医学课件第13章基因工程与PCR.ppt

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1、漳迄罩珠毫黔铅搽晒区抉误漫恢诲游公了秧碍钮岭胚汛迁慰袄拽肉铭浩糜第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 生物化学生物化学CAICAI课件课件A A 第13章基因工程与PCR 作者高新旺祁新芝河南省周口卫校陋酝哨诊固澜咙届胆壮种敏疵询涧噎契缴蚊躯爹秤这绍结胁篮酋娶竞侮陌第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 目录学习目标学习目标 PCRPCR技术技术

2、复习题复习题重点内容：基因工程基因工程基因工程基因工程群鸵慎标模并铭秩痰休亨碳际戌熬仿流辙脂浊桑四分肋铲圃醉曾剖复醇尾第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 学学习习目目标标 1.说出基因工程的操作步骤 2.列出基因工程的主要工具酶 3.简述PCR技术的工作原理 4.列出PCR的操作步骤学时分配第一节 2学时第二节 1学时唁普凹沦鼓胺卓崇碑甩屋矩剥囱躁悸合盼嘴设铭稼疫盏剿伏蠕啦烬牛氟颂第 1

3、3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 第一节第一节基因工程基因工程基因工程又称重组DNA技术，是对携带遗传信息的分子进行设计和改造的分子工程，包括基因重组、克隆和表达。基因工程与蛋白质工程、酶工程和细胞工程共同构成了当代新兴的学科领域生物技术工程。厕滋羡伪螟琼借土濒端抢斡裁怠稼埔吼懦怂龄恕绵第沿撼准戏义邮廊苗殷第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 一、基因工程的相关概念一、基因工程的相关概念（一）DNA克隆

4、所谓克隆(clone)就是来自同一始祖的相同拷贝(copy)的的集合；获取同一拷贝的过程称为克隆化，也就是无性繁殖。通过无性繁殖过程获得的“克隆”，可以是分子的，也可以是细胞的，动物的或植物的。在分子遗传学领域所谓的分子克隆专指DNA的克隆。茎畔赣守滤呜舀浪脑为晒危组几薄郭蒂绩猜句排芽煤翼丙扎族供佳钠谷扑第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R DNA克隆就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体D

5、NA结合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，既 DNA克隆。由于早期研究是从较的染色体分离、扩增特异性基因，因此DNA克隆又称基因克隆(gene cloning)。克隆某一基因或DNA片段过程中，将外源DNA插入载体分子所形成的复制子是杂合分子嵌合DNA，所以DNA克隆或基因克隆又称重组DNA。实现基因克隆所采用的方法及相关的工作统称重组DNA技术，又称基因工程。疙鹿慰堪钉聘廊配瘴抚椿彰镜险尹矛衅催汹层擎销服

6、梭蛛骆赶靳药栽蓬即第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （二）工具酶在重组DNA技术中，常需要一些工具酶进行基因操作。 1限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶能识别特异的DNA序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA分子。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，种类很多。目前发现的限制性核酸内切酶有 1800种以上，常用的有几十种。现列举某些限制性核酸内切酶如下页表（其命名是根据含有该酶的微生物种属而定，如从淀粉液化芽孢杆菌H株分离出的第一种限制酶命名为Bam H）。剖溃剪岳列妹宁堵捧铅溺

7、岳悲襄绦剁乐犁寝屁荧笺褒馏栽拜垢遂农庄幢萨第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 下表：限制性核酸内切酶 5G GATCC3 5A GATCT3 5G AATTC3 5A AGCTT3 5G CGG3 5 GATC3 5GA TATG3 名称识别序列及切割位点切割后产生5突出末端： BamH Bgl EcoR Hind Hpa Mbo Nde 芥狰侨萧狙非恋涧迢邪醚陌迂肝四奏妹竟毙幌维诲郴揪析鲁咎令戈炳芳更第 1 3 章基因

8、工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 续表：限制性核酸内切酶名称识别序列及切割位点切割后产生3突出末端： Apa Hae Kpn Pst Sph 切割后产生平末端： Alu Ecor Hae Pvu Sma 5 GGGCC C 3 5 PuGCGC Py 3 5 GGTAC C 3 5 CTGCA G 3 5 GCATG C 3 5AG CT 3 5 GAT ATC 3 5 GG CC 3 5 CAG CTG 3 5 CCC GGG 3 磐鸳咬贝染磕鸽弛滚涕贞剑找狈陆煌钥汾炯骡曳钎钵壬躺位鞘辩掉

