密码子和mRNAg码子的相互作用，也取决于核 糖体的小亚基与mRNAg板的相互作用。30S亚基是在紧靠起始密码 的上
20、游的一个富含喋吟碱基的区域与mRNA吉合。这个被称为SD序歹!J ( Shine-Dalgarno siquence )的区域与 16Sr RNA3/端的一个 富含嘧啶片段互补。在形成起始复合体时，互补的核苷酸对形成一个双链结构，使彳# mRNAg合到核糖体上。mRNAT 16SrRNA勺这一非 翻译片段之间的配对将起始密码定位在 P 部位，确立了正确的阅读框架。因为SD序列只出现在起始密码的上游，起始复合体就只能在 起始密码处组装，而不可能在内部的蛋氨酸密码处组装。3)特殊的起始tRNA:在每个细胞内至少存在着两个不同的识别AUG5码的蛋氨酰-tRNAMet 分子，一个只在起始密码处用， 称
21、为起始tRNA，另一个只识别内部的蛋氨酸密码。4) 起始复合物形成的三个步骤 ：起始复合物的形成取决于几个起始因子的作用。 在原核生物中， 存在着三个起始因子 ( Initiation Factor 缩写为 IF ) IF 1， IF 2和 IF 3。a) IF 1结合在30S核糖体亚基上，促进IF 2和IF 3发挥作用。IF -3的一个作用是通过结合在 30S的小亚基上，使小亚基维持 在游离的状态，IF 3与30S的结合可以防止30S和50S亚基形 成排斥mRNA勺不成熟的70S复合物。它对mRNAL的转录起始位 置具有很高的亲和性。b)结合了 GTP勺IF-2-GTP复合物可以特异识别起始
22、tRNA就是说， 能够从 细 胞 中 的氨 酰化 的 tRNA 分子 库 中 挑 选出 fMet- tRNAfMet。IF-2-GTP结合在30S亚基上，通过形成的 30S复合 物识别mRNAg板上的SD序列和起始密码，与 mRNA!互作用， 形成了一个由fMet- tRNAfMet、IF-2-GTP以及mRNA1成的前起始复合物。c) 一旦形成前起始复合物，50S亚基就与30S亚基结合，同时结合 在IF 2上的GTRd解生成IF-2-GDP和Pi ,然后结合在前起始 复合体上的起始因子IF 1和IF3解离，最后形成由30S与 50S组成的起始复合物，fMet- tRNAfMet被定位在P位。
23、IF-2-GDP 中的GD叫GTP交换重新生成IF-2-GTP。2. 延伸当蛋白质合成启动后，第二个密码被定位准备接收第二个氨酰 -tRNA。起始 氨酰-tRNA占据P位，A位被用来接收一个氨酰-tRNA,这是肽链延伸反应的 第一步。在肽链延伸阶段，需要将每一个按照密码要求的氨基酸接到生长着的肽链上，每连接一个氨基酸都要重复进行一轮延伸循环反应。a)将正确的氨酰-tRNA定位在A位b) 形成肽键c)使mRNA目对于核糖体移动一个密码(移位)。d) 释放卸载的 tRNA在每一轮延伸循环的开始，核糖体的A位是空的，而P位被一个氨酰化的tRNA 占据。P位的tRNA作为延伸的肽链的连接点，每进行一轮
24、延伸循环，连接在 P位tRNA分子上的氨基酸残基数都增加一个。连接着延伸肽链的 tRNA称为 肽酰 -tRNA。3. 终止蛋白质合成的最后一个阶段是多肽链延伸的终止。 多肽链的最后一个肽键形成后，携带新合成多肽链的肽酰-tRNA从A位转移至P位，终止密码(UAA UAGE UGA进入A位，在正常的细胞中没有和终止信号互补的 tRNA在E.Coli 中，有三种释放因子RF 1、 RF2 和 RF 3(RF： Release Factor )能够识别终止密码。释放因子 RF- 1可以与UAAf口 UAG吉合，而RF- 2能与UAAffi UGA吉合，RF- 3与RF- 1或RF 2结合形成异二聚体
25、。RF- 3也结合GTP 当异二聚体在A位与mRNA吉合后，改变了肽酰转移酶的活性，使得该酶能够水解肽酰-tRNA酯。伴随着GTP的水解和释放因子从核糖体的解离， 最后的多肽产物从核糖体释放出来。70S核糖体解离为30S和50S亚基，为合成另一个多肽分子作准备。【总结】遗传密码几乎是通用的，由 64 个密码组成，每个密码由 3 个核苷酸残基构成。64个密码中有61是编码氨基酸的，其余的UAA UAGF口 UGA3个密码为终止密码。读码的起点确定了一个基因的读码框架。读码起点的漂移有时会改变整个遗传信息。密码中碱基突变有时会改变密码的意义，一个核苷酸的取代可能会使一个错误的氨基酸整合到合成的蛋白
