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1、.博士班分子生物学实验技术课模拟试卷1、你想采用PCR技术扩增pEGFP-N1中绿荧光蛋白（GFP）的序列，通过基因A中的BamH1位点将GFP序列插入基因A的编码序列中，并保证全长融合蛋白的表达。请根据下列信息设计用于扩增GFP的引物。 A B .GCCAGTGGGATCCTGATTGCC. Ala Ser Gly Ilu Arg Ilu Ala GGATCC为BamH1位点2、 你在做一个DNA连接反应。经酶切回收的质粒载体大小为5055 bp、1:50稀释后测OD2600.2；插入DNA片段大小为675 bp、1:40稀释后测OD2600.1。请按载体DNA与插入DNA片段克分子数比为1
2、:3和载体DNA总量约0.15 x 10-12 mole计算，完成下列工作表（每个核苷酸残基的平均分子量以330计）：10x BufferVector DNAInsert DNAH2OT4 ligaseTotal Volume2 ml ml ml ml1 ml20 ml3、下图是一个质粒图谱，标明其主要构件和作用。并根据构建特征，指出该载体的类型和功能特征。提示：pIRES-EGFP contains the internal ribosome entry site (IRES) of the encephalomyocarditis virus (ECMV) between the MCS
3、and the EGFP (enhanced green fluorescent protein) coding region. This permits both the gene of interest (cloned into the MCS) and the EGFP gene to be translated from a single bicistronic mRNA.4、 你从大鼠脑组织中克隆了一个新基因，并已知是一种膜蛋白，根据cDNA序列得知氨基酸残基为882个，同时你已制备了特异性单克隆抗体。下图分别是针对原核细胞表达产物、真核细胞表达产物和大鼠组织样本的免疫印迹结果：1、
4、 原核细胞表达产物2、 原核细胞对照3、 真核细胞表达产物4、 真核细胞对照5、 大鼠脑皮层组织6、 大鼠心脏组织请解释结果，并设计实验来验证你的判断。5、 SARS病毒全基因组测序和相关蛋白的鉴定已完成。你想利用pETBlue-2载体表达SARS棘蛋白（surface spike glycoprotein）作进一步研究。你已有SARS病毒RNA、原核表达载体pETBlue-2、其他相关试剂和实验设备；并知道以下相关信息如下：SARS棘蛋白的编码序列（下列为SARS基因组部分序列，棘蛋白序列从21492到25259 bp）：21421 gtaggcttat cattagagaa aacaaca
5、gag ttgtggtttc aagtgatatt cttgttaaca21481 actaaacgaa catgtttatt ttcttattat ttcttactct cactagtggt agtgaccttg 21541 accggtgcac cacttttgat gatgttcaag ctcctaatta cactcaacat acttcatcta 21601 tgaggggggt ttactatcct gatgaaattt ttagatcaga cactctttat ttaactcagg 21661 atttatttct tccattttat tctaatgtta cagggtttc
6、a tactattaat catacgtttg 21721 gcaaccctgt catacctttt aaggatggta tttattttgc tgccacagag aaatcaaatg 21781 ttgtccgtgg ttgggttttt ggttctacca tgaacaacaa gtcacagtcg gtgattatta 21841 ttaacaattc tactaatgtt gttatacgag catgtaactt tgaattgtgt gacaaccctt 21901 tctttgctgt ttctaaaccc atgggtacac agacacatac tatgatattc
7、 gataatgcat 21961 ttaattgcac tttcgagtac atatctgatg ccttttcgct tgatgtttca gaaaagtcag 22021 gtaattttaa acacttacga gagtttgtgt ttaaaaataa agatgggttt ctctatgttt 22081 ataagggcta tcaacctata gatgtagttc gtgatctacc ttctggtttt aacactttga 22141 aacctatttt taagttgcct cttggtatta acattacaaa ttttagagcc attcttacag
8、22201 ccttttcacc tgctcaagac atttggggca cgtcagctgc agcctatttt gttggctatt 22261 taaagccaac tacatttatg ctcaagtatg atgaaaatgg tacaatcaca gatgctgttg 22321 attgttctca aaatccactt gctgaactca aatgctctgt taagagcttt gagattgaca 22381 aaggaattta ccagacctct aatttcaggg ttgttccctc aggagatgtt gtgagattcc 22441 ctaata
9、ttac aaacttgtgt ccttttggag aggtttttaa tgctactaaa ttcccttctg 22501 tctatgcatg ggagagaaaa aaaatttcta attgtgttgc tgattactct gtgctctaca 22561 actcaacatt tttttcaacc tttaagtgct atggcgtttc tgccactaag ttgaatgatc 22621 tttgcttctc caatgtctat gcagattctt ttgtagtcaa gggagatgat gtaagacaaa 22681 tagcgccagg acaaact
10、ggt gttattgctg attataatta taaattgcca gatgatttca 22741 tgggttgtgt ccttgcttgg aatactagga acattgatgc tacttcaact ggtaattata 22801 attataaata taggtatctt agacatggca agcttaggcc ctttgagaga gacatatcta 22861 atgtgccttt ctcccctgat ggcaaacctt gcaccccacc tgctcttaat tgttattggc 22921 cattaaatga ttatggtttt tacaccac
11、ta ctggcattgg ctaccaacct tacagagttg 22981 tagtactttc ttttgaactt ttaaatgcac cggccacggt ttgtggacca aaattatcca 23041 ctgaccttat taagaaccag tgtgtcaatt ttaattttaa tggactcact ggtactggtg 23101 tgttaactcc ttcttcaaag agatttcaac catttcaaca atttggccgt gatgtttctg 23161 atttcactga ttccgttcga gatcctaaaa catctgaaa