9、悼半途第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 2DNA连接酶 DNA连接酶催化DNA分子中相邻的5 磷酸基和3羟基末段之间形成磷酸二酯键，使DNA切口封合或使两个DNA分子或片连接。 3 DNA聚合酶其作用是：合成双链cDNA分子或片段连接缺口平移制作高比活探针 DNA序列分析填补3末端 4Klenow片段又名DNA聚合酶大片段，具有完整的DNA聚合酶的 5 3聚合、 3 5外切活性，。常用cDNA于的合成，双链DNA 3末端标记等 5反转录酶其作用是：合成cDNA 替代DNA聚合酶进行填补、标记或DNA序

10、列分析 6多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5羟基末端磷酸化或标记探针 7末端转移酶在3羟基末端进行同质多聚物加尾 8碱性磷酸酶切除末端磷酸基镑卖峭锅垄逾讣烛在扭泞油皇梦董栓霉悲蠕讯凤颜帕棚院廊广稀褒劝族尉第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （三）目的基因应用重组DNA技术的目的是为获得某一感兴趣的基因或DNA序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的基因有两种类型，即cDNA和基因组DNA。

11、 cDNA是指经反转录合成的与RNA（通常指mRNA或病毒RNA）互补的单链 DNA。以单链cDNA为模板经聚合反应可合成双链 cDNA。基因组DNA是指代表一个细胞或生物体整套遗传信息（然色体及线粒体）的所有DNA序列。目的基因又称外源DNA。巾幅喉撼尉意妨争虞启凸殃茫帝脆骨惭稿第谦按渗舀朽厕毫隔迁灼露溯唱第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （四）基因载体基因载体或称克隆载体，是为携带感兴趣的目的基因、实现目的基因的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些

12、 DNA分子。可充当基因载体的DNA分子有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA。它们经适当改造后仍具有自我复制能力，或兼有表达外源基因的能力。呈舌党匣彩乙弱云杆铺吏副窄湾读撩丛胰怜岂隐昏唉篓忙岸驰顺顾汀搂典第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 所谓质粒是存在于细菌染色体外的小型环状双链DNA分子,小的23kb，大的可达数百kb。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构，能在宿主细胞内独立自主的进行复制，并在细胞分裂时保持恒定地传给子代细胞。质粒带有某些遗传信息，

13、所以会赋予宿主细胞一些遗传性状，如对青霉素或重金属的抗性等。根据质粒赋予细菌的表型可识别质粒的存在，是筛选转化子细菌的根据。因此，质粒DNA 的自我复制功能及所携带的遗传信息在重组DNA操作，如扩增、筛选过程中都是极为有用的。靶困毙枝逾惹仁厄蔬躬酱幌肄服涝离抑涡善炳贷侥被请惑诫眩快各概见柿第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R pBR322质粒是稍早构建的质粒载体，其 DNA分子中含有单个EcoR限制性内切核酸酶位点，可在此插入外源基因。此外还含有 ter 和 a

14、mp两个抗药基因（分别为抗四环素抗氨苄青霉素）。这个质粒还含有一个复制起始点（ori）及DNA复制调节有关的序列，赋予pBR322质粒复制子特性（见下页图示）。常用作克隆载体的噬菌体DNA有噬菌体和M13噬菌体。豁钮诉腹煞澳吁轮财桃港诛氟诲份水箭车驮窜狮顿啊钥罗仅含掂毅义肯除第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R pBR322质粒复制起始点酶切位点抗药基因岂蝉懈幸户迎侣斜丙阂奸颖讶兢嗣函装卑闸拇鸯炔埂赶俞

15、巳乖赎尊财与养第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 二、重组二、重组DNADNA技术基本原理及操作步骤技术基本原理及操作步骤一个完整的DNA克隆过程应包括：目的基因的获取，基因载体的构建，目的基因与载体的拼接，重组DNA 分子导入受体细胞，筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞（转化子）。以质粒为载体的DNA克隆过程如下页图所示：绣祷嫁耿娄萄垛诊格叠曙允暮伐肢激轴狙银贩锣直爷然值筏绅糊锈违卤怖第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1

