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1、食品卫生微生物学检验,菌落总数测定 大肠菌群测定 粪大肠菌群测定,实验分组（40人）,俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。 按从前到后从左到右顺序，编为15，610。 两个小组编为一个大组：1+2,4+5, 6+7,9+10, 3+8。,甲 乙 4 丙 丁,甲 乙 3 丙 丁,甲 乙 2 丙 丁,甲 乙 1 丙 丁,甲 乙 5 丙 丁,甲 乙 8 丙 丁,甲 乙 7 丙 丁,甲 乙 6 丙 丁,甲 乙 10 丙 丁,甲 乙 9 丙 丁,讲 台,左,右,食品卫生微生物学检验一实验准备,培养基制备 高压蒸汽灭菌 器材预算 刻度吸管的无菌操作方法,1500W电炉安全警告 1.电源插塞与电炉插
2、孔接触良好插头插入插座。 2.如果培养基潽了，流入电炉；必须立即切断电源、拔除插头；以免触电，危及生命！,东西两侧边台各一个电炉，每个电炉 可同时放置3个500ml锥形瓶进行加热。,培养基隔石棉网煮沸，使完全溶解。,加热时,常摇动。 沸腾时，不能摇动！,称量纸置于左盘，游码移至标尺左端“0”点位置上，指针应对准中线，取得平衡。否则将杠杆两端的调整螺母旋动调节平衡。,秤物时“左物右码”，砝码在右盘，物品在左盘上，尽可能放在秤盘中心。天平保持干燥、清洁。用过的药勺要清洗干净。,标准的分类,根据适用范围分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准四级。 根据法律的约束性分为强制性标准和推荐性标准。 标
3、准号:代号 + 序号 + 年份组成 GB/T 4789.2 - 2003 代号GB表示国家标准， T指推荐性标准。 序号4789指食品卫生微生物学检验，点2指该检验的第二部分（菌落总数测定）。 2003是指该标准制定或修改的年份。,食品卫生标准中的微生物指标,指示菌 概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检样卫生状况及安全性的指示性微生物。 项目：菌落总数 、大肠菌群、耐热大肠菌群、总大肠菌群。 食源性致病菌及其毒素 沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌等。 霉菌、酵母菌及其毒
4、素 黄曲霉毒素B1 、B2等。,菌落总数,菌落总数是指被检样品的单位重量(g)、容积(ml)、表面积(cm2)或体积(m3)内，所含有的能在某种固体培养基上,经一定条件、一定时间培养后长出的菌落数量。 包括细菌、霉菌和酵母菌的菌落总数。 菌落总数所用培养基、培养温度、培养时间的差异会影响到菌落计数的结果。因此，必须严格遵照国家规定的检验方法中的操作条件，以获得始终可比的结果。 菌落总数的食品卫生意义：判定检样被微生物污染的程度，预测食品存放的期限。,大肠菌群,大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，是评价食品
5、卫生质量的重要指标之一。 大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属等四个属的细菌。 大肠菌群是作为粪便污染指示菌提出来的，该菌群的检出，可推测检样中存在着肠道致病菌污染的可能性。 大肠菌群的食品卫生意义：作为粪便污染食品的指示菌，作为肠道致病菌污染食品的指示菌。,实验预算,编写实验预算必须仔细阅读操作步骤，确认器材。 例如：P10 7.操作步骤 7.1.1 “以无菌操作将检样25g(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内。”
6、取“25ml”联想到10ml无菌刻度吸管和洗牙球，无菌吸管应该怎样包装灭菌？ “剪碎”固体样品需要无菌剪刀，如果是液体检品则不需要。 “225ml灭菌生理盐水”，应该装在250ml的盐水瓶里，怎样配制生理盐水？需要什么物品和器材？ 考虑问题应该周到，设备、材料准备齐全，确保实验顺利进行。,器材准备,1.冰箱：04 2.恒温培养箱：3537 3.恒温水浴箱：4547 4.灭菌1ml刻度吸管：3支10组2倍 5.灭菌10ml刻度吸管：2支10组2倍 6.灭菌90mm平皿：7个10组2倍 7.灭菌70mm平皿：4个210组2倍 8.灭菌中试管：2支10组2倍,培养基预算,乳糖发酵管：微量乳糖发酵管（
7、已购买） 乳糖胆盐发酵管（见P2054.9)：10ml10支10组120 300ml4瓶分装100支（倒放小倒管）单独灭菌（115） 以下培养基121(0.12MPa) 15分钟 营养琼脂培养基：（15ml7个平皿=105ml 120 130ml）130ml10组120 （12瓶） 0.85%生理盐水：225ml1瓶10组120（12瓶） 0.85%生理盐水：100ml1瓶10组120（12瓶） 伊红美蓝平板：42块10组120 （300 ml3瓶） EC肉汤(见P2064.11) ：5ml 4支10组120 250ml1瓶 分装50支（倒放小倒管） (Escherichia coli Bro
8、th,简称 EC Broth),刻度吸管的无菌操作方法,吸球的选择：无菌操作时，一般不使用洗耳球。5毫升和10毫升刻度吸管用洗牙球，1毫升刻度吸管套用合适的小吸球。 无菌操作方法：左手手指捏住吸管头包装纸套约5厘米处，右手向前旋松纸套、撕断包装纸头，如果吸管头部外测有棉花絮，应该烧掉，然后套上吸球，以免连接部位漏气。此时，包装纸套出口处已经污染。应把包装纸反向拉开，折出一个无菌倾斜出口，退出吸管，管尖呈3040度角离开无菌包装纸套。 吸球的按压程度，以按压松开以后，能吸取110的液体为宜。这个按压程度，很容易控制吸管中液体，移液过程中，也不会因为失控，对吸球过度加压或减压，液体就不会外流，空气
9、也不容易进入吸管内，这样可以把污染降到最低程度。,刻度吸管的准备,吸管头塞脱脂棉11.5厘米，松紧合适，太松不能有效过滤微生物，太紧阻力大，影响吸取标本。 将大版报纸纵向裁成1/2和1/6版大小的纸条(长54cm，宽 20cm 和6.5cm）。 用宽6.5cm的纸条包吸管，纸条与吸管呈30度角，从管尖部分开始包（不得从吸管头包起），纸条包住吸管向前转动几圈，将吸管尖退入纸筒内约34 厘米，把纸筒起始端压平，打折180度（折34 厘米长、纸筒壁厚度约三层纸，不容易被管尖扎破），转动并压住起始端打折部分，继续转动。转动时，右手将纸条向前推平，左手将吸管向后拉紧，同时向前转动，吸管就能够包得很紧。纸
10、筒形成以后，把末端空心纸筒压平固定，打折，系牢，多余的纸撕掉。 每10支用1/2版（宽 20cm）的报纸包成1包。 高压蒸汽灭菌，烤干备用。,实验室人员基本要求 GB4789.1,检验人员应具有相应的教育、微生物专业培训经历，具备相应的资质，能够理解并正确实施检验。 检验人员应掌握实验室生物检验安全操作知识和消毒知识。 检验人员应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。 检验人员应在检验过程中遵守相关预防措施的规定，保证自身安全。 有颜色视觉障碍的人员不能执行涉及到辨色的实验。,常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。 试管架上器材：靠近插座一侧第1和第2列分别放置接种针和 接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。,器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。,实验室器材 整齐有序,