26、质中。遗传密码有几个显著特点，一是密码具有简并性，即许多密码编码同一个氨基酸，而且处于密码头两个位置的核苷酸足以指定一个氨基酸，所以处于第三个位置的核苷酸即使发生突变也不会改变密码的意义。 另外具有类似核苷酸序列的密码往往指定化学性质相近的氨基酸。tRNA分子是mRN廉口蛋白质之间的桥梁，它携带有激活的氨基酸，在 核糖体处通过互补碱基配对与mRN相互作用将氨基酸转移给生长着的肽链。所有的tRNA分子都含有一些确定的结构特征，tRNA分子中往往都含有许多保守和许多共价修饰的核苷酸，其中一些核苷酸对tRNA 分子的二级和三级结构有稳定作用。tRNA分子的二级结构为三叶草型，含有4个臂（碱基配对区）
27、和 3 个环。氨基酸臂共价连接着氨基酸残基，反密码环上的反密码通过碱基配对与mRN的密码相互作用。tRNA分子的三级结构为倒L型。反密码与mRN前的密码相互作用在5,位有一定的柔性（摆动性），即在该位置容许非标准碱基配对，结合同一个氨基酸但具有不同反密码的tRNA （同工tRNA）可以与同一个密码通过碱基配对相互作用。一个氨基酸在氨酰-tRNA合成酶的催化下共价连接在tRNA分子3 /末 端的A残基上。每一种氨酰-tRNA合成酶对一种氨基酸和相应的tRNA分子是高度特异的。某些氨酰-tRNA 合成酶还具有校正活性，使已经形成的不正确的氨酰 -腺苷酸水解。核糖体是由一个大亚基和一个小亚基组成的。
28、在E.coli 中，小亚基是30S亚基，含有21种蛋白质和一分子的16SrRNA而大亚基是50S亚基， 含有31种蛋白质和5s 23S两种rRNA分子。在蛋白质合成期间，两个亚基 结合形成一个70S核糖体。真核生物的核糖体比原核生物的大（由40S和60S 亚基组成的80S核糖体）和含有更多的蛋白质。真核生物核糖体的大亚基含 有 3 分子 rRNA （28S、5s 和 5.8S）。核糖体中肽链的合成包括三个阶段：起始、延伸和终止。在原核生物的起始阶段，首先形成一个包含mRN、A 30S 亚基、一个氨酰化的起始tRNA（fMet- tRNA fMet ）和 50S 亚基的起始复合体。起始因子促进复
29、合体成员之间的结合，同时需要一分子GTP通过起始密码和氨酰化的起始tRNA的相 互作用选择正确的密码，这种相互作用由于 16SrRNA?口位于mRNAg始密码 上游的互补SD序列之间碱基配进一步得到了加强。在蛋白质合成的延伸阶段，一个氨酰-tRNA 结合在A 位，而相邻的P位为肽酰 -tRNA 位置，一个肽键的形成伴随着一个新的肽酰-tRNA 由 A 位转移到P位和游离的tRNA从E位被弹出过程。这个过程需要 3个延伸因子和 消耗两分子GTP。蛋白质合成的终止发生在特殊的终止密码处， 同时需要释放因子参与和消耗一分子的GTP蛋白质合成的不同阶段都会受到抗生素的抑制。许多蛋白质在合成期间和翻译之
30、后会受到共价修饰。某些修饰 （ 如：乙酰化、羟基化、磷酸化、甲基化、糖基化和核苷的添加 ） 影响蛋白质向不同细胞部位的转运。一个向细胞外分泌或插入到膜中的蛋白质的N末端常常含有一个由1630 个残基组成的疏水性信号肽【名词解释】Melting temperature ：解链温度即双链核酸分子变性打开双链成单链的温度Tmfi, 一般DN砌子变性的Tm与G和C的含量成正相关。Cis-acting elements ：顺式作用元件，是基因转录中的一系列调控基因转录的基因序列片段。在原核生物中， 大多数基因表达通过操纵子模型进行调控， 其顺式作用元件主要由启动基因、 操纵基因和调节基因组成。 在真核生
31、物中， 与基因表达调控有关的顺式作用元件主要有启动子、增强子和沉默子。Wobble： 摇摆， 主要是指在基因密码中， 编码一个氨基酸的密码子的第三个核苷酸碱基有可能与反密码子的第一个碱基形成非沃森- 克里克的碱基配对方式，从而允许 tRNA 解读更多密码子的现象。ORF开放阅读框，是基因序列中一段从起始密码子开始编码某一蛋白质的到终 止密码子结束的碱基序列。Base stacking force :碱基堆积力，是一种在 DNA螺旋结构中，碱基对平面垂直于中心轴， 层叠于双螺旋的内侧， 相邻疏水性碱基在旋进中彼此堆积在一起相互吸引形成的作用力。这种力与氢键共同维系着DNA勺双螺旋结构的稳定性。T