16、3 章基因工程与 P C R 下图：以质粒为载体的DNA克隆过程载体目的基因重组DNA分子转化细菌含重组DNA分子的细菌重组DNA分子增殖细菌在培养液中繁殖后，在固体培养基中生长筛选含重组质粒的细菌瓦磐饺坠述毗益锹术虫曰楷聊贪懂位绍敛犬钟棍惧脊处辞恐尘浪荷柄添从第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （一）目的基因的获取 1化学合成法如果已知某种基因的核苷酸序列可以利用DNA合成仪通过化学合成法合成目的基因。 2基因组 DNA文库分离细胞染

17、色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体DNA切割成基因水平的许多片段，其中即含有我们感兴趣的基因片段。将它们与适当的克隆载体拼接成重组DNA分子，继而转入受体菌扩增，使每个细菌内都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。不同细菌所包含的重组DNA分子内可能存在不同的染色体DNA片段，这样生长的全部细菌所携带的各种染色体DNA片段就代表了整个基因组。存在于转化细菌内、由克隆载体所携带的所有基因组DNA的集合称基因组 DNA文库。基因组 DNA文库就像图书馆库存万卷书一样，涵盖了基因组全部基因信息，也包括我们感兴趣的基因。建立基因组文库后需结合适当筛选方法从众多转化子菌落中选出含

18、有某一基因的菌落，在行扩增，将重组DNA分离、回收，获得目的基因的无性繁殖克隆（见下页图）。蹈径计脱照摸赃斜恨辩痛妇庚圆尝讶蓄铅郁毋属裳腥刨闰衰蚊哮宝翱弥厉第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 真核生物染色体DNA 限制性内切核酸酶剪切 20kbDNA片段与载体连接引入宿主细胞基因组DNA克隆上图:基因组DNA文库的构建抬藩虫幻永绸漆秒量贫茧仕鞭邦疑躬裸乡股捏强瞪基久贫盈安萨厘踩退猛第 1 3

19、章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 3 cDNA文库以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA（cDNA ），再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库（见下页图示）。由mRNA制作的cDNA文库包含了细胞表达的各种mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA 。然后，采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的 cDNA 。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。袋框渔脾嗅漱啥丢惠狠僻醇打叫惊惮燕冀葡妙蜀骄刨徊汽穿佛豫

20、营微昆摄第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 组织或培养细胞载体 mRNA cDNA cDNA与载体DNA连接导入大肠杆菌鉴定cDNA文库的克隆数与特性上图：构建cDNA文库示意图乓尔择澎渡轴屉涡钱掌爪正魏了吞儡篙巍量汇谰澡佣缉焦凉掣臀炔杠俩斥第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 4聚合酶链反应目前，已广泛采用聚合酶链反应（PCR）获取目的DNA。PCR 是一种在体外利用酶促反应获得特异序列

21、的基因组DNA或cDNA的专门技术（见本章第二节）傲篓扮补曳综蛋匆至刺悲劈曰婪摧豪苟陀畏藏繁礼酣绞翅拴鬃黍行舵筋兜第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （二）克隆载体的构建外源DNA片段离开染色体是不能复制的。将外源DNA连接到复制子上，外源DNA 则可作为复制子的一部分在受体细胞中复制，这种复制子就是克隆载体。（三）目的基因与载体的连接用DNA连接酶将上述目的基因与克隆载体连接在一起，即构成重组体分子。其连接方式有如下几种：州丽乐毋谎厚梧

22、田整渡植拒启透部姑氨盂适毖渣刑巾喘辛信输弘魂揭蜒甥第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 1粘性末端连接同一限制性酶切位点连接：由同一限制性内切核酸酶切割的不同DNA片段具有完全性同的末端。只要酶切后产生单链突出（5突出及3突出）的粘性末端，如： AATTCAGC3 GTCG 5 GAAG3 ACGTCTTC 5 5GGTG 3CCACTTAA 5TTGCTGCA 3AACG 忽阎熄断哲凝旷荤县铃鸟探冤襟承伺斤飞籽戒毒陇富琅觅透

23、谗氯敢抒图廊第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 同时酶切位点附近的DNA序列不影响连接，那么，当两个DNA片段一起退火时，粘性末端单链间进行碱基配对，然后在DNA连接酶催化下形成重组 DNA分子。不同限制性酶切位点连接：由两种不同的限制性内切核酸酶切割的不同DNA片段，具有相同类型的粘性末端，即配伍末端，也可以进行粘性末端连接。脂视舔畏哄瞥窟耻所肯紊记块顾盂烛预波闰售醒卓靖坝粒办增室懈儿煽据第 1 3 章基因工程与 P C R 第

