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1、实验二邻菲罗啉分光光度法测定水样中的铁标准曲线法一、实验目的：1 .掌握邻菲罗啉分光光度法测定微量铁的原理和方法；2 .学会标准曲线的绘制方法及其使用。二、原理：1. 定量分析依据：A= Kbc2. 有关反响：4Fe3+2NH2OH HCI=4Fe 2+N2。f +4H+2H2O+2C3. 显色条件pH 值控制：pH 5.0。显色时间： 15min显色温度：室温显色剂及用量：邻二氮菲 2.00mL4. 测量条件?max=510 nm参比溶液：试剂空白吸光度范围：三、仪器：可见分光光度计，1cm比色皿、100mL容量瓶1个，20mL移液管1支，50mL 容 量瓶10个，10mL吸量管1支，1mL
2、吸量管或移液管1支，5mL移 液管1支，2mL移液管1支。四、试剂：铁贮备液(100 ug/mL):准确称取0.7020克分析纯硫酸亚铁铵(NM) ?Fe (SO4) 2 6H2O于 100 毫升烧怀中(或 0.8640g 分析纯的 NMFe (SO4) 2 12出0,其摩尔质量为 482.18g/mol )，加 50毫升 1+1 H 2SO 4，完全溶解后，移入 1000ml 的 容量瓶中，并用水稀释到刻度，摇匀，此溶液中Fe的质量浓度为100.0 ug/mL。(实验室准备好) 铁标准溶液(20.00 u mL - 1)移取100.0 u mL - 1铁 标准溶液 20.00mL 于 100
3、mL 容量瓶中，并用蒸馏水稀释至标线，摇匀。 (学生 自行配制) 10%盐酸羟胺水溶液:(用时配制)。 0.5% 邻菲罗啉水溶液:配制时加数滴盐酸能助溶液或先用少许酒精溶解，再 用水稀释至所需体积。 (临用时配制)或(避光保存，两周内有效) 。 HAc-NaAc缓冲溶液(pH5.0 ):称取40克纯醋酸铵加到50毫升冰醋酸中， 加水溶解后稀释至 100 毫升。五、测定步骤:1、标准曲线的绘制:(1) 分别吸取铁的标准溶液 0.00 、1.00 、2.00 、4.00 、6.00 、8.00 、10.00ml 于 7 支 50ml 容量瓶中，加水至刻度；(2) 依次分别参加10%盐酸羟胺溶液1m
4、l，混匀，参加5ml pH心5.0缓冲溶液， 摇 匀，参加0.5%邻菲罗啉溶液2ml，摇匀，( 3)放置 15 分钟后，在 510nm 波长处，用 1cm 比色皿，以试剂空白作为参 比，测定各溶液的吸光度。附 721 型分光光度计操作过程:1. 检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，选择波长，并将灵敏度档置第1 档2. 接通电源，翻开开关3 盖上比色皿暗盒盖，用调“ 1 00% 调节器使电表指针处于透过率 “ 100% 位，翻开比色皿暗盒盖，用调“0调节器使电表指针处于透过率“ 0位；预热 20min4. 放入参比溶液及试样溶液5. 校准：拉动吸收池拉杆，使参比溶液置于光路中，打幵比色皿暗盒盖，
5、 用调“ 0调节器使电表指针处于透过率“0 位；盖上比色皿暗盒盖，用调“100% 调节器使电表指针处于透过率“100% 位。重复校正至稳定6. 假设调“100% 调节器不能使电表指针处于透过率“100% 位，翻开比色皿 暗盒盖，那么应放大灵敏度，重新调整直至稳定7. 盖上样品盖，拉动吸收池拉杆，依次将待测溶液推入光路，读出吸光度值A。连续读数后，立即翻开比色皿暗盒盖，取出吸收池，参比溶液不取出。8. 再放入其他浓度待测溶液，继续调“0及 100% ，按前面的“校准步骤重新调整直至稳定，再测量其他浓度待测溶液的吸光度A。9. 测量完毕，取出吸收池，各旋钮置于原来位置，电源开关置于“关， 拔下电源
6、插头。10. 比色皿用纯水洗净后倒置于滤纸上晾干。4以吸光度为纵坐标，铁含量旧，50ml为横坐标，用软件excel或orig in 绘制出标准曲线编号0#1 #2 #3 #4 #5 #6#V 铁标液/mL0.001.002.004.006.008.0010.00p ( Fe) / 用 mL-1A2、试样中铁含量的测定取3只洁净的50mL容量瓶，分别参加适量以吸光度落在工作曲线中部为 宜含 铁未知试液5.00mL，按步骤前面步骤1标准曲线的绘制显色，测 量吸光度并记 录，由线性回应方程式求出相应的铁含量。记录格式参考下表。六.本卷须知1显色过程中，每参加一种试剂均要摇匀。2 试样和工作曲线测定的实验条件应保持一致，所以最好两者同时显色同时测定。七思考题A 值，该值在标尺1T 与 A 两者关系如何？分光光度测定时，一般读取 上什么范围好？为什么？如何控制被测溶液的 A 值在此范围内？