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1、解决血活使用中的常见问题1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？将血清从冷冻箱取出后，先置于 28 C冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必 须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2 8C时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻 粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在 -20 C以下储存血清， 并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O C。若存放于4 C时，请勿超过一个月。若一次无法用完一 瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产
2、品性质。要除去沉淀，离心血清(400g , 1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到 另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37 C就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37 C,沉淀会自然消失。3、实验室如何选择适合的血清？国内一致认为HYCLON的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为G旧CO比HYCLON好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞， 国产的就够用了 。此外，由于国内HYCLONEG旧C5没有生 产线，我们只能从代理商那里买，
3、而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。 所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不 高，但是其实在 国外已经做得很不错了， 如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从 那里拿，血清的品质和 HYCLONE相上下，但价格相对优惠很多。4、如何避免血清中产生沉淀？按如下操作可避免沉淀的产生：(1) 解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。(2 )血清分装冻存时，须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡)，使温度与成分均一。(3) 勿直接由-20 C直接至37 C解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发 生沉淀。(4) 勿将血清置于3
4、7 C太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成 份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。(6) 若必须做血清的热灭活，请遵守 56 C, 30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温 度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。5、培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。6、为什么要热灭活血清？加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋
5、巴细胞和巨噬细胞。 在免疫学研究，培养ES细胞、平滑肌细胞时， 推荐使用热灭活血清。7、有必要做热灭活吗？实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在 37 C环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认 为是微生物的分裂扩增。若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量！8、细胞培养中出现
6、黑点是污染吗？如何处理？一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成， 首先，要肉眼观察培养基是否混浊， 然后, 在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么， 黑点 的出现可能与以下几种情况有关：(1) 细胞生长过老，破碎的细胞残骸；(2) 血清质量不好，反复冻融的结果；(3) 配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；(4) 配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；(5) 培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组
7、织中的杂质，多次传代可以消除。9、细胞培养中如何防止黑点生成？(1 )尽可能地减少血清冻融次数。(2 ) 培养基无需37 C水浴。(3) 培养基保持最佳 PH值7.0- 7.2 。(4) 严格控制配制培养基的水质，容器定期刷洗。(5) 掌握细胞传代的最佳时机，细胞切勿生长过老。1、化冻将血清从-20度冰箱中取出，室温(或浸于自来水中)化冻(约需要30分钟至2小时，也可放于4度冰箱化冻过夜；化冻后若不马上灭活，可以放入4度冰箱中暂时保存)2、灭活(1) 放入室温的水浴锅内开始加热(同时放入一个空的血清瓶，内装 100ml自来水，插入一根温度 计，温度监控以此为准)(2) 当温度计显示56度时，停
8、止加热，改为间断加热，维持 56度(±0.5度)30分钟(±3分钟； 若不小心使温度上升超过 56度，则：若仍未超过 60度，且时间很短，比如不超过 5分钟，则仍可使 用；若超过60度，或者时间较长，则弃去不用，或者尝试用于一些普通细胞的培养)(3) 取出，自然冷却至室温(约需 1-3小时)，可分装或-20度继续冻存。3、分装(1) 转入无菌间，在超净台内将血清分装入 10ml离心管中(注意预先要将血清轻轻摇动数周、混匀; 用吸液管或吹大管吹出血清时要注意：不要吹出气泡(血清很粘稠，很容易产生气泡；如果产生气泡， 则在酒精灯火焰上过一下)(2) 放入-20度冰箱冻存(3)
9、全部操作约需要 4-6小时查了点资料，我认为胎牛血活是不用灭灭活的。灭活针对的是补体，补体系统的各成分，以无活性的前体存在丁血浆中。需要时, 再在激活物如抗原一抗体复合物等的作用下，依次被激活。那么胎牛在离开母体前是接触不到可以做激活物的抗原的，血活里的补体是无活性的，所以就不用灭活的了。推之，小牛血活需要灭活。不同看法,argue 一下：补体可以通过替代途径参与免疫反应，无免疫球蛋白不代表补体没有作用。是否需要灭活主要决定丁细胞培养体系能否激活补体。如果要加入一些损伤明显 的因子，破坏细胞膜，暴露了糖脂，可以激活补体的。这种情况下的血活要求灭 活。小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项点击次数
10、：1269发布时间：2010-10-8来源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候，通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清，新生牛 (小牛)血清(Calf serum, CS) 采自出生10至14天的小牛。组份与比例不同：两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组 份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长， 而有些细胞只需小牛血 清即可，使用浓度不同，一般在 5%-10%有特殊要求的浓度在 20%血清保存和使用须注意：血清应保存在-5C至-20C，若存放在 4C不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于 2-8C冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37C水浴或者温箱中，如放在 37C解冻，颜色加深,粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20C保存，避免反复冻融。