12、t attagacatt tcaccttgct 23221 cttttggggg tgtaagtgta attacacctg gaacaaatgc ttcatctgaa gttgctgttc 23281 tatatcaaga tgttaactgc actgatgttt ctacagcaat tcatgcagat caactcacac 23341 cagcttggcg catatattct actggaaaca atgtattcca gactcaagca ggctgtctta 23401 taggagctga gcatgtcgac acttcttatg agtgcgacat tcctattgga
13、 gctggcattt 23461 gtgctagtta ccatacagtt tctttattac gtagtactag ccaaaaatct attgtggctt 23521 atactatgtc tttaggtgct gatagttcaa ttgcttactc taataacacc attgctatac 23581 ctactaactt ttcaattagc attactacag aagtaatgcc tgtttctatg gctaaaacct 23641 ccgtagattg taatatgtac atctgcggag attctactga atgtgctaat ttgcttctcc
14、23701 aatatggtag cttttgcaca caactaaatc gtgcactctc aggtattgct gctgaacagg 23761 atcgcaacac acgtgaagtg ttcgctcaag tcaaacaaat gtacaaaacc ccaactttga 23821 aatattttgg tggttttaat ttttcacaaa tattacctga ccctctaaag ccaactaaga 23881 ggtcttttat tgaggacttg ctctttaata aggtgacact cgctgatgct ggcttcatga 23941 agcaat
15、atgg cgaatgccta ggtgatatta atgctagaga tctcatttgt gcgcagaagt 24001 tcaatggact tacagtgttg ccacctctgc tcactgatga tatgattgct gcctacactg 24061 ctgctctagt tagtggtact gccactgctg gatggacatt tggtgctggc gctgctcttc 24121 aaataccttt tgctatgcaa atggcatata ggttcaatgg cattggagtt acccaaaatg 24181 ttctctatga gaaccaa
16、aaa caaatcgcca accaatttaa caaggcgatt agtcaaattc 24241 aagaatcact tacaacaaca tcaactgcat tgggcaagct gcaagacgtt gttaaccaga 24301 atgctcaagc attaaacaca cttgttaaac aacttagctc taattttggt gcaatttcaa 24361 gtgtgctaaa tgatatcctt tcgcgacttg ataaagtcga ggcggaggta caaattgaca 24421 ggttaattac aggcagactt caaagcct
17、tc aaacctatgt aacacaacaa ctaatcaggg 24481 ctgctgaaat cagggcttct gctaatcttg ctgctactaa aatgtctgag tgtgttcttg 24541 gacaatcaaa aagagttgac ttttgtggaa agggctacca ccttatgtcc ttcccacaag 24601 cagccccgca tggtgttgtc ttcctacatg tcacgtatgt gccatcccag gagaggaact 24661 tcaccacagc gccagcaatt tgtcatgaag gcaaagcat
18、a cttccctcgt gaaggtgttt 24721 ttgtgtttaa tggcacttct tggtttatta cacagaggaa cttcttttct ccacaaataa 24781 ttactacaga caatacattt gtctcaggaa attgtgatgt cgttattggc atcattaaca 24841 acacagttta tgatcctctg caacctgagc tcgactcatt caaagaagag ctggacaagt 24901 acttcaaaaa tcatacatca ccagatgttg atcttggcga catttcaggc
19、 attaacgctt 24961 ctgtcgtcaa cattcaaaaa gaaattgacc gcctcaatga ggtcgctaaa aatttaaatg 25021 aatcactcat tgaccttcaa gaattgggaa aatatgagca atatattaaa tggccttggt 25081 atgtttggct cggcttcatt gctggactaa ttgccatcgt catggttaca atcttgcttt 25141 gttgcatgac tagttgttgc agttgcctca agggtgcatg ctcttgtggt tcttgctgca
20、25201 agtttgatga ggatgactct gagccagttc tcaagggtgt caaattacat tacacataaa25261 cgaacttatg gatttgttta tgagattttt tactcttgga tcaattactg cacagccagtpETBlue-2载体图谱和MCS区的序列细节（提示：这是一个克隆和表达型载体，插入基因的表达靠T7启动子驱动，与用于重组子筛选的E.coli启动子方向相反。因而，插入多克隆位点的编码序列的N端应朝T7启动子下游。）已知该基因21421-25320 bp之间不存在BamHI、EcoRI、SmaI、XhoI位点。请根
21、据以上条件和信息请完成：A引物设计（提示：要在引物中引入酶切位点作克隆用；下游引物的设计要考虑能连续表达出C端的His6-Tag短肽，即要注意阅读框。）：上游引物序列为：5-下游引物序列为：5-B列出克隆、表达并纯化该蛋白的主要实验步骤：a. 主要克隆步骤（提示：SARS病毒为单链RNA（+）病毒）：b. 主要表达和鉴定步骤（提示：pET系统的特征是什么？）： c. 主要纯化步骤（提示：His6-Tag如何利用？）：6、在有关蛋白组学的研究中，明确发现某一蛋白高表达，经分析得到部分氨基酸序列如下：YLIKLLALGDSGVGKTTFLYRY。请回答：a) 如何查清它是不是一个已克隆的基因？b) 若不是，如何获得其cDNA克隆？请根据带下划线的5个氨基酸设计出系列寡核苷酸探针。下列遗传密码图供参考。7、下图示为FHIT基因在肝细胞和肝癌细胞株中的表达结果，图A为Northern blot结果，图B为RT-PCR结果。(1) 从图中可以得到什么信息？(2) Beta-Actin在本实验中起什么作用？(3) Northern Blot的原理是什么？Northern blot和RT-PCR在进行RNA定量检测时各有何优缺点。 8、简述应用Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列分析的基本原理，并将下列DNA测序胶片的结果，从53写出合成链的DNA序列。A G T C；.