咪唑的性质和溶液配制.docx

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1、.咪唑的性质名称:Imidazole; 1,3-diazacyclopenta-2,4-dieneCAS号:288-32-4Compound ID:795分子式: C3H4N2  分子量: 68.07726 g/mol   H-Bond Donor: 1  H-Bond Acceptor: 2pKa: 7.1熔点: 90-91密度:1.23 g/cm 3外观:白色固体,或淡黄色固体UV absorption:: 260 nm Amax: 0.10: 280 nm Amax:

2、0.10咪唑与不同二价阳离子结合力强弱:(括弧内是结合常数对数,该值越大结合力越强)Ca 2+ (0.1); Mn 2+ (1.6); Fe 2+ (3.3); Co 2+ (2.4); Ni 2+ (2.9); Cu 2+ (4.2); Zn 2+ (2.0)溶液配制:咪唑的水溶性很好,可达500mg/ml,溶液澄清。可以用咪唑来配制缓冲液,其缓冲范围是pH6.2-7.8(25)。稳定性及保存:咪唑溶液很稳定,可以高温灭菌处理。2-8可保存两年。注意,应

3、当避光保存。注意:咪唑本身在紫外波段下有光吸收!蛋白结晶用的缓冲液中是否应该除去咪唑?问:过完Ni亲和层析柱子之后,洗脱液(elute)中250mM(或500mM甚至1M)的咪唑是否应该出去?答:一般情况下,单纯过一个Ni柱是不够的,即便是样品足够纯,最好还是走一个凝胶过滤层析(分子筛)。走分子筛的过程当中可以很方便将咪唑除去。如果咪唑对于你样品蛋白的稳定性和均一性很重要,则可以考虑保留一定浓度的咪唑,一般来说20mM - 200mM是比较合理的浓度范围。一些情况下,如果有咪唑存在,蛋白便不能结晶,这时就需要除去咪唑。咪唑与蛋白之间的关系不能一概而论,不能说一定是什么样的,要看是什么蛋白。例如,前面提到咪唑的合理浓度范围是20mM - 200mM,但Artem G. Evdokimov有一个晶体只能在0.6M咪唑和乙酸缓冲液中长出来,晶体解析出来以后发现每个蛋白分子上结合了两个咪唑分子。有些情况下,经Ni柱纯化获得的蛋白样品除去咪唑后发生沉淀,可能的原因是一部分Ni离子从柱子上脱离下来混在了样品当中。当咪唑被除去以后,Ni便可以与蛋白上的His标签结合造成蛋白质聚集。可以考虑利用螯合剂来除去那些多余的Ni离子。.

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