32、ranscription :转录，是指生物中遗传信息由 DN喻向RNA勺过程，其中主要 是指以DNA模板在RN咪合酶的作用下合成前体 RNA勺过程。Silent mutation ：沉默突变，即同义突变。由于基因编码的简并性原则，在基因突变中， 虽然某碱基改变了， 但最后在翻译的蛋白质序列中氨基酸并未发生改变，仍保持野生型功能。Intron ：是真核生物基因中阻断基因线性表达，分开相邻外显子的一段非编码DNAt 段。Hyperchromic effect :增色效应，由于 DN侬性由双链变为单链引起的光吸收 增加称增色效应 , 也就是变性后 DNA 溶液的紫外吸收作用增强的效应。Hypochr
33、omicity effect :减色效应，单一的核甘酸的光吸收值比 RNAf口单链的 DNA勺吸收值都大，单链DNAO匕双链DNA。这种双链DNA对于单链DNAR 收值减少的现象就叫做减色效应。Supercoiling :超螺旋，是DNAgg轴线的再次螺旋，若以Lk0表示松弛闭环DNA 的连接数，Lk0的改变将导致超螺旋。一般天然的 DNAg负超螺旋，即DN侬形 的方向同双螺旋解旋的方向相反。Telomerase:端粒酶，是一种由RNAft蛋白质组成的核糖核蛋白复合体，属于反 转录酶。它以自身的RNA乍为端粒DNAM制的模板，合成出富含脱氧单磷酸鸟甘 （dGMP）l勺DNAff列后添加到染色体
34、的末端并与端粒蛋白质结合，从而稳定了染色体的结构。RNA polymerase：原核生物RN咪合酶：只有一种，组成 a 20 0 0-,称为 全酶。a亚基以二聚体形式形式存在，主要功能是装配核心酶及识别启动子；（7 亚基是启动子特异识别及转录起始物异构的主要亚基，分子大小为 32X 103的6 亚基，常写成（T32,分子大小为70X 103的亚基，常写成（t70o6亚基与其他亚 基结合松弛，易从全酶上掉下来，使全酶成 4亚基的a20 B 。解离后的a 20 B称为核心酶。B与B 一起构成RNA聚合酶的催化中心。其中B能与模板 DNA转录产物RNAR底物交联，参与RNA成及终止信号识别；0可使聚
35、合 酶结合到模板DNA,行使转录功能。真核生物RNA合酶：真核生物有3种，即RNApol I、RNA pol H、RNA pol ID ,分布于细胞核的不同位置，它们之间的主要区别在于对a-鹅膏蕈碱的敏感性不同，其中最敏感的是 RNApol H,存在于核质中，转录 mRNA 前体；其次是RNA polm,也存在于核质中，转录tRNA 5s rRNA和其他几种小分子RNA不敏感的是RNA pol I ,存在于核仁中，转录rRNAPromoter：启动子，指RNAK合酶特异识别的DNAff列，位于结构基因上游，长 度 100bp 到 200bp 不等，本身不能被转录。The sense stran
36、d :有义链（或编码链），指在转录过程中与 mRN府列相对应的 那条方向为5 -3的DNAil链。Antisense strand :无义链也即转录 RNA勺模板DNA8,方向与转录方向相反为 3 -5。Pribnow box:启动子的-10区，含有TATAA裨守序列，是RN咪合酶与DNA吉 合、起始复合物由关闭状态转变为启动状态的特定序列。它的特点是起始的 TA 和末位的T具有高度保守性，距起始位点+1相隔5到8bp,有DNAS旋的作用。Sextama box:启动子的-35区，含有TTGAC据守序歹1，能增强RNA合酶因 子与模板起始位点的识别和相互作用。在大肠杆菌中前三位TTG 具有高度
37、保守性，与 -10 区相隔 16 至 18bp。Abortive initiation ：流产式起始，指转录起始后直到形成9 个核苷酸短链的过程是通过启动子阶段，此时RNA聚合酶一直处在启动子区，新生的RNA链与DNA真板链的结合不牢，容易掉下来并导致转录重新开始。Promoter clearance :启动子清除，指的是当起始转录成功后，因子被释放下 来，RNA合酶、DN徽板链以及新生成RNAE者形成三重复合体，这时转录进 行延伸，而下一个转录又可以重新开始的过程。trans-acting factor ：反式作用因子，指一些与基因表达调控有关的蛋白质因子。 原核生物中的反式作用因子主要分为