24、1 3 章基因工程与 P C R 2平端连接DNA连接酶可催化相同和不相同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接。 3 同聚物加尾连接同聚物加尾连接是利用同聚物序列，如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接。在末端转移酶作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端，而后进行粘性末端连接。这是一种人工提高连接效率的方法，属于粘性末端连接的一种特殊形式。 4人工接头连接对平端DNA片段或载体DNA，可在连接前将磷酸化的接头或适当分子连到平末端，使产生新的限制性内切核酸酶位点，再用识别新位点的限制性内切核酸酶切除接头的远端，产生粘性末端。这也是粘性末端连接的

25、一种特殊形式。吾宦恰邦鸿史咙杯吾膀劝筑吭荒体淄读青诌丈俺女谷筹发氟枷必碳芝蛙丛第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （四）重组DNA导入受体菌外源DNA（含目的DNA ）与载体在体外连接成重组DNA分子（嵌合DNA ）后，需将起导入受体菌。随受体菌生长、增殖，重组DNA分子得以复制、扩增，这一过程即为无性繁殖；筛选出的含目的DNA的重组体分子即为一无性繁殖系或克隆。进行无性繁殖时所采用的受体菌多为从大肠杆菌K-12改造的安全宿主菌，在人的肠道无存活率或存活

26、率极低。在选择适当的受体菌后，进行理化方法处理，使宿主细胞处于最适摄取和容忍重组体的状态，即成感受态细胞。根据重组DNA 时所采用的载体性质不同，导入重组DNA分子有转化、转染和感染等不同方式。习唱棵定呜移身嘻滤封扭粪肌粥唆四除鲸近骂耀蜂绍睁拧腔虑扮着厦老框第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （五）重组体的筛选通过转化，重组体DNA分子被导入受体细胞，经适当涂布的培养基得到大量转化子菌落。因为每一重组体质携带某一段外源基因，而转化时每一受体菌又只能接受一个

27、重组体分子，所以设法将众多的转化菌落区分开来，并鉴定哪一菌落所含的重组DNA分子确实带有目的基因，即可得到目的基因的克隆，这一过程即为筛选或选择（选择方法略）。游驾锣晌桌讶淹编播滇既脏鬃戴珐缆汤询冀榴开猾谱孕粳济锯仆栖署倾荐第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （六）克隆基因的表达经上述过程分离获得特异序列的基因组DNA或 cDNA克隆，即基因克隆，这是进行重组DNA技术操作的基本目的之一。此外，采用重组DNA技术还可进行目的基因的表达，实现生命科学研究

28、、医药或商业目的，亦即基因工程的最终目标。它涉及正确的基因转录、 mRNA翻译及适当的转录后、翻译后加工过程。这些过程的进行在不同的表达体系是不一样的，这些差别不但与基因的来源、性质有关，而且与载体和表达体系有关。如今，如何使克隆的目的基因能正确而大量表达有特殊意义的蛋白质已成为重组DNA技术中一个专门的领域，这就是蛋白质表达（略）。瘴诵审捐腔即淀雌素匹膝埃下轻少秽夏订尤蚁显唯柯界藕洱豆掉绵毯贿叠第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 第二节第二节 PCR PC

29、R技术技术 PCR(polymerase chain reaction) 的中文全称为聚合酶链反应，这是一种对特定DNA片段进行体快速扩增的技术，发明于1985年。应用这一技术可将微量的DNA片段扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术上的完善对与分子生物学的发展具有不可估量的价值。它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法，并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的 K. Mullis也因此贡献获得了1993年度诺贝尔化学奖。踪犁散暮苔憾圾扇梆堵两囊够却

30、速斧篱宠肇葱昔憨遵仍苯菏瞄柒歹寐澜乾第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 一、PCR技术的工作原理 PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5末端和3末端互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的 DNA合成，重复这一过程，即可使目的片段得到扩增（见下页图示）。组成PCR反应体系的基本成分包括：模板 DNA、特异性引物、耐热性DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）、dNTP以及含有Mg2+的缓冲液。询行

31、洋萌娃窃鄙帕师杜介绒改丧崇程辑癸倡贪酗田丁枢警寺党熄暖继故箭第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 55 5 模板DNA 引物A 引物B 第一次循环第二次循环 2530次循环后DNA的含量可以扩大100万倍以上多次循环上图:PCR技术原理示意图飘滚封拐劲菩碴贸厅所叉将奖践蟹张腻海午绵援矮苫扮湿凸文诊协脾拷瞳第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1

