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1、生物化学实验教学大纲 一实验目的二实验内容三实验学时安排四考试方法五参考教材 一实验目的生物化学是一门实验性学科，其所有知识均来自于实验。本课程着眼于学生学习和掌握生物化学课程的基本理论、基本知识以及实验技能，培养学生具有初步分析问题和解决问题的能力。生物化学实验课通过学习滴定、比色、纸层析、电泳、生化制备等基本实验技术，分析研究糖、脂、蛋白质、核酸、酶、维生素等生化物质及某些代谢过程，培养学生具有初步的科学实验能力及严格的科学作风，同时验证生物化学的某些基本理论知识，加深感性认识，并锻炼初步的综合实验能力。返回顶部二实验内容
2、3; 实验一 糖的呈色反应及还原糖的检验一实验目的学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法；了解鉴定还原糖的方法及其原理。二实验内容Molish反应、蒽酮反应、Seliwanoff反应、Bial反应、Fehling反应。 三.实验过程1. 呈色反应（1） Molish 反应（2） 蒽酮反应（3） Seliwanoff反应（4） Bial反应2. 还原糖的检验（1） Fehling反应（2） Benedict反应（3） Barfoed反应四.作业与思考1. 列表总结和比较本实验7种颜色反应的原理及其应用.2. 应用Molish反应和Seliwanoff反应分析未知样品时，应注意些什么问题？3. 举例说
3、明那些糖属于还原糖.· 实验二 脂类组成对脂类单分子层通透性的影响一、实验目的学习制作脂类单分子层和鉴定它的原理及方法，比较不同脂类所形成的脂类单分子层通透性的差异。二、实验内容以脂类单分子层作为模式膜，用甲烯蓝为指示剂，观察不同脂类单分子层通透性的影响。三.实验过程1. 溶液准备2. 分光光度计测样四.作业与思考1. 试述生物膜的基本结构与功能2. 解释下列名词：双亲媒性分子、脂类单分子层、磷脂双分子层、膜的内在蛋白质和外在蛋白质.· 实验三 蛋白质浓度的测定（1）Folin-酚法一、 实验目的学习Folin-酚法的原理及方法，制备标准曲线，测定未知样品中蛋白质含量。二、
4、实验内容制备Folin-酚法标准曲线，测定未知样品蛋白质浓度。三.实验过程1. 制备Folin-酚法标准曲线2. 测定未知样品蛋白质浓度3. 计算四.作业与思考1. Folin-酚法测定蛋白的原理是什么？2. 有哪些因素可以干扰Folin-酚测定蛋白含量？3. 作为标准蛋白的牛血清清蛋白或酪蛋白在应用时有何要求？· 实验四 蛋白质浓度测定（2）紫外线吸收法一、 实验目的学习紫外线（UV）吸收法测定蛋白质含量的原理，了解紫外分光光度计的构造原理，掌握它的使用方法。二、实验内容标准曲线的绘制及未知浓度蛋白质溶液的测定。三.实验过程1. 标准曲线的绘制2. 样品测定四.作业与思考1. 本法
5、与其它测定蛋白质含量法相比，有哪些优点？2. 若样品中含有干扰测定的杂质，应如何校正实验结果？· 实验五 氨基酸的分离与鉴定滤纸层析法一、 实验目的了解氨基酸滤纸层析的原理及操作方法。二、实验内容进行氨基酸的纸层析及定性鉴定。三.实验过程1. 滤纸的剪裁2. 点样3. 展层4. 定性鉴定5.定量测定四.作业与思考1. 做好本实验的关键是什么？2. 实验操作过程，为何不能用手接触滤纸？3. 影响Rf 制的因素有哪些？· 实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、 实验目的了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术，测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。二、实验内容进行血清
6、蛋白醋酸纤维素薄膜电泳并进行结果判断。三.实验过程1. 仪器与薄膜的准备2. 点样3. 电泳4. 染色与漂洗5. 透明6. 结果判断与定量四.作业与思考1.根据人血清中血清蛋白各组分等电点，如何估计它们在pH8.6的巴比妥巴比妥钠电解缓冲液中移动的相对位置2.简述醋酸纤维素薄膜电泳原理及优点· 实验七 蛋白质和氨基酸的呈色反应一、 实验目的学习常用的鉴定蛋白质氨基酸的方法及其原理；学习几种特定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。二、实验内容双缩脲反应、茚三酮反应、黄色反应、茚三酮反应。三.实验过程1. 加样2. 观察四.作业与思考1. 综合分析、对比蛋白质和氨基酸各种鉴定方法的特点和用途？