38、特异因子、 激活蛋白和阻遏蛋白； 而真核生物中的反式作用因子通常称为转录因子。TATA box: TATA框（又称Hogness框），真核生物中，启动子区，-25bp附近的TATA呆守序列，具有选择转录起点、控制转录精确性的作用。CAATbox:真核生物中，启动子区，-75bp附近的一段GGCCAATCTf序歹1，具 有控制转录起始频率的作用。Enhancer：增强子，真核生物中，位于启动子上游、距转录起始点至少100bp以上，是一种远端控制元件，又称上游激活序列（UAS） ，通过启动子增强转录效率。增强子跨度100到200bp,由8至12bp “核心”组件构成，存在完整的或部分的回文结构。S
39、ilencer ：沉默子，真核生物中，起负调控作用的顺式元件，与相应的反式作用因子结合后，使正调控系统失去效应。不受距离和方向的限制。Positive control system ：正调控系统，调节基因产物是激活蛋白；效应物使激活蛋白处于激活状态 正控诱导；效应物使激活蛋白处于非活性状态正控阻遏。Negative control system ：负调控系统，调节基因产物是阻遏蛋白；效应物与阻遏蛋白结合， 阻止基因转录 负控阻遏； 效应物不与阻遏蛋白结合， 阻止基因转录 负控诱导。Spliceosome :剪接体，大的RNA蛋白质复合体，是核内前体 mRNA行剪接的 场所。Leucine zi
40、pper ：亮氨酸拉链，是一种DNA吉合蛋白的结构域，其中几个亮氨酸按一定的间隔规律排列。 这种结构有利于与另一个亮氨酸拉链形成二聚体。 此二 聚体可与DNA#异性结合。Long interspersed element ：长散布元件（LINE） ，在哺育动物中最丰富的非LTR反转录转座子。Long terminal repeat ：长末端重复序列（LTR） ，在反转录病毒的原病毒或含LTR反转录转座子的两端发现的长几百个碱基对的区域。Allolactose :异乳糖，一种重排的以B -1,6-糖昔键连接的乳糖形式；是乳糖操 纵子的诱导物。Alternative splicing ： 选择性剪
41、接， 一两种或更多的方式剪接相同的前体RNA，产生两种或多种不同的 mRN A进而生成两种或多种不同的蛋白质产物。Allosteric protein ：变构蛋白，内部一个位点上结合一个分子后改变与之相距 较远的位点的构象，从而改变了该位点与第二个分子间相互作用的一类蛋白质。Alu element ： Alu 元件，只存在于人类基因组中一种中等重复的自身可以通过转座复制的反转录转座子的DNAff列，在人类基因组中约有一百多万个拷贝。Photoreactivation :光修复，通过DNA）t解酶对口密噬二聚体进行直接修复的过 程。Pseudogene： 假基因， 正常基因的非等位拷贝， 由于发
42、生变异有功能序但而不能 翻译功能蛋白。Pyrimidine dimmer :喀呢二聚体，DNA链上通过共价连接的两个相邻喀呢，它 们是互补链上喋吟的碱基配对被打断。这是由紫外线照射导致的主要的DNA损伤。Reporter gene ：报告基因，连接在启动子或翻译起始位点后用于检测转录或翻 译的活性基因。报告基因比被替代基因更易检测。RRF核糖体循环因子，一种与tRNA十分相似的蛋白质，在翻译终止后结合到核 糖体上的A位点，并与EF-G一起作用，将核糖体从 mRNAb释放出来。RNAtriphosphatase : RNAE磷酸酶，在加帽之前去除前体 mRNA端上的丫磷 酸基团的酶。Zinc f
43、inger :锌指结构，一种与DN阁合的模体，具结构一个锌离子和 4个氨 基酸组成，通常是两个半胱氨酸和两个组氨酸。 此模体呈手指形状，与DNA勺大 沟特异结合。Translocation ：转位，翻译延伸阶段中紧接肽酰转移酶反应之后的步骤，此过程中mRNAt核糖体上移动一个密码子长度并让一个新的密码子进入核糖体的A位点。Transition ： 转换， 在基因突变中， 一种由嘧啶取代嘧啶嘌呤取代嘌呤的突变方 式。Transversion: 颠换，基因突变中，一种由嘧啶替换嘌呤或嘌呤替换嘧啶的突变 方式。SOSresponse： SOS应答，为协助大肠杆菌细胞对环境胁迫作出响应而进行的包 括 recA 在内的一系列基因的激活