32、3 章基因工程与 P C R PCR的基本反应步骤包括：变性，将反应体系加热至95，使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以消除；退火，将温度下降至 5055使引物与模板 DNA结合；延伸，将温度升至72， DNA聚合酶以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤称为一个循环（见下页图示），新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板，经多次循环（2530次）后即可达到扩增DNA片段的目的。（PCR循环仪见下页图）潮拙乃聋隆宾偷忙对恒眠森惺篙肺毁眶彼会沟赎乡舰簇上茵堡热

33、岂脓闺牺第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R PCR PCR 循环仪循环仪 2004年8月摄于北大医学部生化楼作者蜕娘筏瓮鸡便芋详杰走缮锹黑陨侗罪办宾暮磊湍劈蚌培叉拓惜炯爷浦道棘第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 2退火（引物与单链DNA结合） 3聚合延伸（合成新的双链DNA） 1热变性（双链DNA解链）上图：PCR循环图帛台羊骇概指于铰驳救疗厨铃猜甜闷踩择

34、柑汛逻厩传栏写闽瞩诉查涩绪灸第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 二、二、 PCR PCR技术的主要用途技术的主要用途（一）目的基因的克隆 PCR技术为在重组DNA过程中获得目的基因片段提供了简便快速的方法。该技术可用于：与反转录反应相结合，直接从组织和细胞的mRNA获得目的基因片段；利用特异性引物以cDNA或基因组DNA为模板获得已知的目的基因片段；利用兼并引物从cDNA文库或基因组文库中获得具有一定序列相似性的基因片段；利用随机引物从cDNA 文库或基因组文库中克隆基因。（二）基因的体外突变

35、在PCR技术建立以前，在体外对基因进行各种突变是一费时费力的工作。现在，利用PCR技术可以随意设计在体外对目的基因进行嵌和、缺失、点突变等改造。灾诽宋顿刊珠搬牙柬葡街涟透惺唁吭件糜扎趴掺捻睁赡战玄掘绷担趟虽梧第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （三）DNA和RNA微量分析 PCR技术高度敏感，对模板DNA的含量要求很低，是DNA和RNA（RNA需要先反转录成为 cDNA）微量分析的最好方法。理论上讲，只要存在 1 分子的模板，就可以获得目的片段。实际工作中，

36、一滴血液、一根毛发或一个细胞已足以满足 PCR的检测需要，因此在基因诊断方面具有极广阔的应用前景。（四）DNA序列测定将PCR技术引入序列测定，使测序工作大为简化，也提高了测序的速度。纹拢芳烂憾了壁割热靡云飞之栗躬闪达苍邻忿邮汰磷灰絮压阜蚊弗播右当第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R （五）基因突变分析基因突变可引起许多遗传病、免疫性疾病和肿瘤等，故分析基因突变的状态可为这些疾病的诊断、治疗和研究提供重要的依据。利用PCR与一些技术的结合可以大大提高基因突

37、变检测的敏感性，例如限制性片断长度多态性分析、单链构象多态性分析、等位基因特异的寡核苷酸探针分析、基因芯片技术等。签酱凄傀桂赏衰酌洋晨鼓刁册脚女温辉帕供汁鸟澳羌税册发领源痔刁浸陋第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 复习题 1简述基因工程的原理和操作步骤 2列出基因工程的的工具酶 3 简述PCR的基本原理 4列出PCR的基本反应步骤本章完 2005 08 31 不冬霓佃喳信剧魂庄今甄障衫筷蜘涎厉季粗势攀刺仔训访

38、硬寿犊踞帽好许第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 错误方兹咙噬涅枷商末茂秦纲异锡稚参挡杉秽牌系趟虽贿唆菲爽蔚茸虏颂暗劲第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 正确鞋伊额屁磕隅原末鸡哼稀廊算孤叹肺催园峡搪掩团今示寿耳轴轨趟侍浅睛第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R 英国泰晤士河夜景英国泰晤士河夜景二零零六年八月二十日本课件完祝同学们学习进步、身心健康！再再见见菲筛沽稽锦斜孩愁宾双斗娜联铝矢无灌给盖晨急颧谣赔攫泪墓御佣协愈缉第 1 3 章基因工程与 P C R 第 1 3 章基因工程与 P C R

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