7、2. 如果蛋白质水解作用一直进行到双缩脲反应呈阴性结果，能对此作何结论？3. 茚三酮反应的阳性结果是否是同一色调？若不是，为什么？· 实验八 蛋白质的沉淀、变性反应一、 实验目的了解蛋白质的沉淀反应、变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系；学习盐析和透析等生物化学的操作技术。二、实验内容可逆沉淀反应，不可逆沉淀反应。 三.实验过程1. 蛋白质的可逆沉淀反应蛋白质的盐析作用2. 蛋白质的不可逆沉淀反应（1） 重金属沉淀蛋白质（2） 有机酸沉淀蛋白质（3） 无机酸沉淀蛋白质（4） 加热沉淀蛋白质 3.蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的比较四.作业与思考1. 为什么鸡蛋清蛋白可用作铅中毒或汞中
8、毒的解毒剂？2. 蛋白质分子中的那些集团可以与（1） 重金属离子作用而使蛋白质沉淀？（2） 有机酸、无机酸作用而使蛋白质沉淀？3. 高浓度的硫酸铵对蛋白质溶解度有何影响，为什么？4. 在蛋白质可逆沉淀反应的实验中，为何要用蛋白质氯化钠溶液？· 实验九 酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法一、 实验目的了解并掌握稀碱法提取RNA及地衣酚显色法测定RNA含量的基本原理及具体方法。二、实验内容用稀碱法提取酵母细胞RNA，并用地衣酚显色法测定。三.实验过程1. 酵母RNA提取2. RNA地衣酚显色测定（1） 标准曲线的制作（2） 样品的测定（3） RNA含量的计算四.作业与思考1.用你所学过的
9、化学知识，分析三种催化剂：FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O和CuO,哪种催化剂的催化效果更好？ 2.地衣酚反应中，干扰RNA测定的因素有哪些？如何能减少它们的影响？· 实验十 动物组织DNA的制备一、 实验目的学习盐溶液法从动物组织中提取脱氧核糖核酸的原理及操作方法。二、实验内容以猪肝为原料用不同浓度的盐溶液提取其中的脱氧核糖核酸。三.实验过程1. DNA的提取2. DNA含量的测定（1） 标准曲线的制定（2） 样品的测定（3） DNA含量的测定四.作业与思考1. 结合本人实验操作的体会，试述在提取过程中应如何避免大分子DNA的降解和断裂。2. DNA制品
10、都可以用哪几种方法测定其含量？试从它们的原理、准确性等方面加以比较。· 实验十一 核酸浓度测定（1）定磷法一、 实验目的掌握利用核酸定磷测定法测定核酸的含量。二、实验内容通过对总磷、无机磷的测定，计算未知样品中的核酸浓度。三.实验过程1. 定磷标准曲线的制定2. 测定总磷量（1） 配制RNA样品溶液（2） 样品的消化、总磷量和回收率测定（3） 无机磷的测定 3.核酸含量计算四.作业与思考1. 测定磷的回收率有何意义？2. 为什么所用水的质量、钼酸铵的质量和显色时酸的浓度对测定结果影响较大？· 实验十二 核酸浓度测定（2）紫外线吸收法一、 实验目的了解紫外线（UV）吸收法测定
11、核酸浓度的原理，并进一步了解紫外分光光度计的使用方法。二、实验内容用紫外线吸收法测定核酸浓度。三.实验过程1.标准曲线的绘制2.样品蛋白质浓度的测定四.作业与思考1. 干扰本实验的物质有哪些？2. 设计排除这些干扰物的实验。· 实验十三 维生素A、B1、B2的定性鉴定一、实验目的了解维生素A、B1、B2定性鉴定的原理及方法。二、实验内容维生素A的定性鉴定以及维生素B1、B2的定性鉴定。三.实验过程1. 维生素A2. 维生素B1（重氮试剂法）3. 维生素B1（荧光法）4. 维生素B2四.作业与思考1. 举出含有维生素A、B1和B2最丰富的天然食物。2. 说明4种定性鉴定维生素A、B1和
12、B2的基本原理。3. SbCl3呈色反应检测维生素A实验的重要环节是什么？4. 试把上述4种鉴定方法之一改编为定量检测方法。· 实验十四 维生素C的定量测定一、实验目的了解用2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量的原理及方法。二、实验内容用2，6二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素C的含量。三.实验过程1. 提取2. 标准液的滴定3. 样品滴定4. 计算四.作业与思考1.为了测定准确的维生素C含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？2.试简述维生素C的生理意义。· 实验十五 酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响一、实验目的了解酶反应的激活剂、抑制剂，了解温度对酶活性的影
13、响。二、实验内容了解酶的激活剂、抑制剂、酶的最适反应温度。三.实验过程四.作业与思考1. 激活剂可分哪几类？本实验中的氯化钠、硫酸铜属于哪种类型？2. 抑制剂与变性剂有何不同？试举例说明。3.酶反应的最适温度是酶反应的物理常数吗？它与哪些因素有关？· 实验十六 血清谷丙转氨酶的测定（King氏法）一、 实验目的掌握血清谷丙转氨酶（SGPT）活力测定的方法，学习绘制标准曲线，并学习如何设计实验。二、实验内容用King氏法测定血清谷丙转氨酶的活性。三.实验过程1. 制备标准曲线2. 绘制标准曲线3. 样品及回收率测定4. 结果计算（1） 标准曲线测定法（2） 标准管测定法（3） 计算回收
14、率四.作业与思考1. 什么叫做转氨基作用？根据所学理论阐明转氨基作用在蛋白质的合成与分解及糖、脂肪代谢中有何重要作用？2. 回收率测定在实际工作中有何用途？· 实验十七 乳酸脱氢酶活力测定一、实验目的学习LDH活力测定原理，测定猪肉提取液LDH活力二、实验内容利用动物肌肉制备乳酸脱氢酶的组织提取液，用紫外分光光度法测定LDH的活力。三.实验过程1. 制备肌肉匀浆2. LDH活力测定3. 蛋白质含量测定4. 数据处理四.作业与思考 1.简述用紫外分光光度法测定以NAD+为辅酶的各种脱氢酶测定原理。· 实验十八 聚合酶链式反应（PCR）掌握基本PCR技术的原理，学会PCR扩增过
15、程中各步骤的操作，了解PCR扩增仪的使用方法，学会扩增结果的判读（琼脂糖凝胶电泳法）。二、实验内容以大肠杆菌23SRNA的DNA中106476bp的特异性区域为扩增目的片段，通过PCR技术的基本要求，扩增得到370bp的扩增产物，并通过琼脂糖凝胶电泳的方法对结果进行分析。 返回顶部三实验学时安排（总课时为54学时）：第一学期实验序 号实 验 名 称周 次学 时类 型实验1糖的呈色反应及还原糖的检验3-43验 证实验2脂类组成对脂类单分子层通透性的影响5-63验 证实验3蛋白质浓度测定（1）Folin酚法7-83综 合实验4蛋白质浓度测定（2）紫外线吸收法9-103综 合实验5氨基酸的分离与鉴定
16、滤纸层析法11-124综 合实验6血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳13-144综 合实验7蛋白质和氨基酸的呈色反应15-162验 证实验8蛋白质的沉淀、变性反应15-162验 证实验9酵母RNA的提取与地衣酚显色测定法17-184验 证第二学期实验序 号实 验 名 称周 次学 时类 型实验10动物组织DNA的制备3-43综 合实验11核酸浓度测定（1）定磷法5-63综 合实验12核酸浓度测定（2）紫外线吸收法7-83综 合实验13维生素A、B1、B2的定性鉴定9-103验 证实验14维生素C的定量测定9-104综 合实验15酶的激活剂、抑制剂及温度对酶的活性的影响11-124验 证实验16血清谷丙转氨酶的测定（King氏法）13-142综 合实验17乳酸脱氢酶活力测定15-162综 合实验18聚合酶链式反应17-184创 新备注：根据实际情况选做十六至十八个实验。返回顶部 四考试方法 每次实验上交实验报告，学期末汇总平均分数。返回顶部 五参考教材生物化学实验原理和方法李建武等编. 北京大学出版社。返回顶部 12 / 12文档可自由编辑打印