《实验二 中药薄层色谱扫描法鉴定.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验二 中药薄层色谱扫描法鉴定.docx（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、.实验二 中药薄层色谱扫描法鉴定【实验原理】薄层扫描法是用一束长宽可以调节的、一定波长、一定强度的光照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而求得物质含量的方法。薄层扫描仪可分为单光束、双光束、双波长等类型。每台仪器都包括主机、数据处理及信号输出等部分。大多数薄层扫描仪的分光器为光栅，少数为棱镜，极个别的用滤光片。其测量范围是光栅为200800nm，棱镜为2002500nm。光源室具有可见光源钨灯，波长范围为400800nm；紫外光源氘灯，波长范围为200400nm；荧光光源为氙灯或汞灯。操作时可通过光源选择杆来变换光源选择镜的位置。检测器一般为光电倍增管。测定方法可分为吸收测定
2、法、荧光测定法及荧光猝灭法，其中吸收测定法根据光测定方式的不同又可分为透射法、反射法、透射反射法。测光形式分为单波长扫描、双波长扫描。扫描方式根据光束轨迹的不同，又可包括直线扫描（线型扫描）、锯齿扫描（曲折扫描）、圆形扫描、倾斜扫描、多通道自动扫描。【目的要求】 1.熟悉薄层扫描法的基本原理。 2.熟悉用薄层扫描法测定中药牛黄中胆酸的含量。【仪器、试剂、材料】1.仪器 岛津CS-9301型双波长飞点薄层扫描仪或CAMAG薄层扫描仪，CAMAG LINOMAT IV半自动点样仪，电子天平，超声波振荡器。2.试剂 胆酸对照品，甲醇、乙醇、乙酸乙酯、异辛烷、盐酸、乙酸丁酯、冰醋酸、甲酸、氢氧化钠、无
3、水硫酸钠、硫酸均为分析纯。3.药材 牛黄细粉【实验内容】用薄层扫描法测定牛黄中胆酸的含量。【实验方法】1.供试品溶液的制备 取本品细粉约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25m1，蒸干，残渣加20氢氧化钠溶液l0m1，加热回流2小时，冷却，加稀盐酸l9ml调节pH至酸性，用乙酸乙酯提取4次(25m1,25m1,20m1,20m1)，提取液均用同一铺有少量无水硫酸钠的脱脂棉滤过，合并提取液，回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至l0ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.对照品溶
4、液的制备 另精密称取在105干燥至恒重的胆酸对照品，加甲醇制成每1m1含0.48mg的溶液，作为对照品溶液。3.扫描测定条件及计算 精密吸取供试品溶液2l、对照品溶液ll与3l，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙酸丁酯-冰醋酸甲酸(8:4:2:1)为展开剂，展至14l7cm，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，放入薄层扫描仪中，波长S=380nm，R=65Onm，锯齿扫描，测量供试品吸光度积分值与对照品吸光度积分值，根据下列公式，按干燥品计算，含胆酸(C24H40O5)不得少于4.0%。注：（1）A：样品峰面积； （2）A1：1l对照品峰面积； （3）A2：3l对照品峰面积； （4）M1：对照品的低点样量（1l）； （5）M2：对照品的高点样量（3l）； （6）CS：对照品的浓度（mg/ml）； （7）M：样品的点样量（2l）； （8）W：样品的取样量(g)； （9）B：所测样品的水分百分含量（10）V：稀释倍数；例如：本品的稀释倍数为20，即10ml乘以50ml除以25ml【作 业】1.薄层扫描法的基本原理是什么？2.薄层扫描定量的影响因素是什么？: